2种抗应激处理对“肉牛运输应激综合征”的疗效对比研究

本试验旨在探讨肉牛启运前进行抗应激处理对降低肉牛引入后发病的效果,在运输前,对第1批的69头牛进行以肌肉注射科特壮为主的综合用药处理,对第2批的39头牛进行肌肉注射牛支原体灭活疫苗的处理,运输时间分别为32 h和36 h,途中不提供水和任何食物,牛运达后继续观察30 d,记录环境温湿度及发病情况,结果显示几乎肉牛始终都处于热应激的状态中;第1批牛和第2批牛在运达后陆续发病,2批牛分别在运后第9天和第13天前时,试验组均比对照组的累积发病数低,但之后到运后1个月,试验组又均比对照组的累积发病数高;运后第1批牛要比第2批牛的发病率和死亡率分别高1.23%和20.29%。

牛支原体病研究进展

牛支原体是一种非常重要但容易被忽视的病原,能导致牛肺炎、乳腺炎、关节炎等多种疾病。国外已证实,该病给养牛业造成巨大的经济损失。目前,对牛支原体的毒力因子及免疫机理均不十分清楚,缺少其相应的有效疫苗和检测方法,而且,牛支原体对许多常用抗生素不敏感,从而,给临床防治带来很大困难。我国自2008年首次报道了牛支原体肺炎,但对牛支原体病危害的认识还很不全面,妨碍了对该病的有效防治。论文分析归纳了牛支原体病的国内外研究概况,从病原学、流行病学、临床症状与病理变化、诊断、毒力因子、免疫与疫苗、防治措施等方面进行了系统综述,以期为我国牛支原体病的防治提供参考。

纳米金基因芯片结合通用引物1次PCR法同时检测多个病原菌的研究

目的基于基因分型技术构建通用引物1次PCR法的样品制备技术,并结合纳米金基因芯片检测系统实现1次对多个病原菌的检测分析。方法针对rDNA保守序列设计通用引物,实现1次PCR完成对各靶细菌ISR序列的扩增;设计针对各靶细菌的特异探针,构建纳米金新型基因芯片,并用芯片进行实际检测。结果设计的通用引物可实现对12种待检靶细菌的正确扩增;选用的各探针特异性强、可靠性好;芯片具有较好的灵敏度、特异性及可靠性;检测敏感性达到50 fmol/L;临床检测显示本方法准确可靠。结论与多重PCR样品制备法芯片比较,本芯片检测的步骤和复杂性大为减低,且有较好的检测性能,可用于各靶病原菌的检测。

细胞凋亡的主要检测方法研究进展

细胞凋亡是生理性细胞死亡过程,凋亡在维持动物机体内环境平衡中扮演着极其重要的角色。细胞凋亡的准确检测是研究细胞凋亡相关机制,以及评价细胞凋亡在相应组织或疾病中影响的第一步。形态学是检测细胞凋亡的最直观的方法,至今一直作为细胞凋亡检测的金标准。DNA片段化检测主要有DNA ladder,TUNEL检测法和ELISA检测法。线粒体膜电位的下降是细胞凋亡的早期事件。凋亡相关基因的检测包括促凋亡基因的检测和抑制凋亡基因的检测。流式细胞术检测细胞凋亡是近些年发展的简单快捷的方法,即可定性又可定量。Ca2+作为细胞内重要的信号分子其浓度和细胞凋亡关系密切相关。

冠心病危险因素的配对病例对照研究

目的研究福建省冠心病发病的主要危险因素。方法对１５０例冠心病患者（１０２例心绞痛，４４例心肌梗塞，４例心率失常）１∶１配对病例对照研究。结果多因素条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型分析表明：高血脂史（ＯＲ＝２４．９）、脑力劳动（ＯＲ＝１０．９）、高血压史（ＯＲ＝７．２）、Ａ型性格（ＯＲ＝３．６）、嗜甜食（ＯＲ＝２．５）、口味偏咸（ＯＲ＝１．８９）与冠心病发病关系密切。结论高血脂、高血压。

奶牛乳腺炎治疗研究进展

奶牛乳腺炎导致奶牛产奶量下降,奶品质降低,甚至奶牛的早期淘汰,对奶牛业造成巨大危害。传统抗生素治疗乳腺炎花费大,治疗效果不确定,且易导致细菌耐药及抗生素残留问题。乳腺炎防治新制剂乳酸链球菌素、Aegis溶菌酶、溶葡萄球菌酶,分别针对病原菌细胞膜、骨架、生物膜而发挥治疗作用;CpGDNA有助于激活机体天然免疫系统;血小板浓缩液不仅具有抗菌作用且可促进乳腺组织修复。在乳腺炎治疗新策略方面,应用激素可调控乳腺细胞分泌及修复能力;另外,调控乳腺细胞相关信号通路及中性粒细胞可控制乳腺炎症反应,达到预防和治疗乳腺炎的目的。

