杜鹃花总黄酮对缺血/再灌注损伤模型大鼠脑基底动脉TRPV4的作用研究

目的探讨杜鹃花总黄酮(TFR)对缺血/再灌注损伤模型大鼠脑基底动脉(CBA)瞬时感受器电位通道香草酸受体亚型Ⅳ(TRPV4)的作用。方法以改良四血管阻断法(4-VO)建立大鼠缺血/再灌注模型(IR);运用加压灌注法和细胞膜电位记录法,离体观察TFR对KCl预收缩IR大鼠CBA的舒张作用和超极化反应及TRPV4阻断剂钌红(RR)对其的影响;采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法,在体观察TFR对IR大鼠脑血管内皮细胞TRPV4 mRNA和蛋白表达以及RR对其的影响。结果递增浓度的TFR可诱导IR大鼠离体CBA产生明显剂量依赖性的舒张效应和超极化反应。去除血管内皮细胞后,TFR仍能介导CBA产生较弱的舒张作用和超极化反应,与血管内皮完整组比较,差异有显著性(P<0.01);去除一氧化氮(NO)和前列环素(PGI2)舒张作用后,TFR仍能诱导IR大鼠CBA产生明显的舒张效应和超极化作用,此作用可被TRPV4通道阻断剂RR抑制;TFR可明显上调IR大鼠脑血管TRPV4 mRNA和蛋白表达,而阻断TRPV4可明显抑制TFR上调的TRPV4基因表达。结论 TFR能介导IR大鼠CBA产生较强的内皮依赖性和较弱的内皮非依赖性血管舒张反应和超极化作用,其内皮依赖性效应推测可能与TFR促使脑血管内皮激活,促进内皮细胞生成和释放内皮衍生性超极化因子(EDHF)增多,继而激活TRPV4,引发Ca^(2+)内流,导致血管平滑肌细胞膜超极化,产生血管舒张效应有关。

利拉鲁肽对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:观察利拉鲁肽对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响,为糖尿病肾病的治疗提供理论依据.方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E),分别行:1.梯度细胞筛选实验,设6组,每组设不同的细胞数,培养24h,加入CCK8试剂,酶标仪测吸光度.2.梯度葡萄糖浓度筛选实验,根据细胞筛选结果,设不同葡萄糖浓度组,培养24h,加入CCK8试剂,酶标仪测吸光度.3.梯度时间筛选实验,根据梯度细胞和梯度葡萄糖筛选实验的结果,设置不同的时间梯度,分别于各个时间点加入CCK8试剂测吸光度.4.梯度药物筛选实验,将细胞随机分为6组:空白对照组(A组,DMEM培养基);高糖对照组(B组,D-葡萄糖40mmol/L);高糖+低浓度利拉鲁肽组(C组,D-葡萄糖40mmol/L+利拉鲁肽1nmol/L);高糖+中浓度利拉鲁肽组(D组,D-葡萄糖40mmol/L+利拉鲁肽10nmol/L);高糖+高浓度利拉鲁肽组(E组,D-葡萄糖40mmol/L+利拉鲁肽100nmol/L);高糖+沙格列汀组(F组,D-葡萄糖40mmol/L+沙格列汀400mmol/L).培养箱中培养48h,用CCK8检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡.结果:高糖组较空白组细胞增殖减少,凋亡率增加;高糖加入高、中、低浓度的利拉鲁肽组细胞较高糖组细胞的增殖增加,细胞凋亡率减少;从低浓度到高浓度利拉鲁肽组,细胞的增殖依次增加,凋亡率依次减少(P<0.05).结论:利拉鲁肽可改善高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,而且具有剂量依赖性,剂量越高,对肾小管上皮细胞的凋亡改善情况越明显.

姜黄素抑制顺铂诱导人肾小管上皮细胞系HK-2凋亡

目的探讨姜黄素对顺铂诱导人肾小管上皮细胞系HK-2凋亡的影响。方法用MTT法观察HK-2增殖;用Western blot检测HK-2的凋亡蛋白。结果 1)顺铂呈剂量依赖性诱导HK-2凋亡(P<0.05)。2)在姜黄素和顺铂联合作用下,凋亡的HK-2明显减少,细胞存活率提高(P<0.05);HK-2中Bax蛋白表达降低(P<0.05);Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05)。结论姜黄素可以通过调控Bax和Bcl-2蛋白的表达抑制顺铂引起的细胞凋亡。