小鼠原位移植性肝癌模型的建立及生物学特性

目的:探讨建立小鼠原位移植性肝癌模型的可行性并评价其生物学特性。方法:沿腹中线开腹后将5×106个H22细胞接种到小鼠(17只)肝脏实质内,分别于接种后第13天(n=8)和小鼠死亡时(n=9)取主要脏器进行形态学观察和细胞增殖核抗原(PCNA)及免疫Ⅷ因子相关抗原(FⅧRag)免疫组织化学染色。结果:小鼠平均生存期为18.8 d。接种后第13天,肝内肿瘤成瘤率为100%(8/8),肺转移率为37.5%(3/8),50%(4/8)的小鼠产生腹水,腹水量为(6.25±3.67)mL,肿瘤体积为(0.35±0.14)cm3。自然死亡时,肺转移率为100%(9/9),100%(9/9)小鼠产生腹水,腹水量为(10.88±1.92)mL,明显多于接种后第13天时的腹水量(P<0.01);肿瘤体积为(0.61±0.31)cm3,明显大于接种后第13天时的肿瘤体积(P<0.05)。小鼠死亡时大多数瘤组织呈单结节状,异型性明显,肿瘤增殖指数和微血管密度分别为(71.39±20.74)%和(39.25±13.71)/高倍视野。结论:原位移植性肝癌模型制备成功率高,肿瘤肺转移率高,肿瘤组织具有丰富的微血管和旺盛的增殖能力。

乳腺癌生物学行为和预后判定微血管密度与P53蛋白的价值

目的:研究乳腺癌组织中微血管密度(MVD)、P53蛋白的表达,探讨它们之间的相互关系及临床意义并在进行P53抑癌基因的研究中可能对乳腺癌发生率的降低、预防及预后情况提供理论依据。方法:应用免疫组化S-P法,检测76例乳腺癌、10例癌旁正常乳腺组织中P53蛋白的表达,并在CD34染色切片上检测MVD。结果:乳腺癌MVD明显高于癌旁正常组织(t=3.0195,P<0.01.),乳腺癌MVD与组织学分级、淋巴结转移有关(P<0.01),与患者年龄、肿瘤大小、组织学分型、临床分期无关(P>0.05);P53蛋白的表达与乳腺癌组织学分级和淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤大小、组织学分型、临床分期无关;P53蛋白阳性组MVD均值54.93±13.86高于P53蛋白阴性组41.28±11.69,其表达与MVD有关(t=3.258,P<0.01)。结论:MVD和P53蛋白可作为判定乳腺癌生物学行为和预后的重要指标。

人原发性肝癌细胞ABCG_2^+表型的检测、分离及其生物学特性的初步研究

目的检测人原发性肝癌ABCG2+亚群细胞并加以分离,对其生物学特性进行初步研究。方法通过PE-ABCG2单克隆抗体标记,流式细胞仪检测、分选ABCG2+细胞,体外培养后进行细胞周期、增殖活性和凋亡的检测。结果原发性肝癌细胞中存在ABCG2+表型,占细胞总数的1.3%;体外培养24 hours,ABCG2+表型有81.48%处于细胞周期的G0/G1期,non-ABCG2-表型为46.05%;ABCG2+表型凋亡率为11.5%,non-ABCG2-为27.9%;体外连续培养7天,ABCG2+表型增殖活性高于non-ABCG2-表型。结论原发性肝癌细胞中存在比例为1.3%的ABCG2+亚群细胞,大多数处于细胞周期的G0/G1期,与non-ABCG2-细胞相比,具有更高的增殖活性和抗凋亡能力。

人表皮干细胞的分离及其生物学特性的评价

目的:分离人表皮干细胞(hKSCs),并评价其生物学特性。方法:取包皮环切术的正常皮肤,采用酶消化、快速贴壁筛选法分离hKSCs,采用倒置相差显微镜及透射电镜观察细胞形态,采用细胞免疫组织化学法和间接免疫荧光法检测细胞的分子标志物,利用流式细胞术检测细胞周期。结果:倒置相差显微镜下显示,细胞为多角形,体积小、核大,呈铺路石样排列,形态一致;透射电镜显示,胞质内细胞器稀少,细胞核大,核内具有丰富的异染色质;免疫细胞化学、间接免疫荧光和流式细胞术结果显示,KSCs相对特异性标志物CK15、CK19、P63和CD29呈阳性表达,成纤维特异性标志物Vimentin和表皮终末分化标志物CK10呈阴性表达,RT-PCR结果与上述结果一致;细胞周期检测结果显示,大多数细胞处于G0/G1期,符合hKSCs的慢周期特性。结论:快速贴壁筛选法可分离出纯度较高的hKSCs,可为后续的实验研究提供细胞来源。

