采用基因微阵列技术对常见呼吸道病毒进行检测的初步研究

建立一种高通量的基因微阵列检测技术,对常见呼吸道病毒感染进行监控。根据公开发表的8个病毒科38种常见呼吸道病毒的序列,计算其保守区域,设计病毒的特异性检测探针,制备呼吸道病毒检测基因微阵列。利用随机引物PCR方法标记样品中的病毒靶序列,标记产物与基因微阵列上的探针杂交,清洗、扫描后进行结果分析。采用流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒作为报告病毒,并对80例上呼吸道感染患者的咽拭子标本进行验证测试。初步结果表明,该呼吸道病毒微阵列基因芯片检测是可行的,在利用基因微阵列技术对病毒监控方面进行了有益的尝试,得到了有经验的信息。

重组人干扰素α-2b喷雾剂预防SARS等呼吸道病毒感染的人群试验研究

目的评估重组人干扰素α2b喷雾剂(远策素喷雾剂)预防SARS等常见呼吸道病毒感染的效果。方法研究对象共14391人,用药剂量为90万IU/次,每日2次,连用5d,未次用药后15d取血,或用药前和用药3周后采取双份血清。采用随机、对照方法检测血清抗SARSCoVIgG抗体;采用双盲、随机、安慰剂对照方法测定血清抗常见呼吸道病毒(B型流感病毒、副流感病毒1～3型,呼吸道合胞病毒及腺病毒3、7型)的血清IgM抗体。结果两次实验中,干扰素组血清SARS病毒IgG抗体阳性率均较试验组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。但用药组应用干扰素后副流感病毒1～3型,B型流感病毒,腺病毒3、7型和呼吸道合胞病毒IgM抗体阳性率(依次为6.45%、4.52%、4.30%和17.20%)均低于对照组(依次为19.40%、13.60%、7.12%和25.62%)。其中副流感病毒、B型流感病毒、腺病毒3种病毒IgM抗体阳性率差异均有统计学意义(P<0.01)。结论应用远策素喷雾剂鼻和咽部喷雾能不同程度地降低用药人群常见呼吸道病毒的感染率。

不同型别重组人干扰素在细胞培养上抗SARS病毒的研究

目的 研究重组人干扰素α2b、α1b、β1b和ω1b对严重急性呼吸综合征 (SARS)病毒在细胞培养上的抑制作用。方法 采用细胞病变抑制法在人横纹肌瘤 (Rda)细胞系培养上测定干扰素的抗SARS病毒活性。结果 高度纯化的重组人干扰素α2b、α1b、β1b和ω1b在Rda细胞培养上抑制SARS病毒产生 5 0 %细胞病变 (CPE)的最小活性单位各为 (16 0 5± 12 9 5 )IU ml、(14 9 0± 71 7)IU ml、(6 9 5± 6 1 5 )IU ml、(87 3± 4 7 1)IU ml或各为 (0 6± 0 5 )ng ml、(10 6± 5 1)ng ml、(3 5± 3 1)ng ml、(0 9± 0 5 )ng ml。结论 本研究中所用的重组人干扰素在细胞培养上均具有较好的抑制SARS病毒的活性。

SARS冠状病毒全基因组cDNA芯片的研制以及人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制分子机制的初步研究

目的 在细胞水平上 ,利用研制的SARS病毒全基因组芯片技术探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子机制。方法 根据已经发表的SARS病毒基因组全序列和生物信息学软件分析 ,设计包括SARS病毒全基因组的各个可能编码区的PCR引物 ;将所有PCR产物用来制备SARS病毒的全基因组cDNA芯片。利用该芯片来探讨人重组干扰素α2b抑制SARS病毒复制的分子基础。结果 通过PCR方法研制了SARS病毒全基因组的cDNA芯片 ,并说明cDNA芯片可以准确地检测SARS病毒各个基因的RNA水平。利用这一技术研究了干扰素抗SARS病毒的分子机制。结果表明 ,人重组干扰素α2b可以明显抑制SARS病毒复制过程中几乎所有病毒RNAs的转录 ,并呈现一定的剂量关系 ;并发现一个目前还没有确定功能的SARS病毒新基因 ,命名为U基因 ,转录最早 ,转录水平最高 ,对干扰素的抑制作用也很敏感 ;它可能在病毒的转录复制过程中发挥重要作用。结论 SARS冠状病毒cDNA芯片可以用来研究病毒复制的分子机制以及相关抗病毒药物包括干扰素的研究。本文在分子水平上研究了人干扰素α2b抑制SARS病毒复制的基因转录动态 。

重组人干扰素α-2b喷雾剂在人群中对风疹、麻疹病毒减毒活疫苗鼻腔接种后干预免疫效果的初步研究

目的初步观察重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)鼻腔喷雾剂对风疹、麻疹减毒活疫苗鼻腔接种后免疫效果的干预作用。方法选择合适人群进行对比试验,一组为干扰素(IFN)试验组,一组为对照组。IFN试验组提前2天使用rhIFNα2b喷雾剂,然后IFN试验组和对照组分别使用风疹、麻疹减毒活疫苗进行鼻腔接种。在疫苗接种前以及接种后第21和28天分别采集试验对象血清测定其对应的IgG特异性抗体,以抗体滴度的差异观察IFNα2b对病毒感染的干预效果。结果麻疹试验组和对照组的抗体差异分别为1.26(21d)和2.96(28d),差异有统计学意义;风疹试验组和对照组的抗体差异为0.95(21d)和0.37(28d),差异不明显。结论⑴单价麻疹和风疹疫苗鼻腔喷雾接种可以加强基础免疫;⑵rhIFNα2b鼻腔喷雾剂对风疹和麻疹减毒活疫苗鼻腔接种的免疫效果有一定的干预作用。

