在医学院校机能实验教学中加强医学生创新能力的培养

医学生创新能力的培养是现代医学教育的根本任务。将医学生创新能力的培养融入到机能实验学教学中,是现代医学教育的需要。在机能实验学教学中,通过改变教学模式、提高教师的创新意识、构建创新教学新方式等途径加强医学生创新能力的培养。

皖南蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠体内抑制作用的研究

目的:研究皖南蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ(Agkis-trodon halys venom antitumor component Ⅰ,AHVAC-Ⅰ)对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠的体内抑制作用及瘤细胞增殖活性变化,并初步探讨其作用机制。方法:取生长状态良好的浓度为1×107个/mL的SGC-7901人胃癌细胞悬液0.1mL接种于裸小鼠右侧腋窝皮下,待其成瘤后随机分为模型组、紫杉醇阳性对照组、AH-VAC-Ⅰ高、中、低剂量组,隔日连续给药5次,定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,HE染色观察瘤体形态学变化,免疫组化SP法检测Ki-67增殖指数,原位末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果:AHVAC-Ⅰ在1.0mg/kg剂量时对SGC-7901细胞有抑制作用,抑瘤率达42.2%;在3.0mg/kg剂量时有显著抑制作用,抑瘤率达78.5%。实验组肿瘤内Ki-67阳性细胞数量下降,凋亡细胞明显增多。结论:AHVAC-Ⅰ能明显抑制裸鼠体内SGC-7901人胃癌细胞的生长,其作用机制可能与诱导胃癌细胞发生凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。

钳蝎蝎毒组分Ⅱ对人直肠腺癌C1184细胞生长的影响

蝎毒组分Ⅱ（ＳｃｏｒｐｉｏｎＶｅｎｏｍｃｒｕｄｅⅡ，ＳＶＣⅡ）为河南马氏钳蝎粗毒（ＳＶＣ）经分离纯化后获得的有效成分之一。实验结果表明，以丝裂霉素作为阳性对照，ＳＶＣⅡ（４～２０μｇ／ｍｌ）对人直肠腺癌Ｃ１１８４细胞株有明显杀伤作用。与空白对照相比，ＳＶＣⅡ使细胞生长抑制率、细胞毒性和克隆形成抑制率增大（Ｐ＜０．０５或（Ｐ＜０．０１），并存在剂量效应关系，其半数抑制浓度分别为１１．２０μｇ／ｍｌ、１１．９３μｇ／ｍｌ和１７．３８μｇ／ｍｌ。从生长曲线可见，ＳＶＣⅡ对细胞生长呈剂量和时间依赖性抑制。ＳＶＣⅡ还能使细胞分裂指数下降。提示ＳＶＣⅡ具有抗癌细胞增殖作用。

木犀草素对STZ诱导的糖尿病肾脏的保护作用

目的:探讨木犀草素对糖尿病肾脏的保护作用及其可能机制。方法:雄性SD大鼠随机分为5组,即正常对照组、糖尿病模型组、木犀草素低、中、高剂量组,采用腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病大鼠模型,生化方法测定血糖、尿蛋白、血及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及肾组织丙二醛(MDA)的含量;W estern blotting检测肾皮质转化生长因子β1(TGF-β1)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)蛋白质水平;光镜观察肾组织形态改变。结果:与糖尿病模型组相比,木犀草素治疗组大鼠血糖水平明显降低(P<0.01)、24 h尿蛋白明显减少(P<0.01),血清及肾组织SOD、CAT活性升高(P<0.01),肾组织MDA含量显著降低(P<0.01),木犀草素治疗组肾皮质TGF-β1及PAI-1蛋白表达明显低于糖尿病模型组。结论:木犀草素对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏具有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用及降低肾组织TGF-β1、PAI-1的蛋白表达有关。

