miR-542-3p生物信息学分析及对未成熟猪睾丸支持细胞的影响

为了探讨miR-542-3p的生物信息学信息及其对未成熟猪睾丸支持细胞的影响,试验通过AliBaba 2.1和AnimalTFDB 3.0软件预测miR-542-3p转录因子结合位点(TFBS);并分析miR-542-3p在不同物种间的保守性;采用CCK-8试剂、ATP试剂盒、流式周期检测试剂盒和实时荧光定量PCR方法探究过表达miR-542-3p对未成熟猪睾丸支持细胞的影响;利用TargetScan、miRDB和miWalk 3种在线软件预测miR-542-3p靶基因后取交集,并对猪源靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路富集分析;最后利用Cytoscape 3.2.0软件构建TF-miR-542-3p-靶基因相互作用网络。结果表明:经预测miR-542-3p受GATA1、TBP、Sp1、Ap1、SRF等多个转录因子调控,且在多物种间具有高度的保守性;miR-542-3p可显著或极显著抑制未成熟猪睾丸支持细胞增殖活性(P<0.05或P<0.01),极显著降低细胞内ATP含量(P<0.01),显著或极显著抑制细胞增殖基因和周期基因的相对表达量(P<0.05或P<0.01),进而抑制细胞周期和细胞增殖;转染miR-542-3p mimic后G1期猪睾丸支持细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例极显著降低(P<0.01);共发现7个猪源miR-542-3p潜在靶基因,miR-542-3p调控的UBE2E1基因相对表达量极显著下降(P<0.01),KCMF1、ILK基因相对表达量显著下降(P<0.05),HIPK3基因相对表达量极显著升高(P<0.01),AP3D1、PLEKHM3基因相对表达量显著升高(P<0.05),各靶基因主要在激酶活性和结合上发挥作用;miR-542-3p靶基因主要参与MAPK、cAMP、TGF-β和cGMP-PKG等信号通路;构建的TF-miR-542-3p-靶基因相互作用网络包含5个转录因子和50个mRNA。说明miR-542-3p受多种转录因子调控,在多物种间高度保守,能够抑制未成熟猪睾丸支持细胞增殖,并通过调控下游靶基因的表达参与MAPK、cAMP和TGF-β等信号通路,从而调控未成熟猪睾丸支持细胞生长。

2012年湖南省奶业的发展状况与前景展望

为促进湖南省奶业发展,本文对2012年湖南省奶业信息进行了监测。监测结果表明,2012年湖南省奶牛存栏数比2011年下降59.8%。生鲜乳价格持续走低,而奶牛饲料价格普遍上涨。生鲜乳质量安全状况一般,防治费用较高,部分乳制品加工企业拖欠奶款严重,使奶牛养殖面临困境。

MTDFREML法估算沙子岭猪部分性状的遗传参数

遗传参数是畜禽遗传改良基础,研究通过利用MTDFREML软件对沙子岭猪的性状进行遗传参数计算,为将来沙子岭猪的遗传评估等工作做铺垫。沙子岭猪的主要性状为繁殖性状和生长发育性状。其中繁殖性状包括产活仔数、初生窝重、21日龄活仔数、21日龄窝重、35日龄活仔数和35日龄窝重,各性状遗传力和遗传相关范围为0.15~0.28与0.31~0.51;生长发育性状包括达50 kg体重日龄,达50 kg体重活体背膘厚,6月龄体长、体高、胸围、胸深、胸宽,各性状遗传力范围为0.33~0.44;遗传相关除达50 kg体重活体背膘厚与其他各性状为负相关(-0.30^-0.10)外,其余性状均为正相关(0.19~0.83)。繁殖性状属低遗传力性状,不适用于个体表型选择;而生长发育性状属于中等遗传力性状,生长发育性能较为优秀的个体可以根据表型留种。

