子宫内膜异位症病灶离体内膜组织IL-6的分泌量研究

目的:研究白细胞介素6（IL-6）在子宫内膜异位症（endometriosis,EM）发病中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测体外培养EM患者（12例）的异位内膜细胞和在位内膜细胞培养上清液中IL-6水平并与10例正常子宫内膜细胞作对照;以及肿瘤坏死因子α（TNF-α）对异位内膜细胞分泌IL-6的影响。结果:三种内膜细胞培养上清液中IL-6水平明显不同。异位内膜细胞分泌的IL-6显著高于相应的在位内膜（P<0.01）,而后者又明显高于正常子宫内膜（P<0.05）,即IL-6分泌量异位内膜细胞>在位内膜细胞>正常子宫内膜细胞。TNF-α作用24h后可明显促进异位内膜细胞IL-6的分泌（P<0.01）。结论:异位内膜细胞可自主分泌高水平IL-6,TNF-α进一步诱导其分泌,与EM患者腹腔免疫和炎症反应相关。EM患者在位内膜细胞分泌IL-6的活性明显升高,可能导致其异位种植。

神经生长因子低亲合力受体在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞的表达

目的探讨神经生长因子低亲合力受体(P75)在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞(HSCs)的分布及作用机制。方法对四氯化碳(CCl4)法制备的肝纤维化大鼠肝组织及肝穿刺获取的肝纤维化患者肝组织,常规石蜡包埋;大鼠离体培养的活化HSCs离心涂片,行免疫组织化学染色,确定P75的表达分布。结果P75在大鼠离体培养的活化HSCs膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化患者HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化大鼠HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在健康人和正常对照大鼠HSCs膜,免疫组织化学染色呈阴性,表明人和大鼠活化的HSCs膜表达P75。结论P75为肝纤维化的治疗提供了新的靶点。

大鼠睾丸纤维化模型的建立

目的 :建立大鼠睾丸纤维化模型 ,为进一步研究睾丸纤维化的发病机制打下良好基础。 方法 :将Wistar大鼠分为正常组 (12只 )和模型组 (40只 ) ,采用制造自身免疫性睾丸炎的经典方法结合单侧睾丸内注射卡介苗 ,建立睾丸纤维化模型。 结果 :距第 1次免疫 80d时 ,自身免疫性睾丸炎的发生率为 10 0 % ,睾丸纤维化的发生率为11.1% ;距第 1次免疫 14 0d时 ,自身免疫性睾丸炎的发生率为 10 0 % ,睾丸纤维化的发生率为 81.5 %。 结论

IL-1β与TMD患者关节病变程度关系的研究

目的 :探讨TMD患者关节液中IL 1β的水平与关节组织破坏程度的关系。 方法 :在关节造影或关节冲洗时 ,抽取 5 1名TMD患者 5 6侧关节的关节液 ,依据临床和影像学检查结果 ,将单纯关节囊炎 /滑膜炎、可复性盘前移位的关节液归为轻症组 ,将不可复性盘前移位、盘穿孔及骨关节炎的关节液归为重症组 ,15名正常志愿者 15侧关节的关节液为对照组 ;采用双抗体夹心酶联免疫法 (ABC ELISA)检测所得关节液标本中的IL 1β水平 (表达为每mg蛋白质中所含IL 1β的pg数 ,pg/mg)。 结果 :关节液中IL 1β水平 ,轻症组 ( 5 2 .62±42 .2 4pg/mg)及重症组 ( 78.78± 43 .65pg/mg)均显著高于对照组 ( 9.2 6± 9.86pg/ml) ,其中重症组又显著高于轻症组。结论 :IL 1β参与了TMD关节组织的病理破坏过程 ,随着病变程度的加重IL

NGF及其受体P75在四氯化碳中毒性大鼠肝组织中表达增强

目的观察四氯化碳中毒时神经生长因子(NGF)及其受体P75在大鼠肝组织的表达变化,探讨NGF在肝纤维化发生机制中的可能作用。方法用四氯化碳致大鼠肝中毒模型,用RT-PCR法和Western blot法,分别检测NGF及其受体P75在大鼠肝组织中的表达。结果与对照组大鼠肝组织中NGFmRNA及其受体P75蛋白表达量比较,造模组24 h显著增高(P<0.01,n=6),造模48 h和72 h迅速回降,但仍显著高于对照组(P<0.05,n=6)。结论在四氯化碳中毒性大鼠的肝组织中,NGF及其受体P75的表达可能与肝纤维化的形成密切相关。