银杏内酯B对脑缺血-再灌注神经元损伤的保护作用

目的 :研究银杏内酯 B对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤的干预作用及其可能机制。方法 :采用Kam eyam a的 3条动脉夹闭法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型。 4 5只 Wistar大鼠随机分成假手术对照组、缺血再灌注模型组、生理盐水对照组和银杏内酯 B预处理组 ;测定各组动物脑匀浆液中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和 ATP酶活性以及丙二醛 (MDA)含量 ,并观察脑组织的病理学改变和细胞凋亡指数。结果 :全脑缺血再灌注可引起 SOD、GSH Px和 ATP酶活性明显下降 ,MDA含量显著升高 ;脑组织呈现炎症性改变 ,层次不清 ,细胞凋亡指数达 (40 .2± 6 .3) %。银杏内酯 B(1～ 10 mg/ kg)能剂量依赖性地降低 MDA水平 ,提高 SOD、GSH Px和 ATP酶活性 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,明显减轻脑组织神经细胞损害 ,减少细胞凋亡发生率。结论 :银杏内酯 B对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤具有明显的保护作用 ,其机制可能是通过减少自由基的产生和增强 ATP酶活性。

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I对人肺癌A549细胞增殖抑制作用

目的:研究尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I(AAVC-I)对人肺癌A549细胞增殖抑制及凋亡的作用。方法:采用MTT法检测不同浓度的AAVC-I对A549细胞的24h与48h抑制率;应用HE染色、Hoechst33258荧光染色,从形态学观察细胞凋亡;采用免疫组化的方法,检测bax蛋白表达的变化。结果:MTT显示,AAVC-I能抑制A549细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;AAVCI处理24h后,镜下可见细胞核固缩,核深染及凋亡小体;免疫组化显示,随药物浓度增加,平均光密度值呈递增趋势,表明bax蛋白表达相应上调。结论:尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I对人肺癌A549细胞具有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与bax表达上调有关。

银杏总黄酮对糖尿病大鼠心肌转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨银杏总黄酮对糖尿病大鼠的抗氧化作用及对心肌转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法 SD大鼠随机分为:正常对照组、糖尿病模型组、银杏总黄酮组,采用腹腔注射链脲佐菌素(STE)法建立糖尿病大鼠模型,生化方法检测血糖,血及心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量;ELISA法检测各组心肌TGF-β1水平;光镜观察心肌组织形态改变。结果与糖尿病模型组相比,银杏总黄酮组大鼠血糖水平明显降低,血清及心肌组织SOD活性升高,MDA含量显著降低,心肌组织TGF-β1蛋白水平与糖尿病模型组相比明显下降。结论银杏总黄酮能够减轻STZ诱导的糖尿病大鼠心肌氧化应激程度,降低心肌TGF-β1蛋白表达水平,对糖尿病心肌具有一定的保护作用。

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ通过促进半胱天冬酶3表达诱导K562/A02细胞凋亡

本研究探讨尖吻蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ(component I from Agkistrodon acutus venom,AAVC-Ⅰ),对人慢性髓系白血病(CML)细胞生物学特性的影响。选择K562/A02细胞株为对象,培养体系中加入不同浓度的AAVC-Ⅰ(6.25-100μg/ml),用CCK-8法检测K562/A02细胞增殖活性,Giemsa和Hochest 33258染色法观察细胞形态学的变化,流式细胞术检测K562/A02细胞凋亡情况,酶显色活性分析法检测caspase 3酶活性的变化。结果表明,AAVC-Ⅰ能够抑制K562/A02细胞的体外增殖,呈时间和剂量依赖性,48 h时半数抑制浓度为30.988μg/ml。AAVC-Ⅰ作用K562/A02细胞48 h后,镜下可见胞核固缩及凋亡小体的形成。流式细胞术分析显示,随着作用药物的浓度由0增高到50μg/ml,细胞凋亡率也由0.88%升高到53.66%。相比对照组,各实验组caspase 3凋亡蛋白的表达呈浓度依赖性增加(P<0.05)。结论:AAVC-Ⅰ能够有效地抑制人红白血病K562/A02细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与caspase 3蛋白的高表达促进K562/A02细胞凋亡有关。