纳米金新型基因芯片检测系统结合限制性酶切非PCR法同时检测多种病原性微生物的研究

目的研究将纳米金新型基因芯片检测系统与限制性酶切非PCR法结合以实现同时对多种病原性微生物进行检测的方法。方法以幽门螺杆菌、肺炎支原体、沙眼衣原体、白色念珠菌、解脲脲原体、EB病毒作为检测目标,选择HhaⅠ内切酶作为工具酶。对所有待检样本核酸进行HhaⅠ酶切,对酶切产物进行同聚A加尾处理,并结合纳米金新型芯片检测系统,分别与特异性探针及通用探针进行两次杂交以完成对目标微生物的检测。通过对168份临床样品的检测,考察新构建芯片的检测结果与荧光定量PCR检测结果的符合率;对构建芯片的稳定性及检测灵敏度进行测试。结果新构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术实现了对选定目标的检测。对168份临床样品的检测结果显示,该芯片检测与荧光定量PCR检测的结果有150例完全相符,符合率为89.2%;进一步芯片检测性能实验结果表明,该芯片检测稳定性为100%,检测敏感性为50pmol/L。结论本研究构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术可以同时实现对细菌、真菌、支原体、衣原体及病毒等微生物的检测,适用性广且对大幅度提高检测通量有积极意义。

肉牛主要细菌性疾病的诊治及疗效评价

为了解我国肉牛细菌性疾病发生情况,本研究通过出诊和接诊肉牛场病例,采用临床症状观察、病理解剖检查和病原菌分离鉴定,对多个肉牛场的细菌性疾病进行了确诊。结果表明,肉牛场病例以呼吸道症状为主,以多种病原混合感染居多,牛支原体为导致肉牛发病的重要病原。

表面等离子体共振成像生物芯片检测系统

根据表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)原理,提出基于表面等离子体共振成像(Surface Plasmon Resonance imaging,SPRI)的生物芯片检测系统构建方法.介绍了SPRI生物芯片检测系统的原理、自行组建的SPRI生物芯片检测系统的结构.采用Kretschmann型棱镜耦合结构激励SPR,偏振的平行光经棱镜投射到生物芯片上,发生表面等离子体共振,由CCD摄像机采集反射光芯片图像.以巯基修饰淋病奈瑟氏菌探针为例验证该系统,利用自组装单分子层技术(Self-Assembled Monolayer,SAM)固定探针.应用该检测系统采集了探针共振、非探针处共振、探针和非探针处都不共振时的生物芯片图像.

我国重大牛疫病防控历史和经验

牛重大疫病严重危害养牛业发展、食品安全与人类健康。我国在牛重大疫病(牛瘟和牛肺疫)的防控方面取得了显著成就,主要经验如下:①对已有优良疫苗的重大疫病采用普遍免疫接种是有效的措施;②依靠科技对重大疫病进行防控是前提;③政府和广大群众目标明确,上下同心,是防控重大疫病的保证;④重大疫病的防控工作与国际接轨,获得国际组织的支持和认可是必不可少的步骤。在新的历史条件下,我们应参照历史经验,对牛的重大疫病实行"重点检疫,全面免疫,扑杀病牛"相结合的综合性防控措施,保障养牛业的持续和健康发展。

鸡Toll样受体在抗病毒天然免疫反应中的作用

天然免疫反应是抵抗病原入侵的第一道防线。Toll样受体是天然免疫系统重要的模式识别受体,能够通过与病原相关分子模式相结合刺激活化信号转导途径、炎症反应以及获得性免疫反应。由于物种的差异,禽类与哺乳动物的Toll样受体在基因和功能上存在一定差异。本文主要介绍禽类中目前研究最多的鸡的Toll样受体及其功能研究进展。

利用滚环扩增技术快速检测结核分枝杆菌rpoB基因单碱基突变

目的应用滚环扩增(rolling circle amplification)技术建立对结核分枝杆菌耐药基因单碱基突变的快速检测方法。方法以结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因为研究对象,设计针对该基因常见突变位点的锁式探针。通过对突变型模板、野生型模板、非结核分枝杆菌基因序列模板及不同比例的突变型模板和野生型模板混合样本的检测,研究本实验方法的特异性和灵敏度。建立特异性地检测rpoB基因单碱基突变的滚环扩增方法。通过对临床样本的检测并与测序结果比较,评价该方法的临床应用价值。结果通过优化反应条件,应用滚环扩增技术能特异性的检测出结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因的单碱基突变。通过对含有不同比例突变型模板的混合样本检测,最低能检测出1%突变型/野生型模板的样本。80株临床样本的检测与测序结果一致。结论滚环扩增技术特异性高、灵敏度高,无需特殊昂贵仪器且简单易操作,能够快速有效的检测出耐药结核的单碱基突变,是具有临床应用前景的方法。