大鼠非特异性睾丸炎模型的建立及生精上皮的变化

目的:探讨大鼠生精上皮在非特异性炎症状态下的变化。方法:20只成年W istar雄性大鼠随机分为2组(对照组和实验组),对照组腹腔注射生理盐水(1 m l/kg),实验组注射细菌内毒素(LPS),剂量为1 mg/kg,两组均隔1 d注射1次,距第1次注射10 d后取材。HE染色观察睾丸组织的病理改变,免疫组化方法探讨生精上皮内增殖细胞核抗原(PCNA)、α连接素的变化。结果:实验组睾丸组织有明显炎性改变;生精上皮内PCNA表达量显著降低:每个生精小管(仅精原细胞着色的小管)阳性细胞个数为(59±5)个,比对照组明显减少(P<0.01),而这种小管占总管数的比例显著升高(P<0.01),为0.673±0.054;实验组大鼠睾丸内α连接素表达量亦减少(P<0.01),阳性反应颗粒平均光密度为0.150±0.014。结论:睾丸炎症时精原细胞增殖和生精上皮内细胞间粘附力度均减弱,这可能是睾丸炎导致男性不育的原因之一。

清肝化瘀方对大鼠肝癌前病变模型Notch信号系统的影响

目的:探讨清肝化瘀方对大鼠肝癌前病变模型Notch信号系统的影响。方法:用二乙基亚硝胺(DEN)建立Solt-Farber二步大鼠肝癌前病变的短期实验模型,应用不同浓度的清肝化瘀方进行干预,酶组织化学方法检测三磷酸腺苷酶(ATP酶)的表达变化,免疫组织化学方法检测白蛋白(ALB)、Notch1、Notch1配体Jagged的表达变化。结果:与模型组比较,清肝化瘀方等效剂量、大剂量组ATP酶、ALB表达水平显著升高(P<0.01),Notch1、Jagged表达水平显著降低(P<0.01)。结论:清肝化瘀方可有效阻断大鼠肝癌前病变,其作用机理可能与调节Notch信号通路有关。

两步酶分层消化法用于大鼠视网膜色素上皮细胞的培养

目的探索体外分离、培养大鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞的方法,建立其体外培养模式。方法采用两步酶分层消化法分离获取大鼠RPE细胞,F12培养液培养;生长曲线、细胞分裂时间等指标观察细胞生存活力及增生状态;光镜、免疫组织化学法形态学鉴别及细胞鉴定,电镜观察超微结构。结果收获的大鼠RPE细胞纯度高,量多,体外生长旺盛,达到融合的时间较短。原代细胞呈多角形,含大量色素;传代细胞呈梭形。电镜显示胞浆内含黑色素颗粒及各种细胞器。结论两步酶分层消化法是分离培养大鼠RPE细胞的理想方法,培养的细胞可用于RPE的体外实验研究。

吸入一氧化氮对烟雾吸入性损伤早期肺组织匀浆TNF-α IL-1β IL-6和IL-8水平的影响

目的烟雾吸入性损伤后早期吸入20ppm的一氧化氮(NO)对大鼠肺组织匀浆肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL1β)、白细胞介素6(IL6)和白细胞介素8(IL8)4种细胞因子水平的影响。方法72只雄性Wistar大鼠,体重为250～350g,随机分为3组,每组均行气管切开复制成重度烟雾吸入性损伤模型并用呼吸机辅助呼吸。损伤后Ⅰ组吸入空气,Ⅱ组吸入氧气(FiO2=04),Ⅲ组吸氧(FiO2=04)+20ppmNO。另取8只为伤后阳性对照,8只非致伤大鼠为基础对照。制备肺组织匀浆后,用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABCELISA)测定TNFα、IL1β、IL6和IL8含量。结果4种细胞因子含量伤后均明显升高。伤后12h及24h时,Ⅲ组IL1β、IL6、IL8及TNFα均低于Ⅱ组(P<005)。结论吸入浓度为20ppm的NO对烟雾吸入性损伤早期大鼠的肺组织中IL1β、IL6、IL8和TNFα的升高有明显的抑制作用。