蝮蛇毒提取物诱导白血病细胞K562凋亡

本研究探讨皖南蝮蛇毒蛋白提取物对白血病细胞K562增殖的影响及诱导凋亡的作用,采用MTT(四唑氮蓝)法检测不同浓度的蛇毒蛋白提取物对K562细胞生长的影响;应用电子显微镜观察药物作用后K562细胞形态的改变;流式细胞术检测蛋白提取物对K562细胞细胞凋亡作用;Western blot检测细胞增殖酶活性的变化。结果表明:1-20μg/ml蛇毒蛋白提取物明显抑制K562细胞的生长,且对K562细胞增殖的抑制作用呈现剂量依赖的关系;提取物作用48小时后显示明显的细胞毒作用;与对照组相比,蛇毒作用48小时后K562细胞出现典型凋亡特征;1、10、20μg/ml蛇毒作用48小时后的凋亡率分别为21.3%、49.7%、70.1%;蛇毒提取物使ERK活性明显降低。结论:蛇毒蛋白能够抑制K562细胞增殖,诱导其凋亡。

核黄素对STZ诱导的大鼠糖尿病肾病的治疗作用

目的:探讨核黄素对STZ诱导的大鼠糖尿病肾病的治疗作用及机制。方法:将雄性Sprague-Daw-ley大鼠随机分为3组,即正常对照组、糖尿病模型组、核黄素治疗组,采用腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病大鼠模型,收集各组血、尿及肾组织,生化方法检测24h尿蛋白量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量,并计算肾脏脏器系数(KW/BW);Western blotting检测不同组别肾皮质TGF-β1、纤溶酶原活化抑制因子-1(PAI-1)蛋白质水平;光镜观察肾组织形态改变。结果:与糖尿病模型组大鼠比较,核黄素治疗组大鼠尿蛋白量显著降低(P<0.01),肾组织及血清SOD、CAT活性升高(P<0.01),肾组织MDA含量显著降低(P<0.01),核黄素治疗组肾皮质TGF-β1及PAI-1蛋白表达明显低于糖尿病模型组。结论:核黄素对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏有一定的保护作用,其机制可能与其降低肾组织TGF-β1、PAI-1蛋白表达有关。

尖吻蝮蛇蛇毒抑瘤组分1诱导白血病K562细胞凋亡的线粒体机制

本研究探讨尖吻蝮蛇毒抑瘤组分1(component1from Agkistrodon acutus venom,AVVC-1)诱导人慢性髓系白血病(CML)K562细胞线粒体凋亡途径。选择K562细胞株为实验对象,采用Jc-1检测细胞线粒体的膜电位,Western blot检测线粒体内细胞色素C蛋白的表达,免疫荧光检测细胞色素C蛋白的分布。结果表明,不同浓度梯度AVVC-1(12.5,25,50,100μg/ml)处理6 h后,K562细胞线粒体膜电位明显下降(P<0.01)。AVVC-1 30μg/ml处理48 h后,K562细胞线粒体内细胞色素C蛋白表达量明显下降(P<0.05),伴随胞浆内细胞色素C的荧光强度增强。结论:尖吻蝮蛇毒抑瘤组分1可以促使细胞色素C的释放并激活线粒体死亡途径,从而诱导K562细胞发生凋亡,并由此发挥其抗肿瘤活性。

弥散性血管内凝血的新认识及实验诊断进展

自1951年Schneioler报道在产科病例中发现了弥散性血管内凝血（DIc）以来，DIC就一直是医学上的经典课题，受到基础、临床学界的关注和重视。DIC是在某些严重疾病基础上，由特定诱因引发的复杂病理过程。致病因子引起人体凝血系统激活、血小板活化、纤维蛋白沉积，导致弥散性血管内微血栓形成；继之消耗性降低多种凝血因子和血小板；