浅议农业科技期刊的发展及《SCI》收录的主要畜禽类期刊

本文总结了核心期刊的评价方法和SCI的来源，分析了国内农业科技期刊在发展中存在的问题，并提出了发展建议。根据2016年SCI（TCR—CD）对畜禽类期刊的收录情况，介绍国际上20种重要的SCI畜禽类科学期刊，以便于该专业的科研人员投稿和检索，将中国农业科研成果更好的介绍给世界。

2013年湖南省奶业发展现状与前景展望

本文对2013年湖南省奶业的发展现状进行了调研,调研结果表明,虽然2013年湖南省奶牛存栏数比2012年下降0.96%,但是生鲜乳价格持续上涨,而且奶牛饲料使用更加科学合理。同时,生鲜乳质量安全状况得到了很大改善。通过政府的支持和企业改组,部分乳制品加工企业拖欠奶农的奶款已经基本还清,同时引进国内外先进设备和管理思路,使湖南奶牛养殖业进入新的发展阶段。

猪CCKAR基因两SNP位点的遗传多态性分析

试验以9个猪品种/品系(5个地方品种:宁乡猪、大围子猪、沙子岭猪、桃源猪、五指山猪;3个外来品种:大白猪、长白猪、杜洛克猪;1个杜长大杂交品系)共计687头猪为研究对象,通过PCR-RFLP方法分析了CCKAR基因+179A/GHpy8I酶切位点和+471C/GSatI酶切位点的基因频率和基因型频率,并进行了Hardy-Weinberg平衡检验。在所有猪种群体中,CCKAR基因+179A/GHpy8I酶切位点和+471C/GSatI酶切位点均存在较丰富的遗传多态性。在+179A/GHpy8I酶切位点中除宁乡猪中没检测到AA基因型个体外,其他品种中都检测到AA、AG、GG3种基因型个体的分布;而CCKAR基因+471C/GSatI酶切位点都检测到了CC、CG、GG基因型个体的分布。

乡村畜禽养殖粪污资源化研究与应用

文章主要针对畜禽养殖废弃物的概念、畜牧养殖污染危害、畜禽粪便污染物资源利用现状、畜禽液体粪污资源化利用及绥宁县畜禽水产养殖限养区和适养区整治方案进行论述.

肉牛产业竞争力及湖南省绥宁县肉牛养殖现状

为促进乡村肉牛产业持续发展,文章针对国内外肉牛产业现状,对湖南省绥宁县肉牛产业发展现状及肉牛养殖条件进行论述。

沙子岭猪睾丸组织发育过程中差异表达基因的筛选及注释

本研究采用RNA-seq技术对60(DS)、90(DN)、120(DT)、150(DF)日龄沙子岭猪睾丸组织进行转录测序,筛选差异表达基因并进行功能注释,从而为进一步研究猪睾丸组织发育和精子生成的分子调控机制奠定理论基础。结果表明,各文库获得的序列数量共计1 095 135 628条,164.26 GB,其中比对至猪参考基因组的序列比例为73.07%~75.64%,共有25 491条转录本,对应21 606个基因;DN VS. DS组的差异表达基因数量为1 606个,其中1 216个上调基因显著富集于40条GO项,390个下调基因显著富集于166条GO项;DT VS. DN组的差异表达基因数量为180个,其中97个下调基因显著富集于37条GO项;DF VS.DT组的差异表达基因数量为438个,其中243个下调基因显著富集于22条GO项。说明沙子岭猪睾丸组织发育过程中基因表达存在明显差异,尤其是60日龄至90日龄期间,这些差异表达基因可为进一步研究沙子岭猪睾丸组织发育和精子生成的分子机制提供参考依据。

