布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条的研制

本研究以量子点荧光微球为标记物,制备免疫层析试纸条,用于快速检测牛血清布鲁氏菌抗体。采用布鲁氏菌脂多糖(LPS)和兔抗重组链球菌蛋白G多克隆抗体分别作为检测线和质控线喷涂硝酸纤维素膜,以荧光微球标记的重组链球菌蛋白G喷涂玻璃纤维素膜作为量子点结合垫,经组装、切割制备免疫层析试纸条。使用布鲁氏菌病阳性血清国家标准品测定所建立方法的灵敏度和稳定性,使用牛鼻气管炎阳性血清等常见牛病血清及牛布鲁氏菌病阴性血清国家标准品评价该方法的特异性;使用建立的方法与间接ELISA(iELISA)同步检测100份临床血清样品,比较两者的符合率。结果显示:量子点荧光微球免疫层析试纸条的最低检出限为0.3 IU/mL,常温保存18个月其检测灵敏度不变;与牛鼻气管炎、牛流行性腹泻、牛结节性皮肤病等临床疫病的血清抗体无交叉反应;与iELISA方法的阳性符合率为94.2%,阴性符合率为100%,总符合率为97.0%。结果表明,本研究建立的布鲁氏菌荧光微球免疫层析试纸条敏感、特异、稳定,操作时不需要借助仪器,适用于临床快速检测和初筛,可为我国布鲁氏菌病防控提供技术支持。

布鲁氏菌量子点荧光微球免疫层析试纸条的研制

为制备基于量子点荧光微球的布鲁氏菌免疫层析试纸条,将布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体和山羊抗鼠Ig G抗体分别作为检测线和质控线喷涂在硝酸纤维素膜上,以量子点荧光微球标记布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体,稀释后喷涂在玻璃纤维素膜上,最后进行组装、切割制成检测用试纸条,并测定其敏感性、特异性和稳定性。以布鲁氏菌荧光定量PCR检测技术为对照,应用该试纸条检测临床样本120份,比较两种方法的符合率。结果显示,建立的量子点荧光微球免疫层析试纸条性能较好,检测敏感性达到1 ng/m L;特异性较好,与其他病原没有交叉反应;常温保存18个月或37℃保存28 d,其稳定性较好,变异系数分别为3.2%和14.6%;利用该试纸条和荧光定量PCR方法对120份临床样本进行检测,与荧光定量PCR检测结果相比,其阳性符合率为91%,阴性符合率为100%,总符合率为99%。上述结果表明,该试纸条操作简单、快速稳定、灵敏度高、成本低,20 min内即可完成检测,样本获取容易,可实现现场快速检测,在布鲁氏菌病的病原检测及净化工作中具有良好应用前景。

鉴别检测野生株和基因缺失株非洲猪瘟病毒多重荧光定量PCR方法的建立

为建立一种鉴别检测野生型和基因缺失株非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法,本研究根据GenBank中登录的ASFV P72、CD2v、MGF360-14L基因保守序列设计引物和探针,通过方阵法优化体系后,建立了一种可以同时检测P72、CD2v、MGF360-14L基因的多重荧光定量PCR方法。该方法与伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均无交叉反应,可鉴别野生型和基因缺失株ASFV,特异性强;敏感性试验结果显示,该方法对P72、CD2v和MGF360-14L重组质粒标准品的最低检测限均为100 copies/m L,敏感性高;组内和组间变异系数均小于2%,表明该方法重复性较好。利用ASFV核酸检测试剂盒与本实验室建立的方法分别对35份临床样品进行检测,两种方法的检出率均为68.57%,阳性符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的多重荧光定量PCR方法对ASFV的鉴别检测、病原流行病学调查等研究具有重要意义。