含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体的制备与表达分析

目的:制备含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的慢病毒载体,为慢病毒载体的进一步广泛应用奠定基础。方法:克隆构建含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的转基因载体pCS-gluc-2A-eGFP,酶切与序列分析鉴定其正确后,与包装质粒pCMVHR'Δ8.2、包膜质粒pVSV-G共转染293FT细胞,获得含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体;重组慢病毒载体感染A549、Huh7细胞后,用荧光显微镜直接观察报告基因GFP的表达,或取细胞上清实时检测分泌型萤光素酶的表达。结果:制备了含双报告基因的重组慢病毒载体,感染细胞后可以活体观察绿色荧光蛋白的表达,也可以快速灵敏地检测到分泌型萤光素酶的表达。结论:所获含分泌型萤光素酶和绿色荧光蛋白双报告基因的重组慢病毒载体感染效率高,表达易于活体实时检测,灵敏度高。本研究为慢病毒载体的广泛应用奠定了基础。

狂犬病毒街毒株全长基因cDNA克隆的构建及鉴定

利用分子克隆的方法,将狂犬病毒街毒株的全基因组分为4个片段按照它们基因组上的顺序克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(GFP)的核苷酸,构建出表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组狂犬病毒HN10株全长基因组cDNA真核表达质粒,同时,在全长cDNA的两侧嵌入锤头状核酶(HamRz)和丁型肝炎病毒核酶(HdvRz)的序列,并置于CMV启动子的控制下,为下一步拯救出该嵌合病毒提供了可直接使用的全长cDNA真核表达质粒。

狂犬病病毒糖蛋白基因遗传变异研究进展

狂犬病病毒（Rabiesvirus，RABV）是一种不分节段的单股负链RNA病毒，属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）。狂犬病病毒属基因组长约12000个核苷酸（nt），从3’端到5’端编码5个结构蛋白：核蛋白（N）、磷蛋白（P）、膜蛋白（M）、糖蛋白（O）和转录酶大蛋白（L）。

流感病毒样颗粒疫苗研究进展

流行性感冒（流感）是由正粘病毒科的负链RNA流感病毒引起的一种上呼吸道急性传染病,它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高,严重影响着人类的健康和全球经济的发展,对老年人和婴幼儿危害尤其大。在人类历史上曾经历过多次流感大流行，死亡惨重，

病毒样颗粒疫苗的研究进展

病毒样颗粒（VLPs）由病毒结构蛋白组装而成,形态上与真正病毒粒子相似,大小介于15-400 nm之间,因缺乏病毒基因组而不能自主复制,相比单独的抗原蛋白和多肽,VLPs表现出与天然病毒更相似的构象表位,

利用狂犬病病毒反向遗传系统表达铁蛋白的初步研究

核磁成像技术(MRI)可以实现活体检测和较高的分辨率,在医学生物学等领域得到了广泛的应用和发展。MRI的应用效果和范围与造影剂的发展密切相关。

HCV细胞培养适应性突变研究进展

HCV感染是一个重大的公共卫生问题,自2005年日本学者首次建立HCV感染性克隆与体外细胞培养技术以来,HCV细胞培养技术的改进与应用一直是HCV研究领域的热点,并取得许多重要进展.本文将着重阐述HCV细胞培养适应性突变对于HCV病毒感染性病毒颗粒滴度的影响.