人参体细胞胚胎发生过程中的生理变化

采用考马斯亮蓝G-250染色法、蒽酮法、愈创木酚法等方法,研究了人参体细胞胚胎发生中可溶性蛋白、多糖及淀粉含量和POD及PPO活性的变化,并对体细胞胚发生的不同时期培养物内源IAA和ABA含量进行了测定.结果表明,多糖和淀粉含量在早期胚时较低,可溶性蛋白含量、POD及PPO活性和IAA含量在早期胚时最高;在成熟胚时期,ABA含量最高,且ABA与IAA的比值在成熟胚时也较高.说明多糖和淀粉参与调节胚性细胞的分化和发育过程,POD及PPO和可溶性蛋白与早期胚形成密切相关;ABA与IAA比值高有利于体细胞胚的发育成熟.

人参体细胞胚胎发生过程中内源激素变化和基因表达研究

目的探讨外源激素-内源激素-特异基因之间的关系,为阐明人参体细胞胚胎发生的分子机制奠定基础。方法对人参不同发生途径,不同时期的培养物进行AFLP分析,对体细胞胚胎发生不同时期培养物的内源IAA和ABA以及皂苷的量进行了测定。结果在早期胚时期IAA的量最高,在成熟胚时期ABA的量最高,而ABA/IAA的值在成熟胚时较高;不同发生途径,不同时期的培养物基因表达不同;体胚发生试管苗总皂苷的量比子叶胚时期高出4倍多。结论IAA的存在是维持人参体胚正常发育到早期胚的条件,ABA与胚性启动,体胚发生、发育相关,尤其对胚胎发育后期有较大的影响;在不同生理状态或不同的培养条件下产生了不同的基因调控类型,不同的发育过程会有特异基因表达,导致了人参分化情况的不同;随着形态建成的逐步完成,也是次生代谢产物逐渐积累的过程。

2，4-D、BA对人参体细胞胚胎发生过程的影响研究

以人参芽胞、二年生人参根、实生苗(茎、叶)为外植体研究了体细胞胚的发生条件,并对其发生过程中可溶性蛋白、相关酶活性及内源激素的变化等进行了研究。结果表明,诱导愈伤组织的培养基为MS+2,4-D4.0mg/L+BA0.2mg/L;在MS+2,4-D1.0mg/L+KT0.2mg/L培养基上继代培养,可获得胚性愈伤组织;在无2,4-D的培养基上可诱导出胚状体。将胚状体转入无任何激素的MS培养基上继续培养,之后转入1/2MS培养基上获得再生植株。在体细胞胚胎发生过程中,可溶性多糖和可溶性淀粉含量在早期胚时较低,可溶性蛋白含量、POD及PPO活性在早期胚时最高;IAA在早期胚时期含量最高,在成熟胚时期ABA含量最高,而ABA/IAA比值在成熟胚时较高,利于体细胞胚的发育成熟。

刺五加体细胞胚胎发生过程及解剖学观察

探讨不同外植体、植物生长调节物质种类及配比对刺五加培养物的影响,建立刺五加体胚发生及再生植株体系。结果表明:叶片最易形成愈伤组织,茎次之,根最差,外植体最佳取材时期为4—5月。刺五加愈伤组织最适诱导基质为MS+1.0mg·L-12,4-D+0.5mg·L-16-BA;体细胞胚的诱导、发育和分化的最佳培养基为不添加任何生长调节物质的MS培养基。解剖学观察表明刺五加离体胚胎发生过程与合子胚发育过程相同。

人参植株再生体系的建立和优化

以人参种子、芽胞、茎、叶为外植体,通过器官发生途径建立人参高效再生体系。筛选出不定芽诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L BA+0.2 mg/L IBA,继代培养基为MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L IBA和MS+2.5 mg/L BA+0.2 mg/L IBA,生根培养基为1/2 MS+1.0 mg/L NAA;16 h光照/8 h黑暗培养。移栽获得再生植株。