低剂量辐射抑制辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的免疫学机制

为探讨低剂量辐射对高剂量辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤抑制作用的免疫学机制，采用４次１．７５ＧｙＸ射线全身照射Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠诱发胸腺淋巴瘤模型，检测不同辐射剂量照后１个月小鼠脾脏ＮＫ细胞毒活性及其ＩＬ－２和γ－ＩＦＮ分泌活性，腹腔巨噬细胞吞噬功能及其ＴＮＦ－α分泌活性。结果显示，每次１．７５Ｇｙ照射前１２ｈ接受７５ｍＧｙ照射小鼠，上述免疫功能均比单纯１．７５Ｇｙ照射组增强，且接近假照射组小鼠。提示低剂量辐射抑制高剂量辐射诱发胸腺淋巴瘤可能与低剂量辐射诱导的适应性反应，减轻高剂量辐射对机体免疫功能的损伤有关。

p53 和 Bcl-2/Bax 在辐射诱导胸腺细胞凋亡中的作用

采用流式细胞术对昆明小鼠接受７５ｍＧｙ和２ＧｙＸ射线全身照射后，胸腺细胞内细胞凋亡相关基因ｐ５３、Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白的表达进行了比较研究。结果表明，７５ｍＧｙＸ射线全身照射后２４ｈ，ｐ５３基因蛋白产物的表达显著降低（Ｐ＜０．００５），而２ＧｙＸ射线全身照射后２４ｈ，ｐ５３基因蛋白表达则显著增高（Ｐ＜０．００５）。７５ｍＧｙＸ射线全身照射后２４ｈ，Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比值明显增加（Ｐ＜０．０５）。而２ＧｙＸ射线全身照射组，Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比值无明显变化。提示：ｐ５３和Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ在辐射诱导的胸腺细胞凋亡中起着重要作用。

小剂量X射线全身照射后淋巴细胞TCR／CD3表达和［Ca^（2＋）］_i的变化

小剂量Ｘ射线全身照射后淋巴细胞ＴＣＲ／ＣＤ３表达和［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ的变化刘树铮，苏旭，张迎春（白求恩医科大学卫生部放射生物实验室，长春１３００２１）关键词小剂量辐射，淋巴细胞，胸腺细胞，Ｔ细胞受体，ＣＤ＿３，细胞内游离钙Ｔ淋巴细胞表面ＴＣＲ／Ｃ...

用流式细胞计数仪检测不同辐射剂量诱导的小鼠胸腺细胞程序性死亡

用流式细胞计数仪检测不同辐射剂量诱导的小鼠胸腺细胞程序性死亡苏旭，张迎春，刘树铮（白求恩医科大学卫生部放射生物实验室，长春１３００２１）关键词程序性细胞死亡，流式细胞术，胸腺细胞，Ｘ射线自Ｗｙｌｌｉｅ等’‘’对程序性细胞死亡（ＰＣＤ），又名细胞凋亡（...

电离辐射对小鼠胸腺细胞和脾细胞p53基因mRNA和蛋白表达的影响

采用流式细胞术和 Northern blot法检测了不同剂量 X射线全身照射后 ,小鼠胸腺细胞和脾细胞中 p53基因 m RNA和蛋白表达的变化。结果表明 ,2 .0 Gy X射线全身照射后 ,小鼠胸腺细胞 p53阳性细胞百分数与对照相比 ,在照后 1h开始升高 ,8h达最高 ,以后逐渐下降。不同剂量 X射线照射后 ,小鼠胸腺细胞和脾细胞中 p53基因 m RNA水平的观测结果表明 ,75m Gy及 2 .0 Gy全身照射后 1～ 4 8h,小鼠胸腺细胞和脾细胞中 p53m RNA水平均未见明显的变化 ;0 .5～ 6.0 Gy X射线全身照射后 4 h,小鼠胸腺细胞和脾细胞中 p53m RNA水平亦未见明显的改变。结果提示 ,X射线全身照射可诱导小鼠淋巴细胞 p53蛋白表达 ,其 p53蛋白表达增加是通过转录后机制实现的。