SMAD6对猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的影响

睾丸未成熟支持细胞的增殖活性对种公畜繁殖性能有重要影响,睾丸基因组DNA甲基化(5mC)不同发育阶段特异性引起的基因差异表达可以调控支持细胞的增殖活性。在课题组前期研究中,SMAD6被鉴定出是睾丸发育过程中受3′UTR甲基化水平调控的枢纽基因之一,但其生物学功能尚未被发掘。本研究旨在探究SMAD6对猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的作用。在体外培养的猪未成熟支持细胞中过表达SMAD6或干扰SMAD6表达后,检测细胞周期和增殖相关基因的相对表达量、细胞增殖情况、细胞ATP水平、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达情况。结果显示:过表达SMAD6后细胞周期及增殖相关基因的相对表达量上升(P<0.05或P<0.01)、细胞增殖增加(P<0.05或P<0.01)、细胞ATP水平升高(P<0.01)、细胞的凋亡率下降(P<0.05)、促凋亡相关蛋白BAX和Caspase3的表达降低(P<0.05);干扰SMAD6表达结果则与之相反。研究结果提示,SMAD6促进猪未成熟支持细胞的增殖且抑制其凋亡。

miR-191靶向BDNF基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进猪未成熟支持细胞增殖

睾丸支持细胞数量是影响精子生成能力的主要因素之一,microRNA(miRNA)参与调控猪未成熟支持细胞的发育过程,然而,大多数被鉴定出的miRNA对支持细胞的作用及其机制尚不明确。基于本课题组前期高内涵筛选结果,本文进一步通过流式细胞术、蛋白免疫印迹和双荧光素酶报告基因等方法,研究了miR-191调控猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的作用机理。结果表明:过表达miR-191显著促进细胞周期由G1期进入S期和G2期,细胞增殖能力显著增强,细胞凋亡率显著降低;而抑制表达miR-191则与之相反。双荧光素酶报告基因系统验证miR-191直接靶向BDNF基因3′-UTR。抑制表达BDNF基因促进细胞周期进入S期,并促进细胞增殖而抑制细胞凋亡,与过表达miR-191的作用一致。共转染试验结果显示,BDNF基因可以拮抗miR-191对细胞增殖和凋亡的调控作用。此外,过表达miR-191和抑制表达BDNF基因均可显著促进PI3K/AKT信号通路中关键蛋白PI3K和AKT的磷酸化水平,且BDNF基因同样拮抗miR-191对PI3K和AKT蛋白的调控作用。本研究结果证实miR-191靶向BDNF基因,通过激活PI3K/AKT信号通路促进猪未成熟支持细胞增殖且抑制其凋亡,为进一步解析miR-191调控猪精子生成的生物学功能提供了理论基础。

猪microRNA组学研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类长约22 nt的非编码小RNA,广泛存在于各种生物中,调节生物体生长、发育和凋亡等过程。研究表明,miRNA在猪肌肉、脂肪、生殖系统以及免疫系统等的发育过程中发挥着重要的调控作用。此外,高通量的新一代测序技术在猪miRNA的挖掘和差异表达研究中发挥着巨大的作用。文章综述了高通量的新一代测序技术在挖掘猪miRNA中的应用以及一些miRNA在猪脂肪代谢、肌肉发育、卵母细胞成熟和B、T淋巴细胞发育中的调控作用,旨在为猪miRNA的研究提供参考,为利用miRNA调控和改善猪肉品质、生长性能、繁殖性能以及免疫机能提供理论基础和研究思路。