亚硒酸钠对体外培养人喉癌细胞的杀伤和抑制作用

本文采用抗肿瘤药物筛选试验观察了亚硒酸钠（Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３）对体外培养人喉癌细胞株ＨＥｐ－２生长的影响。结果表明，当Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３浓度为０．２、０．５和１．０μｇ／ｍｌ时，可使细胞集落形成率下降，细胞存活比由对照组１００．００％分别降至８４．１４％、７０．２８％和３４．５４％（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０·００５）。噻唑兰法的细胞生长抑制率分别是５６．５２％、７４．６３％和８１．８８％（Ｐ＜０．０１），半数抑制浓度（ＩＣ＿５０）为０．１６６μｇ／ｍ１。台盼兰拒染法生长抑制率分别是５２．３６％、７４．６６％和８７．３０％（Ｐ＜０．０１），ＩＣｓ０为０．１８６μｇ／ｍｌ。Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３抑制作用与剂量呈正相关。进一步分析时效关系可见，Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３抑制ＨＥｐ－２细胞生长速率，但Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３剂量大于０．５μｇ／ｍｌ时或作用时间超过４８小时出现抑制坪段效应。此外，较大剂量Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３对ＨＥｐ－２细胞的分裂指数和多核率亦有抑制作用，提示硒在产生较强的抑制癌细胞生长和杀伤作用时，需慎重考虑硒的用量和作用时间。

蝮蛇毒血小板抑制因子对急性心肌梗死大鼠血液流变影响及机制的研究

目的：探讨皖南蝮蛇毒血小板抑制因子（AHV-PI）对急性心肌梗死大鼠血液流变性变化的影响及其可能作用机制。方法：SD大鼠30只,随机分为假手术组、急性心肌梗死模型组和AHV-PI实验组。实验采用左心室注射月桂酸钠方法制备大鼠急性心机梗死（AMI）模型,AHV-PI实验组在造模前经舌下静脉注射AHV-PI（0.1 mg/kg）预处理,RM6240生物信号采集处理系统监测心电变化。造模后3 h颈总动脉取血样,用锥板式血流变分析仪测定全血和血浆黏度,血栓弹力仪（TEG~5000）描记凝血时间（R）、血凝块形成时间（K）、Alpha角度（A）、凝血最大幅度（MA）和凝血指数（CI）,比浊法检测血小板聚集率。取血浆以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆v WF、P-选择素的含量。结果：与急性心肌梗死模型组比较,AHV-PI实验组全血和血浆黏度明显降低（P〈0.05）,R值和K值明显延长（P〈0.05）,A、MA和CI减小（P〈0.05）;血小板聚集时间、聚集幅度和聚集率均明显降低（P〈0.05）。v WF、P-选择素的表达水平亦明显降低（P〈0.05）。结论：蛇毒AHV-PI可明显抑制心肌梗死大鼠血液高凝状态,改善血液流变学特性,减轻损伤过程。

银杏内酯B对缺血再灌注大鼠心脏保护作用的实验研究

目的:探讨银杏叶提取物银杏内酯B对大鼠缺血-再灌注(I/R)心肌损害的影响。方法:采用Langendorff离体灌注大鼠心脏标本,制备I/R心肌损伤的模型,通过连续记录心率失常发生和心肌单相动作电位(MAP)的变化,测定冠脉流出液LDH、CPK和心肌匀浆组织中SOD活性和MDA含量,观察血小板活化因子(PAF)的作用和银杏内酯B对其活动变化的影响。结果:给予外源性PAF明显加重I/R引起的心律紊乱和心肌损伤,银杏内酯B(10 μmol/L)预处理可显著降低I/R心律失常发生率和MAP时程的改变(P<0 .0 1) ,降低LDH、CPK和MDA含量以及提高SOD活性(P <0 .0 5和P <0 . 0 1)。结论:银杏内酯B对缺血-再灌注心肌损害具有明显的保护作用,其机制可能是拮抗PAF和抑制自由基的产生。

