目的探讨低氧条件下喉癌Hep-2细胞磷酸化信号转导子和转录激活子3(phosphorylation signal transducer and activator of transcription 3,p-Stat3)及低氧诱导因子1α(hypoxiainduciblefactor1α,HIF-1α)、VEGF的表达及Stat3反义寡核苷...目的探讨低氧条件下喉癌Hep-2细胞磷酸化信号转导子和转录激活子3(phosphorylation signal transducer and activator of transcription 3,p-Stat3)及低氧诱导因子1α(hypoxiainduciblefactor1α,HIF-1α)、VEGF的表达及Stat3反义寡核苷酸(antisense oligodenucleotides,AS-ODN)对其表达的影响。方法应用流式细胞术检测常氧和低氧不同时间Hep-2细胞p-Stat3、HIF-1α、VEGF蛋白表达,检测Stat3AS-ODN转染Hep-2细胞24h,再于低氧条件下培养6h后Hep-2细胞p-Stat3、HIF-1α、VEGF蛋白表达。应用MTT法检测不同浓度(100、200nmol/L)Stat3AS-ODN、Stat3正义寡核苷酸(sense oligodenucleotides,S-ODN)、脂质体作用于Hep-2细胞后的细胞存活率。结果与常氧培养相比较,低氧培养条件下Hep-2细胞p-Stat3表达的荧光指数(fluorescent index,FI)在3h即有增长,6h后稳定;HIF-1α及VEGF的FI值6h和12h后增长,p-Stat3表达的变化与HIF-1α变化呈明显正相关性(r=0.691,P<0.01)。低氧条件下Stat3AS-ODN转染Hep-2细胞后抑制p-Stat3表达,HIF-1α、VEGF的蛋白表达FI值也随之下降,Pearson相关分析显示其变化呈正相关性(r=0.912,P<0.01)。Stat3AS-ODN转染Hep-2细胞后MTT细胞存活率随Stat3AS-ODN浓度(100、200nmol/L)增加而下降,与Stat3S-ODN对照组和脂质体对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论喉癌Hep-2细胞中存在由低氧激活的Stat3信号转导,p-Stat3于HIF-1α及VEGF表达之前出现增长,阻断Stat3后低氧条件下HIF-1α表达降低,提示Stat3调节HIF-1α表达。展开更多
目的探讨RNA干扰信号转导和转录活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）基因联合放射治疗对喉癌Hep-2裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人喉癌Hep-2裸鼠移植瘤动物模型28只，采用随机数字表法将动...目的探讨RNA干扰信号转导和转录活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）基因联合放射治疗对喉癌Hep-2裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人喉癌Hep-2裸鼠移植瘤动物模型28只，采用随机数字表法将动物随机分为4组：阴性质粒对照组、干扰组、放疗组和干扰＋放疗组，定期测量肿瘤体积。放射治疗结束后15d处死动物，称量瘤重，计算抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。免疫组化SP法结合图像分析技术对各组移植瘤磷酸化STAT3、B淋巴细胞2（bcl-2）、p53、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达情况进行定量分析，检测移植瘤的微血管密度，流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率。结果干扰组、放疗组和干扰＋放疗组的抑瘤率分别为19．68％、34．76％和67．70％。干扰＋放疗组磷酸化STAT3蛋白表达较其他组显著降低（P〈0．01），肿瘤微血管密度明显低于阴性对照组和放疗组（P〈0．01），肿瘤细胞凋亡率显著增加（P〈0．01）。干扰＋放疗组磷酸化STAT3表达与p53、bcl-2、VEGF及微血管密度呈正相关趋势（r值分别为0．738、0．727、0．735、0．691，P值均〈0．01），与肿瘤细胞凋亡率呈负相关趋势（r=-0．765，P〈0．01），p53和VEGF蛋白表达分别与微血管密度呈正相关趋势（r值分别为0．784、0．641，P值均〈0．01）；bcl-2蛋白表达与凋亡率呈负相关趋势（r=-0．883，P〈0．01）。结论RNA干扰STAT3基因联合放射治疗能显著抑制喉癌裸鼠移植瘤的生长。展开更多