miR-362靶向ZNF644基因调控猪未成熟支持细胞的增殖和凋亡

睾丸组织中未成熟支持细胞的增殖能力决定成熟支持细胞的数量,进而制约成年雄性动物的精子生成能力。研究表明microRNA(miRNA)参与调控猪未成熟支持细胞的增殖和凋亡,但大部分鉴定出的miRNA功能仍不明确。本文基于前期RNA-seq数据筛选结果,研究了miR-362对猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的调控作用。首先利用生物信息学方法预测miR-362的靶基因,通过qRT-PCR技术检测miR-362和ZNF644基因在不同发育阶段的猪睾丸组织中的表达水平以及在猪未成熟支持细胞中过表达或抑制表达miR-362后ZNF644基因的表达水平,采用双荧光素酶报告基因系统验证miR-362与ZNF644基因之间的靶向关系。结果显示,miR-362与ZNF644基因3′UTR具有一个潜在的结合位点,miR-362和ZNF644基因在猪睾丸组织中的mRNA表达水平显著负相关(r=-0.723,P<0.01),miR-362和psi CHECK2-ZNF644-WT 3′UTR共转染组的双荧光活性显著降低,且miR-362显著调节ZNF644基因的表达水平,表明miR-362靶向ZNF644基因并抑制其表达水平。为进一步检测过表达miR-362或抑制表达ZNF644基因对猪未成熟支持细胞增殖和凋亡的影响,通过流式细胞术检测细胞周期,CCK8和EdU试剂盒检测细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI方法和qRT-PCR技术检测细胞凋亡情况及凋亡相关基因的表达水平。结果表明,过表达miR-362后,猪未成熟支持细胞周期被阻滞在G_1期,抑制表达ZNF644基因后,猪未成熟支持细胞被阻滞在G2期,细胞增殖能力显著减弱,细胞凋亡率显著提高,细胞凋亡相关基因呈促进凋亡的差异表达。本研究结果证实miR-362靶向ZNF644基因抑制猪未成熟支持细胞的增殖而促进其凋亡,为深入研究miR-362在猪精子生成过程中的生物学功能提供了理论基础。

基因组选择在猪杂交育种中的应用

基因组选择是指在全基因组范围内通过基因组中大量的标记信息估计出个体全基因组范围的育种值,可进一步提升育种效率和准确性,目前在猪纯繁育种中得到广泛应用。但有研究表明,现有的基因组选择方法在猪杂交育种上的应用效果并不理想,在跨群体条件下预测准确性极低。杂交作为养猪业中最为广泛的育种手段之一,通过结合基因组选择理论进一步提升猪的生产性能,具有重要的经济和研究价值。本文综述了基因组选择的发展及其在猪育种中的应用现状,并结合国内外猪杂交育种的方式,分析了目前基因组选择方法在猪杂交育种应用方面的不足,旨在为未来基因组选择在猪杂交育种中的合理应用提供参考。

发酵液体饲料在养猪生产中的应用

本文综述了发酵液体饲料在养猪生产中的应用,并简要介绍了当前我国发酵液体饲料应用上存在的问题和解决方案。

miR-24基因家族进化及其在猪睾丸组织中的表达变化分析

通过miRBase数据库检索miR-24基因家族序列,利用Ensembl数据库信息确定miR-24家族在不同物种中的基因组定位,采用MEGA 5.0构建miR-24基因家族的系统进化树,并利用RT-qPCR检测miR-24-1及miR-24-2在沙子岭猪睾丸组织不同发育期(E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150、D180)的表达变化。在miRBase数据库检索32个物种共66条序列,且各序列均具有高度保守性。基因组定位显示大部分物种的miR-24基因位于常染色体上。RT-qPCR结果显示,miR-24基因家族2个成员(miR-24-1、miR-24-2)在沙子岭猪睾丸不同发育阶段呈现出协同表达的规律。本研究对miR-24基因家族进行系统进化分析并检测其在沙子岭猪睾丸组织中表达变化规律,为进一步探明miR-24基因家族的功能及作用机制奠定基础。