人前列腺癌PC3细胞亚群的分离及其生物学行为分析

目的研究人前列腺癌PC3肿瘤细胞系中是否存在具有干细胞特征的细胞亚群,并对其形态及克隆生长特征进行分析,同时探讨染料Rho123着色强度是否可用于区分不同的肿瘤细胞亚群。方法采用Rho123染色后流式细胞仪分析;Rho123与DAPI复染后荧光显微镜下形态学观察及细胞克隆生长特征分析等方法。结果PC3细胞中存在对Rho123着色显著差异的两类细胞亚群,其形态结构、增殖能力及克隆生长方式均有明显差别。结论人前列腺癌PC3细胞系中存在具有干细胞特性的细胞亚群,对Rho123拒染的特性可用于区分肿瘤干细胞与其他肿瘤细胞。

Smad7对脑胶质母细胞瘤U251细胞生物学行为的影响

目的观测Smad7对脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖及浸润的影响。方法应用CCK-8和RT-PCR分别检测Smad7稳定转染U251细胞与空载体转染U251细胞及U251细胞在增殖和N-cadherin、E-cadherin、vimentin、twist基因表达的差异。结果Smad7转染后,上皮细胞间质化相关基因表达未见改变(P>0.05),但相对于空载体转染U251细胞及U251细胞其增殖速度减慢。结论Smad7稳定转染后未见胶质母细胞瘤上皮细胞间质化改变,但Smad7高表达可抑制胶质母细胞瘤细胞增殖。

基质金属蛋白酶-2与乳腺癌血管生成和肿瘤生物学行为的关系

目的:基质金属蛋白酶能够降解细胞外基质和基底膜,在肿瘤的浸润和转移过程中起重要作用。研究基质金属蛋白酶-2(matrixmetallopro-teinase2,MMP-2)及其mRNA在乳腺癌组织和细胞中的表达,探讨其与血管生成及肿瘤生物学行为的关系。方法:实验于2002-01/2004-01在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成。应用免疫组织化学、免疫细胞化学、原位杂交、侵袭实验、明胶酶谱分析及形态定量分析方法,对76例乳腺癌组织和体外培养的MCF-7细胞中MMP-2及其mRNA、微血管密度(MVD)进行检测。结果:乳腺癌组织中MMP-2及其mRNA的表达均高于癌旁正常组织;MMP-2及其mRNA主要表达于肿瘤细胞胞浆中,其阳性率分别为77.63%和71.05%;MMP-2及其mRNA的表达均与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移密切相关。MVD与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移密切相关。MMP-2或其mRNA表达阳性组MVD值明显高于阴性组。MCF-7细胞中MMP-2及其mRNA均为阳性;MMP-2抗体可使MCF-7细胞侵袭细胞数由(56.21±3.68)个/400倍下降为(20.32±3.24)个/400倍;直接培养于培养瓶的MCF-7细胞可以分泌MMP-2酶原,培养于I型胶原包被培养瓶的MCF-7细胞MMP-2酶原表达增强并且出现活化形式。结论:乳腺癌组织和细胞具有较强的分泌MMP-2的能力,MMP-2促进肿瘤的侵袭和转移,

PEX基因对肿瘤细胞生物学性状的影响

目的 探讨PEX基因在体外对鼠黑色素瘤细胞B16F10生物学性状的影响。方法 利用脂质体介导转染法,经G4 18稳定筛选后,应用MTT、流式细胞术、软琼脂克隆形成实验及Boyden小室侵袭实验,体外观察PEX基因对B16F10细胞生物学性状的影响。结果 BpcDNA sPEX、BpcDNA、B16F10三组细胞生长速度、细胞周期各时相均无明显差异(P >0 . 0 5 ) ;BpcDNA sPEX组细胞集落与BpcDNA组和B16F10组相比统计学上存在显著性差异(P <0 . 0 1) ,BpcD NA sPEX组细胞集落比BpcDNA组和B16F10组少,且单个集落中细胞数目少;BpcDNA sPEX组细胞穿透Matrigel胶能力比BpcDNA和B16F10组细胞弱,统计学上存在显著差异(P <0 . 0 1)。结论 PEX基因转染对体外单纯培养的B16F10细胞生长、增殖无影响;PEX基因可抑制B16F10细胞在软琼脂中形成集落的能力及体外侵袭能力。