X射线照射对 EL-4 淋巴瘤细胞周期进程及细胞倍增时间的影响

目的研究不同剂量Ｘ射线照射对ＥＬ４淋巴瘤细胞周期进程及细胞倍增时间的影响。方法离体培养ＥＬ４细胞，计算细胞倍增时间。ＰＩ荧光探针标记，流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞周期各时相细胞的变化。结果０．５Ｇｙ～４．０ＧｙＸ射线照射使ＥＬ４细胞倍增时间明显延长，Ｇ１及Ｇ２期细胞数明显增加。结论０．５Ｇｙ～４．０ＧｙＸ射线照射诱导ＥＬ４细胞明显的Ｇ１及Ｇ２期细胞阻滞，此变化显示出明显的剂量效应和时间效应。细胞周期进程变化与细胞倍增时间延长密切相关。

低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的剂量效应

本研究采用 X射线全身照射昆明系雄性小鼠模型 ,通过流式细胞仪观察低剂量辐射诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程适应性反应的诱导剂量 (D1 剂量 )及其后攻击剂量 (D2 剂量 )的剂量范围。动物随机分为假照组、D2 对照组和 D1 + D2 实验组。结果表明 ,D1 + D2 组胸腺细胞凋亡小体百分数不同程度地低于 D2 组 ,并且减轻 G1 和 G2 + M期阻滞 ,导致 S期 DNA合成的细胞增加 ;当 D1 达 2 0 0 m Gy时 ,不再诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的适应性反应。本实验结果说明 ,D1 在 2 5～ 1 0 0 m Gy(剂量率为 1 2 .5m Gy/min) ,D2 在 1 .0～ 2 .0 Gy(剂量率为 0 .2 87Gy/min) ,接受 D1 和 D2 照射的时间间隔为 6 h。

小剂量 X 射线诱导 EL-4 细胞凋亡及 G_1 期阻滞的适应性反应

采用流式细胞术（ＦＣＭ）观察了小剂量Ｘ射线预照射对其后大剂量照射所致ＥＬ－４细胞凋亡及细胞周期的影响。证实了０．０７５Ｇｙ预照射可明显降低其后２Ｇｙ所致细胞凋亡，减轻Ｇ１期阻滞，并促进细胞ＤＮＡ合成，说明小剂量辐射可诱导ＥＬ－４淋巴瘤细胞凋亡及Ｇ１期阻滞的适应性反应。

小剂量辐射抑制肿瘤细胞播散的机理研究

观察了静脉注入肿瘤细胞前24h，75mGyX射线全身照射对小鼠免疫功能的影响。结果表明照射组小鼠胸腺S期细胞百分数于照射后4d，胸腺CD3+细胞百分数于照射后2、8d，脾细胞IL－2和γIFN分泌于照射后4d，脾脏NK细胞活性于照射后2、4、6和8d均较假照射组明显增高（P＜0．05～0．01）。提示小剂量辐射增强机体免疫功能可能与其抑制肿瘤细胞播散有关。

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞CyclinB_1和p34^(cdc2)蛋白表达的影响

本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量 X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞 CyclinB1和 p34cdc2 蛋白表达的变化。结果表明 ,与假照组相比 ,75 m Gy X射线全身照射后 8h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始升高 ,12 h达高峰 ,4 8h恢复至正常水平 ;而 2 Gy照射后 4 h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始降低 ,12 h降至最低 ,2 4 h有回升趋势 ,4 8h恢复至假照水平。p34cdc2 蛋白的表达 ,与假照组相比 ,75 m Gy照射后 4～ 4 8h未见明显变化 ;而 2 Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后 Cyclin B1蛋白表达的变化基本一致。提示 :低剂量 X射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞 Cyclin B1蛋白表达增强 ,从而促进细胞周期进程 ,但对 p34cdc2 表达无影响 ;相反 ,较高剂量照射导致 Cyclin B1和p34cdc2蛋白表达均下降 ,最终发生 G2 阻滞。

小剂量辐射增强化疗药物的抑瘤作用及其机制

在丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）或环磷酰胺（ＣＰ）腹腔注射前６ｈ，给予荷有Ｌｅｗｉｓ肺癌的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠７５ｍＧｙＸ射线全身照射（ＷＢＩ）。结果表明７５ｍＧｙＸ射线全身照射可增强化疗药物的抑瘤作用，肿瘤生长速度明显减慢。同时对与肿瘤免疫相关的某些免疫学指标进行了观察，发现７５ｍＧｙＸ射线全身照射可以促进荷瘤鼠的胸腺和脾细胞的增殖，促进自然杀伤细胞（ＮＫ）、淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）和特异性杀伤性Ｔ细胞（ＣＴＬ）的杀伤功能，增加脾细胞白细胞介素Ｉ（ＩＬ－２）的分泌量，并且减低ＭＭＣ和ＣＰ对免疫功能的损害。