苦参碱诱导大鼠肝卵圆细胞表型改变

背景与目的:在肝细胞癌发生过程中出现卵圆细胞不典型增生,阻断其恶变或诱导其向肝细胞方向分化是肝癌化学预防的重要途径,为寻找有效的卵圆细胞分化诱导药物,我们建立了大鼠卵圆细胞增殖模型,研究苦参碱对化学诱发肝癌模型中卵圆细胞表型的改变。方法:SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴加三分之二肝切除术建立卵圆细胞增殖模型,模型组、低剂量苦参碱组、高剂量苦参碱组、对照组,光镜、透射电镜观察卵圆细胞的超微结构;免疫组织化学方法检测造血干细胞标志Thy-1、甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)表达的变化;酶组织化学方法检测γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT酶)、三磷酸腺苷酶(adenosinetriphosphatase,ATP酶)表达的变化。结果:超微结构显示高剂量苦参碱组卵圆细胞体积较模型组大,含有更多的粗面内质网等细胞器。Thy-1免疫组化表达指数模型组为8.15±2.64,低剂量苦参碱组为5.27±1.32,高剂量苦参碱组为3.83±0.35,对照组为1.63±0.22,高剂量苦参碱组显著低于模型组(P<0.05);AFP阳性细胞计数模型组为15.36±4.42,低剂量苦参碱组为9.75±2.41,高剂量苦参碱组为7.33±1.38,对照组为2.51±0.93,高剂量苦参碱组显著低于模型组(P<0.05);低剂量苦参碱对γ-GT阳性病灶抑制率为33.35%,高剂量苦参碱抑制率为55.37%,高剂量苦参碱组显著高于低剂量苦参碱组(P<0.05)。结论:苦参碱抑制卵圆细胞增生,使卵圆细胞的超微结构发生改变,降低Thy-1、AFP、γ-GT酶表达,表明苦参碱可诱导卵圆细胞表型改变。

颞下颌关节盘移位程度及其与关节疼痛的关系

目的 :对关节盘移位程度进行定量研究并评价移位程度与关节疼痛的关系 .方法 :利用MRI对 4 4例单侧关节疼痛颞下颌关节紊乱 (TMD)患者的 88侧颞下颌关节 (TMJ)进行闭口斜矢状位T1加权成像 .关节盘移位程度的测量方法 :MR成像层面上关节结节最下点 (A)到外耳道最上点 (E)的连线为直线AE ,髁突顶点 (C)及关节盘最后点 (D)与直线AE垂直相交点分别为C′、D′ ,分别求得AD′距离、C′D′距离 ,代表关节盘在关节窝前后方向的位置 .依据可视疼痛模拟标尺 (VAS)值将疼痛侧关节分为轻、中、重度疼痛 3组 ,以测量的AD′、C′D′距离 ,同非疼痛侧关节AD′、C′D′距离做自身对照进行统计分析 .结果 :轻、中、重度疼痛组及无疼痛组AD′和C′D′分别为(8.7± 2 .8)mm和 (1 .2± 3.2 )mm ;(6 .4± 2 .5 )mm和(4 .1± 2 .9)mm ;(7.5± 2 .8)mm和 (2 .2± 3.4 )mm ;(1 0 .9± 1 .7)mm和 (- 0 .9± 1 .7)mm ,统计学分析非疼痛组AD′、C′D′与轻、中、重度疼痛组之间均有显著差别 ;除轻度与中度疼痛组有统计学差别外 ,轻度与重度组间、中度与重度组间AD′、C′D′均无统计学意义 .结论 :TMJ疼痛与盘移位有关 ,但疼痛程度与关节盘前移位程度无相关性 。