病理学早临床线上教学实践探究

病理学是连接基础医学和临床医学之间的桥梁学科,病理学诊断被视为疾病诊断的“金标准”。据此,临床医学本科教育要“早临床”。本文主要探索并总结了在只能进行线上教学的前提下,病理学早临床在线教学的设计、实施及效果评价,希望为病理学早临床线上教学提供有益参考。

人骨髓间充质干细胞体外培养扩增及向心肌细胞诱导分化的实验研究

目的:培养人骨髓间充质干细胞(Human mesenchymal stem cell,hMSCs),探讨hMSCs体外向心肌细胞(Cardio-myocytes,CM)定向诱导分化的实验研究。方法:取人的骨髓血,用Percoll(1.073g/ml)密度梯度离心及贴壁筛选结合的方法体外培养扩增hMSCs,并进行流式细胞仪分析鉴定其免疫学表型,以未加一抗只加二抗的hMSCs作为平行对照组。选用生长良好、纯度达到95%的P5代hMSCs,用不同诱导浓度的5-氮杂胞苷(5-Azacytidine)1、5、10和20μmol/L进行诱导,对诱导后的细胞进行心肌特异性标志TroponinⅠ及Desmin的免疫组化鉴定。结果:体外分离纯化培养扩增出hMSCs,其CD44阳性率平均为93.26%±2.48%,与平行对照组(3.42%±1.09%)相比有明显差异(P<0.01)。经5和10μmol/L5-Aza诱导分化的hMSCs表达心肌特异性标记TroponinⅠ、Desmin;10μmol/L5-Aza诱导分化的hMSCs阳性率明显高于5μmol/L组;在20μmol/L组中,诱导后超过50%的细胞脱落死亡。结论:hMSCs可体外分离培养扩增,并具有向心肌细胞分化的潜能,5-Aza最佳诱导浓度为10μmol/L。

下调HMGA2基因表达对改善骨肉瘤U2OS细胞恶性表型的实验研究

目的:研究HMGA2表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中的作用,为基因靶向治疗提供理论依据。方法:采用基于DNA的shRNA表达载体HMGA2-shRNA,稳定转染人骨肉瘤U2OS细胞,下调其HMGA2表达水平,并应用RT-PCR技术检测其对HMGA2基因的沉默效果;经Cell Counting Kit-8(CCK8)测定、Hoechst33342染色荧光显微镜观察及Boyden小室法分别检测细胞增殖、凋亡及迁移情况;实时定量RT-PCR检测mRNAs表达水平。结果:稳定转染靶向HMGA2的shRNA可特异性下调U2OS细胞HMGA2 mRNA表达水平;其作用结果使细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制,自发凋亡率及Caspase 3和Caspas 9基因表达水平显著升高。结论:HMGA2基因异常表达在维持人骨肉瘤U2OS细胞恶性表型中起重要作用,靶向HM-GA2的基因治疗可能为骨肉瘤治疗带来新希望。

红景天甙对体外培养腺样囊性癌细胞凋亡的实验研究

目的研究红景天甙诱发体外培养腺样囊腺癌细胞(ACC)发生凋亡的作用及机制。方法用免疫组化的方法检测红景天甙作用后ACC细胞中Caspase3及Caspase8蛋白表达情况。结果给予红景天甙治疗组的ACC细胞的Caspase3及Caspase8蛋白表达均呈阳性表达,对照组均为阴性表达。结论红景天甙可以诱发ACC细胞凋亡,可作为临床腮腺癌治疗的药物之一。

COX-2在乳腺癌组织的表达及其临床病理意义

环氧合酶（Cyclooxygenase,COX）是催化花生四烯酸转化为前列腺素的重要限速酶,它有2种同工酶：COX-1和COX-2。COX-1在大多数组织中均有表达,参与机体正常的生理功能,如保护胃黏膜,控制血小板聚集等;COX-2静息时并不表达,但在细胞因子、生长因子、癌基因等刺激因子的作用下可被诱导表达。

Wortmannin增强人恶性胶质瘤细胞辐射敏感性的实验研究

目的:研究渥曼青霉素(Wortmannin,WT)对人恶性胶质瘤U251细胞的辐射增敏作用。方法:采用集落形成实验、流式细胞术、核增殖性抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫荧光染色,以及透射电镜技术检测WT联合X线对U251细胞克隆形成及凋亡的影响。结果:WT预处理后的U251细胞接受X线照射后,集落形成率和PCNA的表达明显低于仅接受射线照射组,并且凋亡和坏死细胞数目明显增多,在透射电镜下,可见典型的凋亡和坏死细胞的形态。结论:WT作用后,明显增强了X线对U251细胞增殖的抑制作用,促进了X线引起的U251细胞凋亡和坏死的发生,增加了U251细胞的辐射敏感性。