低剂量 X 射线全身照射诱导脾淋巴细胞内[ Ca^(2+) ]_i 及 C D71 表达的适应性反应

为 了观察低 剂量 Ｘ 射 线全身照 射诱导脾 淋巴细 胞内［ Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 及 Ｃ Ｄ７１ 表 达的 适应 性反应。采用 Ｆｕｒａ２ 负载，双 波长荧 光测定法 检测 细胞 内［ Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 浓 度。 采用 单克 隆 抗体 免 疫荧 光标记，流 式细胞术 检测淋巴 细胞 Ｃ Ｄ７ １ 表达。发现 ００７５ Ｇｙ 低 剂量 预照 射 能明 显减 轻 其后 ２０ Ｇｙ 攻击剂量 照射对 细 胞 内［ Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 及 Ｃ Ｄ７ １ 的 抑 制 作 用 。低 剂 量 辐 射 能诱 导 脾 淋 巴 细 胞［ Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 及 Ｃ Ｄ７ １ 表达的适 应性反 应。此变 化可能是 低剂量 辐射诱导 Ｔ 淋巴细胞 免疫适 应性反 应的 重要 机制之一。

胸腺细胞成熟分化不同阶段的辐射敏感性

采用免疫荧光流式细胞术研究了胸腺细胞及其亚组的辐射效应。结果表明：胸腺细胞具有较高的辐射敏感性，并且在胸腺细胞成熟分化的不同阶段辐射敏感性不同。成熟的胸腺细胞具有相对的辐射抗性。各亚组辐射敏感性依次为：ＣＤ４＋ＣＤ８＋＞ＣＤ４－ＣＤ８－＞ＣＤ４－ＣＤ８＋＞ＣＤ４＋ＣＤ８－，Ｄ３７值分别为０．７６、０．９２、１．７７Ｇｙ和３．６７Ｇｙ。全胸腺细胞的Ｄ３７为０．８４Ｇｙ。ＣＤ３＋细胞的Ｄ３７值为２．０Ｇｙ。

低剂量电离辐射对胸腺细胞游离钙的影响

应用Ｆｕｒａ２ＡＭ荧光探针研究了低剂量Ｘ射线照射后２４ｈ昆明鼠胸腺细胞游离钙浓度的变化。结果表明：７５ｍＧｙ全身照射后胸腺细胞［Ｃａ２＋］ｉ明显高于对照组，而加入次佳浓度的ＣｏｎＡ则使［Ｃａ２＋］ｉ较单纯照射更明显增高。提示低剂量辐射可促进Ｔ淋巴细胞的信号传递。

小剂量电离辐射增强小鼠免疫器官c－fos基因的表达

应用原位杂交方法观察７５ｍＧｙＸ射线全身照射后不同时间小鼠胸腺、脾、肠系膜淋巴结ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ转录水平的变化。结果发现，假照组胸腺、脾、肠系膜淋巴结内巨噬细胞、多突起细胞、部分淋巴细胞（主要为大淋巴细胞）ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ有低水平基础表达；７５ｍＧｙ全身照射后ｃ－ｆｏｓ的转录水平明显增高，胸腺为１ｈ达峰值，脾脏２ｈ达峰值，肠系膜淋巴结变比幅度较小，但持续时间较长。胸腺和脾脏阳性细胞１２ｈ基本恢复至假照水平，雨淋巴结细胞ｃ－ｆｏｓ至照后１２ｈ仍稍高于对照组。实验结果表明，小剂量电离辐射可使免疫活性细胞ｃ—ｆｏｓ的转录水平上调。

黑色素瘤B16细胞热休克蛋白-抗原肽复合物的体内外抑瘤效应

目的：黑色素瘤Ｂ１６细胞胞浆ＨＳＰ－抗原肽复合物（ＨＡＣ）的制备、免疫原性的诱导及其抑瘤作用的研究。方法：采用Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ提取和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００凝胶过滤制备Ｂ１６细胞ＨＡＣ，通过Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠体内诱导特异性ＣＴＬ，再经体内、体外实验检测其抑癌作用。结果：凝胶过滤获得的含６０～９７ｋＤ蛋白的４１，４７和５３管的ＨＡＣ可以降低肿瘤发生率、延长肿瘤出现时间及降低小鼠死亡率。结论：Ｂ１６细胞胞浆中的６０～９７ｋＤ的ＨＡＣ具有免疫原性及抑瘤作用，为制备肿瘤疫苗提供了实验依据。