清肝化瘀方药对大鼠肝癌前病变中卵圆细胞表型的影响

背景与目的:探讨清肝化瘀方药阻断二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)Solt_Farber二步法致大鼠肝癌前病变的机制。材料与方法:用DEN建立Solt_Farber二步法肝癌前病变短期动物模型,以不同浓度的清肝化瘀方药进行干预。透射电镜观察此模型中卵圆细胞的超微结构;酶组织化学方法检测γ_谷胺酰转肽酶(γ_GT酶)、葡萄糖_6_磷酸酶(G_6_P酶)的表达变化;免疫组织化学方法检测甲胎球蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)表达的变化。结果:清肝化瘀方药能明显抑制肝癌前病变中肝细胞γ_GT酶的表达,增加G_6_P酶的表达;同时降低卵圆细胞及肝细胞中AFP的表达,增加ALB的表达。结论:清肝化瘀方药可有效阻断肝癌前病变,大剂量组较小剂量组作用明显,其作用机制可能与诱导卵圆细胞向肝细胞主向分化有关。

榄香烯与化疗药物联合作用对癌细胞株生长的影响

用肾透明细胞癌细胞株KCC和红白血病细胞林K562作为靶细胞研究了中药榄香烯和化疗药物的体外协同应用对癌株生长的影响。单独用药情况下，KCC对榄香烯、阿霉素、5氟脲嘧啶均呈不同程度的抵抗，K562则相对较敏感。榄香烯合用阿霉素或5氟脲嘧啶后，对KCC的抑制率明显增强，其中榄香烯加阿霉素组效果要强于合用5－Fu，联合用药后对K562的抑制率也明显增强。经统计学分析：单独用药与联合用药之间差异显著（P＜0．01），实验结果对临床应用榄香烯治疗实质性肿瘤时选择良好的协同药物具有参考意义。

关节液蛋白含量与颞下颌关节疼痛患者影像学特征的对照研究

目的 探讨关节液中的蛋白浓度与关节影像学特征性表现及疼痛的关系。方法 采用磁共振成像 (MRI)金标准对4 0例单侧颞下颌关节 (TMJ)疼痛患者进行结构紊乱、骨关节炎及关节渗液的诊断 ,并在关节上腔冲洗治疗时收集关节液标本 ,以不存在结构紊乱、骨关节炎及关节渗液的关节液标本为对照 ,15侧无症状志愿者的关节液为正常对照 ;采用双金鸡宁酸法检测关节液中蛋白浓度。结果 患者关节液中蛋白含量的高低与结构紊乱、关节渗液及骨关节炎均无相关性 ;患者关节液中蛋白含量与正常人蛋白含量无差异。结论 关节液中的蛋白水平不能反映在影像学上代表关节炎症的结构紊乱。

苦参碱和氧化苦参碱对体外培养兔视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的观察苦参碱和氧化苦参碱对体外培养兔视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPEC)增殖的影响,并与苏拉明进行比较。方法生长状态良好的第4代RPEC接种于3块96孔细胞培养板,每块培养板上设苦参碱、氧化苦参碱、苏拉明各5个浓度组及空白对照组各5个复孔。培养24、48、72h时各取1块培养板,噻唑蓝比色法测定每孔的吸光度值,计算细胞增殖抑制率,对各个药物浓度组在不同作用时间的吸光度值与空白对照组进行统计学比较,并求得3种药物在加药培养72h时的半数抑制率(50% inhibiting concentration,IC_(50))浓度。结果苦参碱、氧化苦参碱和苏拉明对RPEC的增殖均有抑制作用,随着药物剂量的增加和作用时间的延长,3种药物对细胞增殖的抑制率都逐渐增加。苦参碱、氧化苦参碱和苏拉明作用72h的IC_(50)浓度分别为74.89、141.61和186.24mg/L。结论苦参碱和氧化苦参碱对体外培养兔RPEC的增殖均有明显的抑制作用,呈现时间和剂量依赖性,苦参碱作用较强。

颞下颌关节关节液中5-羟色胺的表达与颞下颌关节关节源性疼痛的关系

目的探讨颞下颌关节紊乱病(TMD)患者关节液中5-羟色胺(5-HT)的表达水平与颞下颌关节(TMJ)关节源性疼痛的关系。方法用酶联免疫吸附试验法检测TMD患者的126侧关节和健康志愿者的32侧关节的关节液标本中的5-HT。126侧TMD患者的关节液标本分为疼痛组(n=90)和无痛组(n=36);32名正常志愿者的32侧关节液设为对照组(n=32)。结果所有标本都检出5-HT,无痛组含量为(178.750±64.979)ng/ml,疼痛组为(223.522±82.636)ng/ml,对照组为(136.125±55.075)ng/ml。疼痛组与无痛组、疼痛组与对照组以及无痛组与对照组间差异有显著性(P<0.05)。结论TMD患者关节内存在炎症状态,关节疼痛与关节液中5-HT的表达水平密切相关,但与疼痛程度的关系尚需进一步研究。