维胺酸对交链孢醇单甲醚致突变性的抑制作用

交链孢醇单甲醚(AME)是直接致突变物,可能是林县食管癌病因之一。维胺酸是国内合成的毒性较小的新维甲衍生物,本文采用V_(79)细胞6-疏基鸟嘌呤抗性突变试验的方法,研究了维胺酸对AME致突变性的影响。结果表明,所用剂量范围内的维胺酸对V_(79)细胞无明显毒性和致突变性(P>0.05)。一定剂量维胺酸(15μg/ml)对不同剂量(25～100μg/ml)AME诱发的V_(79)细胞突变频率低于AME单独作用(P<0.01)。此外,与仅含AME对照相比,不同剂量维胺酸(5～20μg/ml)能分别降低AME的突变频率(P<0.05或P<0.01),并随维胺酸剂量增大,相对抑制率增高,呈现剂量相关性,显示维胺酸对AME致突变性有抑制作用,为林县食管癌的化学预防提供了实验依据。

蝮蛇毒蛋白C激活物对家兔实验性DIC的干预作用

目的:观察蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)对家兔实验性弥散性血管内凝血(DIC)的干预作用并探讨其作用机理。方法:健康青紫蓝家兔24只随机分为:正常对照组、DIC组、PCA干预组(n=8),采用耳缘静脉注射兔脑粉浸液建立DIC模型,检测各组的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fbg)含量和血小板计数(PLT)。结果:与正常对照组相比,DIC组PT、APTT延长的百分率、TT缩短的百分率、Fbg、PLT显著升高(P<0.01);PCA干预组PT、APTT延长的百分率,TT缩短的百分率与Fbg、PLT降低的百分率均明显降低(P<0.01)。结论:蝮蛇毒PCA对家兔实验性DIC有一定的防治作用,其机制可能与PCA抗凝、抑制血小板聚集有关。

鱼腥草注射液和双黄连注射液抗内毒素心肌损伤作用的比较

目的 :研究鱼腥草注射液和双黄连注射液对内毒素诱导心肌损伤的保护作用。方法 :在Langendorff装置上大鼠离体心脏进行灌流 ,测定心脏血流动力学指标及测定心肌组织中一氧化氮 (NO)含量及琥珀酸脱氢酶 (SDH)、肌酸激酶 (CK )活性。结果 :与内毒素组相比 ,鱼腥草组和双黄连组在相应时点 (LVSP LVEDP)×HR、LVDP、+dp/dtmax及 dp/dtmax的恢复百分率明显改善 ,对内毒素诱导的心肌SDH活性的降低、CK水平及NO含量的升高有明显抑制作用。结论 :鱼腥草注射液和双黄连注射液均有明显的抗内毒素心肌损伤作用 ,通过降低心肌中NO的量 ,稳定心肌酶活性和能量代谢水平等途径 ,提高心肌对内毒素性损伤的抵抗力。

硫化氢对糖尿病创面血管形成的影响

目的:探讨硫化氢对糖尿病大鼠伤口肉芽组织血管形成的影响。方法:以健康雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)的方法建立糖尿病模型,72 h后空腹血糖>16.7 mmol/L用作为糖尿病。1周后,于糖尿病大鼠背部剪切直径为2 cm的圆形切口,随机将大鼠分为两组:糖尿病对照组(DC)和硫化氢处理组(HS)。在给药第5、10、15、20天测定伤口愈合率。21 d后处死大鼠收集血样及肉芽组织,检测血浆血管内皮生长因子(VEGF)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1);光镜观察肾组织形态改变,并对肉芽组织血管计数。结果:与DC组比较,硫化氢处理组糖尿病大鼠伤口愈合率明显加快(P<0.05),血浆血管内皮生长因子及细胞间黏附分子-1水平明显提高(P<0.05),组织学观察显示,对照组大鼠肉芽组织有炎症细胞浸润,胶原纤维排列疏松而不规则,硫化氢处理组大鼠肉芽组织胶原整齐,血管生成增多(P<0.05)。结论:硫化氢可促进糖尿病大鼠伤口愈合,其机制可能与促进血管生成有关。

机能实验教学改革的探索与实践

如何培养科研创新型医学人才是21世纪医学教育改革的重点。在机能实验教学中,就如何培养大学生科研创新能力进行了探索与实践。提出转变教育理念、更新教育模式、加强科研实践、增加设计性实验等是提高大学生科研创新能力行之有效的途径。