低剂量X射线全身照射对小鼠脾细胞转铁蛋白受体表达的影响

采用直接免疫荧光流式细胞术方法，检测了低剂量Ｘ射线全身照射对小鼠脾脏淋巴细胞转铁蛋白受体（ＴｆＲ）表达的影响。结果表明，低剂量Ｘ射线全身照射可增强脾脏淋巴细胞ＴｆＲ的表达，由于ＴｆＲ是Ｔ淋巴细胞激活与增殖过程中表达在细胞表面的重要受体之一，与Ｔ淋巴细胞激活与增殖有着密切关系。所以上述结果可能是低剂量电离辐射增强机体免疫功能的又一证据，同时也说明ＴｆＲ在低剂量电离辐射免疫增强效应中起着重要作用。研究证实，Ｔ淋巴细胞激活与增殖是低剂量电离辐射增强机体免疫功能的中心环节。

不同剂量X射线全身照射对小鼠脾细胞转铁蛋白受体表达的影响

本文采用直接免疫荧光流式细胞术方法，检测了不同剂量Ｘ射线全身照射对小鼠脾细胞转铁蛋白受体（ＴｆＲ）表达的影响及白细胞介素－２（ＩＬ－２）活性的变化。结果表明，大剂量照射（０．５～６．０Ｇｙ）抑制ＴｆＲ的表达，且随照射剂量的增加ＴｆＲ的表达呈明显的剂量依赖性下降，４Ｇｙ及以上剂量照射明显抑制ＩＬ－２活性；小剂量（２５～２００ｍＧｙ）照射时，７５ｍＧｙ剂量照射刺激ＴｆＲ的表达并可增强ＩＬ－２活性。说明大剂量和小剂量照射对ＴｆＲ的表达产生不同的辐射效应，ＴｆＲ在辐射免疫效应产生过程中发挥作用。

不同剂量X射线全身照射对小鼠胸腺细胞周期进程的影响

本文采用细胞计量术研究了不同剂量 X射线全身照射后小鼠胸腺细胞周期进程的变化。结果表明 ,75m Gy X射线全身照射后 2 4～ 72 h胸腺细胞周期各时相细胞数目发生明显变化 ,G0 /G1期细胞数低于对照组 ,S期细胞数增多 ,说明其 DNA合成能力增强 ,至 7d时达到对照组水平 ;2 .0 Gy全身照射后 4h时胸腺细胞便开始出现明显的 G2 阻滞 ,12 h G2 阻滞达最高点 ,72 h其细胞周期进程明显加快 ,至 7d时达对照组水平。不同剂量全身照射后 2 4 h的结果表明 ,在小剂量范围内 (50～ 2 0 0 m Gy) ,50 m Gy照射后促进胸腺细胞的 G0 /G1期细胞进入 S期 ,DNA合成能力增强 ;然而当剂量达 10 0 m Gy后 ,开始出现 G1阻滞 ;在大剂量范围内 (0 .5～ 4 .0 Gy) ,胸腺细胞的 S期细胞数表现出明显的剂量依赖性减少 ,伴有 G0 /G1期细胞百分数增高 ,同时 G2 +M期细胞数随剂量增加而增加 ,说明大剂量全身照射后 ,胸腺细胞出现明显的 DNA合成抑制 ,G1和 G2 阻滞。

75 mGy X 射线全身照射激活小鼠免疫细胞转录因子 CREB、NF-kB 及 AP1

采用凝胶电泳迁移率变化分析和寡核苷酸竞争抑制方法检测小剂量Ｘ射线对小鼠免疫细胞基因转录水平调控的影响。７５ｍＧｙＸ射线全身照射小鼠后４ｈ，脾细胞核蛋白提取物的转录因子ＣＲＥＢ及ＮＦｋＢ与其基因启动部位增强子控制序列的结合活性，分别增强７倍及５倍。胸腺细胞核蛋白提取物ＣＲＥＢ、ＮＦｋＢ及ＡＰ１的结合活性分别增强６倍，４．３倍及２倍。而ＳＰ１、ＧＲＥ及ＯＣＴ１无明显变化。竞争抑制试验证实ＣＲＥＢ及ＮＦｋＢ与控制序列为特异性结合。提示小剂量Ｘ射线全身照射选择性地激活免疫细胞ＣＲＥＢ、ＮＦｋＢ及ＡＰ１，通过与增强子控制序列位点的结合，形成特异的诱导基因转录。