目的检测S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，Skp2）在不同分化程度喉癌组织标本中的表达，并探讨应用RNA干扰技术抑制skp2基因表达对喉癌Hep2细胞生长、凋亡、p27表达以及细胞周期的影响。方法应用免疫组织化学...目的检测S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，Skp2）在不同分化程度喉癌组织标本中的表达，并探讨应用RNA干扰技术抑制skp2基因表达对喉癌Hep2细胞生长、凋亡、p27表达以及细胞周期的影响。方法应用免疫组织化学方法检测Skp2蛋白在不同分化程度喉癌组织标本中的表达，根据设计siRNA的原则，针对人Skp2的mRNA序列，设计并合成编码siRNA的两条寡核苷酸序列，构建重组质粒pGPU6Skp2，转染重组质粒至Hep-2细胞中，应用流式细胞术检测skp2蛋白的表达。采用四甲基偶氮唑蓝法（MrIT）检测细胞增殖变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期和p27蛋白表达的变化。结果52例喉癌组织标本中skp2蛋白均呈阳性表达，高分化喉癌组织标本Skp2蛋白表达低于中、低分化组（X2=7．33，P〈0．05）。经酶切和DNA测序鉴定证实重组质粒上连接序列确实为所设计序列。pGPU6-Skp2转染组skp2蛋白表达明显低于空质粒对照组（f=19．42，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组细胞增殖抑制率为26．93％，明显高于空质粒对照组2．47％（t=15．23，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组细胞凋亡率为11．71％，明显高于空质粒对照组1．93％（t=17．92，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组s期细胞所占比例明显高于空质粒对照组（t=7．73，P〈0．05）；pGPU6-Skp2转染组p27蛋白表达明显高于空质粒对照组（t=2．86，P〈0．05）。结论skp2蛋白在喉癌中的表达与癌组织的分化程度有关。抑制喉癌细胞系Hep-2细胞skp2的表达可以抑制细胞增殖，并促进细胞凋亡p27蛋白表达提高以及细胞s期阻滞可能是其作用机制之一。展开更多
文摘目的探讨低氧条件下喉癌Hep-2细胞磷酸化信号转导子和转录激活子3(phosphorylation signal transducer and activator of transcription 3,p-Stat3)及低氧诱导因子1α(hypoxiainduciblefactor1α,HIF-1α)、VEGF的表达及Stat3反义寡核苷酸(antisense oligodenucleotides,AS-ODN)对其表达的影响。方法应用流式细胞术检测常氧和低氧不同时间Hep-2细胞p-Stat3、HIF-1α、VEGF蛋白表达,检测Stat3AS-ODN转染Hep-2细胞24h,再于低氧条件下培养6h后Hep-2细胞p-Stat3、HIF-1α、VEGF蛋白表达。应用MTT法检测不同浓度(100、200nmol/L)Stat3AS-ODN、Stat3正义寡核苷酸(sense oligodenucleotides,S-ODN)、脂质体作用于Hep-2细胞后的细胞存活率。结果与常氧培养相比较,低氧培养条件下Hep-2细胞p-Stat3表达的荧光指数(fluorescent index,FI)在3h即有增长,6h后稳定;HIF-1α及VEGF的FI值6h和12h后增长,p-Stat3表达的变化与HIF-1α变化呈明显正相关性(r=0.691,P<0.01)。低氧条件下Stat3AS-ODN转染Hep-2细胞后抑制p-Stat3表达,HIF-1α、VEGF的蛋白表达FI值也随之下降,Pearson相关分析显示其变化呈正相关性(r=0.912,P<0.01)。Stat3AS-ODN转染Hep-2细胞后MTT细胞存活率随Stat3AS-ODN浓度(100、200nmol/L)增加而下降,与Stat3S-ODN对照组和脂质体对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论喉癌Hep-2细胞中存在由低氧激活的Stat3信号转导,p-Stat3于HIF-1α及VEGF表达之前出现增长,阻断Stat3后低氧条件下HIF-1α表达降低,提示Stat3调节HIF-1α表达。