不同乳酸菌组合对发酵液体饲料品质的影响

本试验用液态发酵法研究不同菌种来源对乳酸菌发酵液体饲料(fermentation liquid feed,FLF)感官、pH和菌落计数的影响,分别以乳酵素(Lactobacillus enzymes,LE)、乳酵素+基础料(enzymes mixture,EM)、5 mg/kg乳酸菌种+基础料(spawn mixture,SM)和空白对照组(control,CON)作为研究对象,所有发酵罐保持发酵底物∶水=1∶3,(36±1)℃恒温发酵192 h,每隔24 h做1次感官评定和pH测定;取发酵72 h的样品进行培养,分别计数培养48和72 h的菌落。结果表明,EM和SM均具有良好的感官性能,保质期长,其活菌落计数均极显著高于LE与对照组(P<0.01),但EM与SM相比差异不显著(P>0.05);各组的pH均先降低后升高,LE处理组pH显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于其他试验组。提示,LE发酵方式不能改善FLF品质,EM和SM发酵方式的饲料品质优于LE,EM与SM发酵效果类似。

不同NDF与淀粉比例饲粮在奶牛瘤胃的降解特性

本研究旨在探讨不同中性洗涤纤维（NDF）与淀粉（Starch）比例饲粮在奶牛瘤胃的降解特性。选用青贮玉米（Zea mays）、燕麦（Avena sativa）干草和玉米籽粒调整饲粮中性洗涤纤维和淀粉比例,配制0.86（Ⅰ）、1.13（Ⅱ）、1.56（Ⅲ）和2.38（Ⅳ）4种全混合日粮,以体况良好、平均体重为（600±21）kg且安装永久性瘤胃瘘管的3头荷斯坦奶牛为试验动物,通过尼龙袋法对4种饲粮的干物质（DM）、有机物（OM）、粗蛋白质（CP）、中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）瘤胃降解参数和有效降解率进行评定。饲料样品在瘤胃内的培养时间分别为2、4、8、16、24、36、48和72 h。结果表明,不同中性洗涤纤维与淀粉比例的日粮常规营养成分存在差异。4种日粮的DM、OM、CP、NDF和ADF瘤胃有效降解率之间存在差异,其高低顺序分别为Ⅰ组〉Ⅱ组〉Ⅲ组〉Ⅳ组、Ⅰ组〉Ⅱ组〉Ⅲ组〉Ⅳ组、Ⅱ组〉Ⅰ组〉Ⅳ组〉Ⅲ组、Ⅰ组〉Ⅱ组〉Ⅳ组〉Ⅲ组、Ⅰ组〉Ⅳ组〉Ⅲ组〉Ⅱ组。由此可见,从4组饲粮在奶牛瘤胃的消化特性来看,NDF与淀粉比例为0.86-1.13的营养价值较高,本研究结果为科学、合理地配制奶牛日粮从而有效利用饲料资源提供依据。

规模化奶牛养殖场污染的控制措施

随着奶牛养殖业的不断发展,奶牛养殖场产生的粪便、污水等污染物对人畜健康、畜牧生产、自然环境造成了各种危害。文章综述了当前减少奶牛场污染的控制措施,并简要探讨规模化奶牛场生态养殖模式的建立。

沙子岭猪GSG1基因克隆、生物信息学分析及组织表达

采用RACE技术克隆猪GSG1(Germ Cell-specific gene 1)基因cDNA1全长并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR对GSG1基因在沙子岭猪睾丸组织8个不同发育阶段(E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150和D180)和30日龄时9个不同组织(睾丸、肌肉、小肠、肺、心脏、肾脏、肝脏、脾脏和脂肪)的表达量。结果表明:GSG1基因cDNA全长为1 257 bp,含1个长993 bp的开放阅读框,编码330个氨基酸。实时荧光定量PCR结果显示,GSG1基因在睾丸组织中的表达量最高,显著高于其余8个组织(P<0.05),且其在肌肉、小肠、肺脏、心脏、肾脏和脂肪中的表达水平极低;GSG1基因在睾丸组织的E90、D1、D30和D60这4个发育时期的表达量较低,显著低于D90、D120、D150和D180这4个时期(P<0.01)。本试验首次克隆了猪GSG1基因cDNA全长并检测了其在不同组织和不同发育阶段睾丸组织的表达,为进一步研究其调控猪睾丸发育和精子生成的机制奠定了理论基础。