SIP亚单位疫苗对无乳链球菌诱导小鼠乳腺炎的保护力评价

无乳链球菌是导致奶牛乳腺炎的重要病原菌,本研究评价了SIP(surface immunogenic protein)亚单位疫苗对小鼠无乳链球菌乳腺炎的免疫保护效果。制备无乳链球菌SIP亚单位疫苗和灭活疫苗,对小鼠进行免疫,并设PBS阴性对照。免疫前后采血测定IgG及IgG亚类的抗体滴度。免疫小鼠分娩后第4天,进行无乳链球菌乳腺攻毒试验。24h后扑杀攻毒鼠,进行乳腺内CFU的测定,制作并观察乳腺组织病理切片。结果显示,SIP亚单位疫苗免疫组IgG及IgG亚类抗体滴度显著高于灭活疫苗组(P<0.01)。免疫哺乳小鼠乳腺攻毒后,SIP亚单位疫苗免疫组小鼠乳腺CFU显著低于灭活疫苗组及对照组(P<0.001)。乳腺病理切片显示SIP亚单位疫苗组乳腺组织结构较对照组完整,且中性粒细胞浸润程度最小。本研究表明,无乳链球菌SIP亚单位疫苗有望作为奶牛无乳链球菌乳腺炎的候选亚单位疫苗。

牛支原体引起奶牛乳房炎的诊断

牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起成年牛乳房炎和犊牛肺炎、关节炎的主要病原之一。本文从有乳房炎临床症状的奶牛中采集牛奶样本,经细菌培养和支原体培养、特异性PCR与环介导等温扩增(LAMP扩增)和16S rRNA测序等病原学检测证实为牛支原体感染,同时还有其他细菌的混合感染。

一例奶牛发生牛支原体肺炎的诊断

牛支原体是严重影响养牛业发展的重要病原。2008年我们报道牛支原体导致"肉牛传染性牛支原体肺炎"以来,主要在肉牛发现该病。本文从临床出现类似症状的运输后发病奶牛采集样本,经细菌培养和支原体培养、特异性PCR扩增和16S rRNA测序等病原学检测证实为牛支原体感染。

牛支原体GAPDH定点突变、原核表达及生物学特性初步分析

根据已发表的牛支原体GAPDH基因序列设计引物,从牛支原体湖北分离株扩增出GAPDH基因,亚克隆于载体pET-30a。设计定点突变引物,采用环状PCR法对载体上GAPDH基因进行两轮定点突变,原核表达突变成功的重组质粒,获得重组牛支原体GAPDH蛋白,经Western-blot证实该重组蛋白具有较好的反应原性,为其在牛支原体病防控中的应用奠定了基础。

纯中药催情助孕液治疗奶牛卵巢性不孕症试验

在影响奶牛繁殖的诸多因素中，卵巢疾病性不孕导致奶牛发情周期异常，繁殖性能低下，是引起奶牛不孕的重要原因之一，包括卵巢机能减退（卵巢静止）、持久黄体、卵巢囊肿、卵泡交替发育、排卵延迟等多种疾病。笔者应用纯中药制剂催情助孕液治疗奶牛持久黄体、卵巢静止和卵巢囊肿等卵巢性不孕症61例，平均发情率为99．4％，受孕率为81．5％。试验证明，催情助孕液具有抗菌消炎、促进免疫调节、组织修复及生殖机能恢复的作用，取得了较满意的效果。

牛眼球石蜡切片制作方法的探索

为探索一种牛眼球的石蜡切片制作方法,本试验比较了常规石蜡切片制作方法和改良的石蜡切片制作方法。结果表明,试验组标本固定后肉眼可见视网膜与脉络膜紧密相连,仅有小部分视网膜出现脱离的现象;切片显示小梁网连续性未被破坏;眼球壁全层组织连续性未破坏,各层未出现分离现象;视网膜无脱离,各层组织细胞无收缩现象。说明试验组大大改进了眼球固定、脱水、透明技术方法,解决了较大眼球无法制作石蜡切片的难题,为眼球基础研究和相应病理研究提供了基础。

牛支原体病的流行特点与防控措施

支原体是一类在自然界广泛存在、能在无活细胞培养基中繁殖、无细胞壁、高度多形性的最小微生物，据报道己分离鉴定的牛的支原体约有30种，但最为严重的有两种，一种是丝状支原体丝状亚种小菌落型，导致牛传染性胸膜肺炎（CBPP），另一种是牛支原体，导致牛支原体肺炎，二者属于支原体属不同种。