文摘目的探讨RNA干扰信号转导和转录活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）基因联合放射治疗对喉癌Hep-2裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人喉癌Hep-2裸鼠移植瘤动物模型28只，采用随机数字表法将动物随机分为4组：阴性质粒对照组、干扰组、放疗组和干扰＋放疗组，定期测量肿瘤体积。放射治疗结束后15d处死动物，称量瘤重，计算抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。免疫组化SP法结合图像分析技术对各组移植瘤磷酸化STAT3、B淋巴细胞2（bcl-2）、p53、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达情况进行定量分析，检测移植瘤的微血管密度，流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率。结果干扰组、放疗组和干扰＋放疗组的抑瘤率分别为19．68％、34．76％和67．70％。干扰＋放疗组磷酸化STAT3蛋白表达较其他组显著降低（P〈0．01），肿瘤微血管密度明显低于阴性对照组和放疗组（P〈0．01），肿瘤细胞凋亡率显著增加（P〈0．01）。干扰＋放疗组磷酸化STAT3表达与p53、bcl-2、VEGF及微血管密度呈正相关趋势（r值分别为0．738、0．727、0．735、0．691，P值均〈0．01），与肿瘤细胞凋亡率呈负相关趋势（r=-0．765，P〈0．01），p53和VEGF蛋白表达分别与微血管密度呈正相关趋势（r值分别为0．784、0．641，P值均〈0．01）；bcl-2蛋白表达与凋亡率呈负相关趋势（r=-0．883，P〈0．01）。结论RNA干扰STAT3基因联合放射治疗能显著抑制喉癌裸鼠移植瘤的生长。
文摘目的检测S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2，Skp2）在不同分化程度喉癌组织标本中的表达，并探讨应用RNA干扰技术抑制skp2基因表达对喉癌Hep2细胞生长、凋亡、p27表达以及细胞周期的影响。方法应用免疫组织化学方法检测Skp2蛋白在不同分化程度喉癌组织标本中的表达，根据设计siRNA的原则，针对人Skp2的mRNA序列，设计并合成编码siRNA的两条寡核苷酸序列，构建重组质粒pGPU6Skp2，转染重组质粒至Hep-2细胞中，应用流式细胞术检测skp2蛋白的表达。采用四甲基偶氮唑蓝法（MrIT）检测细胞增殖变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期和p27蛋白表达的变化。结果52例喉癌组织标本中skp2蛋白均呈阳性表达，高分化喉癌组织标本Skp2蛋白表达低于中、低分化组（X2=7．33，P〈0．05）。经酶切和DNA测序鉴定证实重组质粒上连接序列确实为所设计序列。pGPU6-Skp2转染组skp2蛋白表达明显低于空质粒对照组（f=19．42，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组细胞增殖抑制率为26．93％，明显高于空质粒对照组2．47％（t=15．23，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组细胞凋亡率为11．71％，明显高于空质粒对照组1．93％（t=17．92，P〈0．01）；pGPU6-Skp2转染组s期细胞所占比例明显高于空质粒对照组（t=7．73，P〈0．05）；pGPU6-Skp2转染组p27蛋白表达明显高于空质粒对照组（t=2．86，P〈0．05）。结论skp2蛋白在喉癌中的表达与癌组织的分化程度有关。抑制喉癌细胞系Hep-2细胞skp2的表达可以抑制细胞增殖，并促进细胞凋亡p27蛋白表达提高以及细胞s期阻滞可能是其作用机制之一。
