联合检测LDHA和PD-L1在晚期胃癌PD-1抑制剂疗效预测及预后评估中的价值

背景与目的:胃癌对程序性死亡[蛋白]-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂的应答率较低,建立有用的疗效预测方法筛选胃癌PD-1抑制剂治疗优势人群对改善患者预后有重要意义。本研究旨在探讨联合检测乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase,LDHA)和程序性死亡[蛋白]配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)表达对接受PD-1抑制剂治疗胃癌患者的疗效预测和预后评估价值。方法:回顾性分析皖南医学院第一附属医院2020年1月—2022年3月接受PD-1抑制剂治疗的50例晚期胃癌患者的临床病理学资料,采用多因素logistic回归分析影响胃癌PD-1抑制剂疗效的独立危险因素,利用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析联合检测LDHA和PD-L1对胃癌PD-1抑制剂疗效的预测价值,应用Kaplan-Meier法对患者进行生存分析。结果:LDHA低表达组和高表达组胃癌患者的客观缓解率(objective response rate,ORR)分别为59%和10%,疾病控制率(disease control rate,DCR)分别为83%和29%,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素logistic回归分析结果显示,PD-L1阳性联合分数(combined positive score,CPS)<5、LDHA高表达是胃癌PD-1抑制剂疗效不佳的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果提示LDHA联合PD-L1具有较好的胃癌PD-1抑制剂疗效预测价值[曲线下面积(area under curve,AUC)为0.951]。Kaplan-Meier生存分析显示,LDHA低表达合并PD-L1 CPS≥5的胃癌患者在接受PD-1抑制剂治疗后具有更长的总生存期(overall survival,OS,P=0.003)和无进展生存期(progression-free survival,PFS,P<0.001)。结论:LDHA低表达、PD-L1 CPS≥5与胃癌PD-1抑制剂的疗效呈正相关,LDHA低表达合并PD-L1 CPS≥5的胃癌患者接受PD-1抑制剂治疗可显著延长OS和PFS,联合检测LDHA和PD-L1对晚期胃癌患者PD-1抑制剂的疗效预测和预后评估有一定的临床应用价值。

CircSMARCA5通过miR-4295/PTEN轴调控糖酵解抑制胃癌细胞增殖和侵袭

背景与目的:胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤。作者既往研究发现circSMARCA5在胃癌中表达降低并能够抑制胃癌进展,但其具体机制目前仍不清楚。本研究探究circSMARCA5抑制胃癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法:采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和transwell实验检测过表达circSMARCA5对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响。通过检测细胞外酸化率、葡萄糖摄取水平和乳酸生成量,分析过表达circSMARCA5对胃癌细胞糖酵解的影响。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测circSMARCA5、miR-4295和PTEN的基因表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GLUT1和LDHA的蛋白水平。建立BACB/c裸小鼠皮下移植瘤模型,观察过表达circSMARCA5对移植瘤生长的影响,利用免疫组织化学方法检测两组皮下瘤中GLUT1、LDHA的表达水平及Ki-67增殖指数。通过双荧光素酶报告基因实验、Pearson相关性分析和RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)实验检测circSMARCA5与miR-4295、miR-4295及PTEN的靶向调控关系。结果:过表达circSMARCA5能够抑制胃癌细胞增殖和侵袭。CircSMARCA5过表达组细胞的糖酵解速率、糖酵解能力值、葡萄糖摄取水平和乳酸生成量均低于对照组。此外,过表达circSMARCA5能够抑制裸小鼠皮下移植瘤的生长。进一步研究发现,circSMARCA5可发挥分子海绵作用下调miR-4295表达,而miR-4295通过与PTEN mRNA的3′-UTR结合抑制PTEN表达。在circSMARCA5过表达组细胞中上调miR-4295或下调PTEN表达可部分逆转circSMARCA5对胃癌细胞增殖、侵袭和糖酵解的影响。结论:CircSMARCA5通过竞争性结合miR-4295上调PTEN表达,调控细胞糖酵解,从而抑制胃癌细胞的增殖和侵袭。

CircPCSK5在胃癌中高表达并促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化

目的 探讨circPCSK5在胃癌中的表达情况和对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响。方法 通过高通量测序构建胃癌组织和癌旁正常胃粘膜组织的circRNA差异表达谱。选取在皖南医学院第一附属医院行胃癌根治术的患者共62例作为研究对象,利用RT-qPCR检测circPCSK5在胃癌组织和细胞系中的表达情况。采用χ^(2)检验分析circPCSK5表达水平与胃癌临床病理资料相关性,利用Kaplan-Meier法绘制患者的总生存和无病生存曲线,Cox比例风险回归模型分析影响胃癌患者预后的独立危险因素。通过RNase R和actinomycin D实验检测circPCSK5的稳定性。利用荧光原位杂交和细胞核质分离实验检测circPCSK5的亚细胞定位。通过CCK-8和EdU实验检测circPCSK5对胃癌细胞增殖能力的影响,通过transwell实验检测circPCSK5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。利用Western blot和RT-qPCR检测敲低或过表达circPCSK5后胃癌细胞上皮-间质转化标记物的表达变化。结果 在胃癌组织和细胞中,circPCSK5的表达明显升高(P<0.001,P<0.01)。CircPCSK5表达水平与患者的肿瘤大小、脉管侵犯、淋巴结转移和AJCC分期存在明显正相关性(P<0.05)。CircPCSK5高表达患者的总生存和无病生存时间明显低于circPCSK5低表达患者(P<0.001),且circPCSK5高表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。敲低circPCSK5表达能明显抑制HGC27细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01),并导致上皮间质转化标记物E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达降低(P<0.01)。过表达circPCSK5能促进MKN45细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01),降低E-cadherin表达,升高N-cadherin和Vimentin表达(P<0.01)。结论 CircPCSK5在胃癌中高表达,并能促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化,可作为胃癌预后预测指标和潜在的分子治疗靶点。