脉络膜血管平铺及CD105染色在大鼠脉络膜新生血管研究中的评价意义

目的评价异硫氰酸荧光素-右旋糖酐脉络膜血管平铺及CD105免疫组织化学染色作为分析指标在实验性脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)治疗研究中的意义。方法激光光凝方式建立棕色挪威大鼠CNV模型,30只大鼠随机分为治疗组、生理盐水组、对照组,每组各10只。分别给予Endostatin 20μL(5 g.L-1)、生理盐水20μL视网膜下注射、对照组光凝后不做处理,观察期为14 d。在光凝后第7天及第14天行颈动脉灌注异硫氰酸荧光素-右旋糖酐标记CNV,眼球标本制成脉络膜铺片进行CNV定量分析,组织病理切片光镜、CD105及因子Ⅷ免疫组织化学染色观察,比较不同检测方法在评价血管生成抑制剂对CNV治疗效应中的意义。结果造模后第7天,光凝部位CNV呈一高荧光团;光凝后第14天,表现为形态各异的高荧光微血管网;脉络膜血管平铺CNV定量分析显示,光凝后第14天Endostatin组CNV面积小于生理盐水组及对照组,Endostatin组CNV面积为(15.58±5.32)×103μm2,生理盐水组及对照组CNV面积为(24.01±4.67)×103μm2、(25.27±5.08)×103μm2(F=307.351,P<0.001);CD105免疫组织化学显示,光凝后第14天生理盐水组及对照组光斑内CD105及因子Ⅷ呈强阳性表达,各组在视网膜内核层及神经纤维层内皮细胞均无CD105阳性表达;光镜观察造模后第7天激光损伤部位呈纺锤样外观,外核层排列紊乱,光感受器外节消失,RPE屏障破坏,光斑处CNV形成;光凝后第14天,光凝斑部位脉络膜增厚,内皮细胞及微血管增生,大量CNV形成;Endostatin组内皮细胞增生数量及新生血管明显少于生理盐水组和对照组。结论脉络膜血管平铺于CNV定量评估具有一定意义;与因子Ⅷ的检测相比,CD105对于CNV的定性评估更具特异性;Endostatin可以有效抑制CNV的形成。

MMP-2在颞下颌关节紊乱病患者关节液中的表达

目的:探讨TMD患者关节液中MMP-2的表达水平与关节病损程度的关系.方法:用ELISA法检测TMD患者的126侧关节和健康志愿者的32侧关节的关节液标本中的MMP-2水平.患者关节液标本分为(1)C/S组;(2)ID组;(3)OA组;健康志愿者关节液为对照组.结果:关节液中MMP-2含量:OA组(43±14)μg/L,ID组(35±13)μg/L,C/S组(30±8)μg/L,对照组(21±5)μg/L.统计学检验:OA组与ID组对照组比较均有差异(P<0.0083);C/S组与对照组间无差异.OA组与C/S以及ID组与C/S组间比较亦无差异.结论:MMP-2参与了TMJ关节软骨的分解;TMD患者关节液中MMP-2的表达水平随着关节不同的病变增加而改变,表明它们不仅参与了关节组织的破坏性病理改变,而且与关节疾病程度密切相关,其含量可以作为评估TMJ软骨是否发生病理损害的客观生化指标.

大鼠额叶皮层局灶毁损对脾细胞增殖的影响

为了观察额叶皮层对大鼠细胞免疫功能的调控作用，选用雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，分为左侧额叶皮层毁损组、右侧额叶皮层毁损组、假手术对照组和无创伤对照组，于术后ｄ１９检测其外周血中ＣＤ８＋细胞和脾细胞增殖。结果：假手术组与无创伤对照组间外周血ＣＤ８＋细胞无显著差异；左、右额叶毁损组外周血ＣＤ８＋细胞和脾细胞增殖指数（ＳＩ）均显著高于假手术组（Ｐ＜０．０１）。结论：额叶皮层毁损可增强机体细胞免疫功能，且左右对称。