生物衍生骨支架材料的制备及其体内组织相容性的研究

目的:制备生物衍生骨支架材料,研究其生物安全性和生物相容性,从而为骨组织工程提供最佳的支架材料。方法:制备生物衍生骨支架材料,将BALB/c小鼠分为三组,分别为对照组、生物衍生骨支架植入组和异种骨植入组。植入21天后分别采用肌肉刺激实验,刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞转化实验和补体依赖性细胞毒实验分析生物衍生骨对动物机体局部组织的影响和免疫功能的影响。取植入物周围组织做HE染色进行组织学分析。结果:支架组材料周围未见明显的炎症反应,而异种骨组骨组织周围有大量的炎细胞浸润,并有坏死组织。支架组的脾淋巴细胞转化实验和补体依赖性细胞毒实验结果与对照组相比较均无明显差异;而异种骨组结果则均明显高于对照组,具有显著性差异。结论:生物衍生骨支架材料无细胞毒性,具有良好的组织相容性。

扁桃体原发性恶性淋巴瘤的免疫病理学特征

目的:探讨扁桃体原发性恶性淋巴瘤的类型特征和Ki-67、bcl-6及CD10的表达,阐明其生物学意义。方法:应用组织形态学和免疫组织化学方法,按照WHO造血和淋巴组织肿瘤第四版分类,复查50例扁桃体原发性恶性淋巴瘤的诊断并标记分类观察。结果:本组滤泡性淋巴瘤(FL)37例,弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)9例,伯基特淋巴瘤(BL)和外周T细胞淋巴瘤(PTCL)各2例。FL 1、2级为惰性淋巴瘤16例;Ki-67阳性在惰性淋巴瘤占25%(4/16),侵袭性占58.06%(18/31),Ki-67表达在不同恶性程度组间比较差异有统计学意义(P<0.05);bcl-6在88%(44/50)的扁桃体恶性淋巴瘤中不同程度表达。bcl-6+/bcl-2+在低级别FL中占40.00%(8/20),高级别中占61.89%(13/21),DLBCL中占77.78%(7/9);CD10表达在性别组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本组病例均为非霍奇金恶性淋巴瘤;以FL为主,其次是DLBCL,而BL和PTCL少见;从低级别FL转变为高侵袭性DLBCL,Ki-67表达率有增高趋势;bcl-6在不同类型中表达不同,侵袭性淋巴瘤中的表达明显高于惰性淋巴瘤;bcl-6+/bcl-2+表达从FL低级别到高级别并向DLBCL转变过程中依次增高。

体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞实验方法的建立

目的:探讨体外培养并诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化为心肌细胞(CMs)的实验方法。方法:采用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离、纯化hMSCs,采用5-氮杂胞苷(5-Aza)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对hMSCs进行联合诱导,诱导3～4周,观察细胞形态学的变化,免疫组织化学方法鉴定肌细胞及心肌细胞特异蛋白的表达。结果:hMSCs体外经5-Aza和bFGF联合诱导1～2周后,细胞体积较诱导前增大,呈长梭形。诱导2～3周后细胞伸出伪足呈多爪形;诱导3～4周后细胞伪足间相互连接形成肌管样结构。联合诱导3～4周后免疫组织化学鉴定结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnⅠ)和横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)表达均呈阳性。结论:hMSCs在体外经5-Aza和bFGF联合诱导可以分化为CMs。

移植肾穿刺病理标本染色方法

目的:进一步完善移植肾穿刺病理标本染色技术,提高染色质量。方法:对71例移植肾穿刺病理标本染色方法、染色步骤进行总结。结果:71例移植肾病理标本的免疫荧光染色、光镜染色结果能够满足病理诊断要求。结论:我中心采用的染色方法稳定,染色效果较好,为医生做出正确诊断提供可靠保障。

胰岛新生实验研究中1型糖尿病大鼠模型的构建

目的:探讨胰岛新生实验研究中1型糖尿病大鼠模型的构建。方法:选用Wister大鼠,一次性腹腔注射STZ(55mg.kg-1)诱导1型糖尿病模型。结果:经STZ诱导24h后即表现出进食量、饮水量及排尿量增加且逐渐出现消瘦、毛色失去光泽、毛发凌乱、精神状态差、活动减少等症状;实验组大鼠的空腹血糖值显著高于对照组(P<0.05);注射STZ48h后尿糖即为+++以上,此后一直维持在+++～++++,成模率87%。结论:采用一次性大剂量STZ腹腔注射诱导雄性Wistar大鼠成功构建1型糖尿病模型。