重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV的试验研究

目的评价重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对恒河猴感染SARS-CoV的预防治疗作用。方法采用鼻腔喷雾法(剂量为60万单位/鼻孔)研究了重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对感染SARS-CoV的恒河猴预防治疗效果。结果试验组(5只)和对照组(5只)相同时间检测的咽拭子等标本中,Real-time PCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应也较对照组弱。血液学指标检测结果表明试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;病理结果显示试验组2只恒河猴肺组织形态基本正常,其余3只猴有肺间质性炎,表现肺间隔增厚、单核样细胞为主的炎细胞浸润,其中1只增厚的肺间隔有局灶相互融合,这3只猴肺部病变与对照组的病变表现相似,且病变累及范围较对照组小;其他各受检脏器均未见明显异常。结论重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断或减弱SARS-CoV对恒河猴的感染。

从抗TNF抗体的CDR肽库中获得拮抗TNF的短肽

为设计来自抗体的短肽 ,以抗肿瘤坏死因子 (TNF)嵌合抗体 (cA2 )CDRs为模板 ,在其两侧各加 3个随机氨基酸残基 ( X3 CDR X3 ) ,构建了 6个以CDR为基础的肽库 .经过 3轮亲和选择 ,挑取单克隆 ,进一步经ELISA检测TNF阳性噬菌体克隆 ,分离得到 7个ELISA阳性较好的噬菌体肽克隆 ,分别命名为CDR2L1、CDR2L2、CDR2L3、CDR1L1、CDR2H1、CDR3H1、CDR3H 2 .应用MTT方法 ,检测 7个克隆对TNF生物学活性的拮抗作用 .结果显示 :来自CDR2L ,CDR3H肽库中的CDR2L2、CDR2L3,CDR3H2噬菌体肽具有明显的拮抗TNF诱导L92 9细胞的细胞毒作用 ,其中以CDR2L2噬菌体肽的拮抗活性最强 .而来源于CDR1L ,CDR2H肽库的CDR1L1和CDR2H1噬菌体肽和来自CDR2L ,CDR3H肽库中的CDR2L1和CDR3H1噬菌体肽没有明显的拮抗TNF作用 .研究结果初步表明 :从cA2抗体CDR肽库中筛选得到的噬菌体CDR模拟肽具有亲本抗体相似的结合活性和生物学效应 ,从而为开发已知抗体 (特别是治疗用抗体 )

重组人干扰素α-2b喷雾剂人群试验的安全性评价

目的评价重组人干扰素α2b喷雾剂(远策素喷雾剂)人群应用预防SARS等呼吸道病毒感染的安全性。方法采用随机、同期平行对照的现场流行病学实验方法进行评价,用药5d,随访10d。结果用药期间,与对照组比较,用药组体温未见异常;用药期间用药组出现的不良反应有头痛(4.83%～7.09%)、头晕(7.17%～11.63%)、乏力(8.55%～15.06%)、肌肉酸痛(4.43%～7.09%)、咽干(12.10%～17.85%)、咽痛(6.25%～8.72%)、腹痛(2.30%～5.50%)、腹泻(2.45%～5.66%)等,不良反应的发生率均高于对照组(P<0.05);不良反应主要出现在用药的前3天;除咽干和乏力外,其他症状在停药后显著下降,其发生率甚至显著低于对照组;用药期间鼻塞、咳嗽和咯痰发生率两组差异无统计学意义;对照组的皮疹发生率显著高于用药组。在整个用药过程中未发现国外志愿者试验发生的血涕现象。结论应用远策素喷雾剂可引起一些较轻的流感样不良反应,但所有症状均为可逆性反应,停药后可消失;未见有其他严重不良反应的发生,在人群中应用是安全的。

干扰素及其临床应用（续）九干扰素-β

1概述 干扰素-β（ineterferonbeta，IFN-β）在历史上又称为成纤维细胞干扰素（Fibroblast interferon，Fi-IFN，F-IFN）；I型干扰素（Typ-1 interferon；）pH2-稳定干扰素（pH2-stable interferon）；R1GI因子等。

十其他Ⅰ型干扰素

1干扰素-δ（interferon delta。IFN-δ） 干扰素-δ（interferon delta，IFN-δ）是8～12d孕期（在子宫植床期）的猪孕体的滋养外胚叶与干扰素-δ共同表达的1型干扰素蛋白质。

十二 干扰素诱生剂

干扰素诱生剂是一种能促进干扰素的产生和释放的物质。其种类很多：包括促细胞分裂剂、脂多糖和人工合成的多聚体，如poly I：C和poly A：U（聚腺苷酸-聚尿苷酸）和磷酸多糖；病毒、细菌和寄生虫都被证明可以诱生干扰素，还有许多低分子物质如Tirolone等。在1986年重组人干扰素被美国FDA批准投放市场以前，干扰素诱生剂曾经是研究的热点之一，研究最多的是聚肌胞（poly I：C）。