热量限制通过AMPK途径恢复老年大鼠心脏缺血预处理效应的实验观察

目的探讨热量限制能否恢复缺血预处理(IP)对老年大鼠心脏抗缺血-再灌注(I-R)损伤的能力及与提高血液脂联素(APN)水平、激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的相关性。方法 18月龄健康雄性SD大鼠,随机分为随意喂养组(ALS)和热量限制组(CRS),另取6月龄随意喂养大鼠作为对照(ALA)。8个月后取离体心脏行Langendorff装置灌流,停灌30 m in复灌30 m in模拟全心I-R,或I-R前先行5 m in×3次IP,记录其心功能变化、冠脉流量(CFR),留取冠脉流出液测定乳酸脱氢酶(LDH)含量。复灌末,酶法分离得心肌细胞,测定其存活率及AMPK磷酸化水平。检测血液中血糖和APN水平。结果 CR明显降低了老年大鼠体重、心重和血糖水平,明显升高了APN水平。IP对ALS大鼠心脏I-R损伤没有保护作用,CR能够升高发展压(DP)、±dp/dt、CFR、提高心肌细胞存活率;降低舒张末压(EDP),LDH释放量,从而保持了IP对老年大鼠心脏I-R损伤的保护作用。CR显著增加心肌细胞AMPK磷酸化水平。IP提高了ALA、CRS组心肌细胞p-AMPK含量。结论 CR能够恢复IP对老年大鼠心脏抗I-R损伤的能力,可能是通过提高APN水平,激活AMPK途径实现的。

雌激素对去卵巢大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:探讨雌激素对去卵巢大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:成年SD雌鼠,随机分为假手术组(Sham),双侧卵巢切除组(Ovx)和双侧卵巢切除后补充17β-雌二醇组(Ovx+E2)。各组离体心脏再随机分为不同时间的缺血再灌注亚组。测量的指标包括冠脉流出液中LDH及CK含量、心室肌细胞存活率及产率、基础状态和异丙肾上腺素(ISO)刺激状态下收缩幅度。结果:30min缺血及其各复灌组均显著增加冠脉流出液中LDH、CK的释放量。Ovx组LDH、CK漏出在30min缺血及再灌注条件下,显著高于正常灌注组,而Ovx+E2组可减轻心肌损伤,减少LDH、CK的释放。10min和20min缺血对心肌细胞存活率、产率及冠脉流出液中LDH、CK含量影响均不明显。Sham、Ovx、Ovx+E2各组心肌细胞基础收缩幅度在正常和10minI+30min R灌注条件下无显著差异。Ovx显著增加其他各组心肌细胞基础收缩和ISO刺激收缩幅度,Ovx+E2可使其降至Sham水平。结论:雌激素对去卵巢大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用。

异丙肾上腺素对去势雌性大鼠心脏功能的影响

目的探讨不同剂量异丙肾上腺素(ISO)对双侧卵巢切除大鼠心脏功能的影响。方法健康雌性SD大鼠90只,随机分为对照组、假手术组和双侧卵巢切除组(切除组),每组30只。术后4周3组大鼠进行心脏体外灌流,酶法分离得单个心肌细胞。分别测定各组单个心肌细胞基本收缩幅度和不同浓度ISO刺激心肌细胞收缩幅度;ISO 5 mg/(kg·d)腹腔注射28 d后,测定各组大鼠存活率。结果与对照组和假手术组比较,切除组大鼠心肌细胞基本收缩幅度和不同浓度ISO刺激心肌细胞收缩幅度均显著升高,且呈浓度依赖性升高(P<0.05);切除组大鼠心肌细胞的存活率下降,大鼠28 d的存活率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组上述指标与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同剂量ISO对双侧卵巢切除大鼠心脏功能的影响不同。双侧卵巢切除大鼠心脏抗ISO损伤能力减弱。

雌二醇对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨雌激素对大鼠在体心脏缺血-再灌注(I-R)后心功能及心肌凋亡的影响。方法健康雌性成年SD雌鼠50只,随机均分为5组:假手术组(C组),双侧卵巢切除组(A组)和双侧卵巢切除后补充低、中、高剂量17β-雌二醇组(AL组、AM组、AH组)。A组、AL组、AM组、AH组术后第4周末制作在体I-R模型,缺血30 min、再灌注120 min后观察心功能及心肌细胞凋亡情况。结果 A组大鼠体重迅速增加,子宫萎缩,血清雌激素水平下降。A组、AL组左心室舒张末压(LVDEP)、丙二醛(MDA)生成、肿瘤坏死因子(TNF-α)、肌钙蛋白(TnT)、心肌梗死面积增加,左心室收缩压(LVSP)、±dp/dtmax、超氧化物歧化酶(SOD)活性、B细胞淋巴瘤-白血病2/Bcl相关X蛋白(Bcl-2/Bax)降低;AM、AH组上述作用能被逆转(P<0.05)。结论中、高剂量雌激素能够通过提高抗氧自由基能力、抑制炎症因子、减小心肌梗死面积、减少心肌细胞凋亡,减轻大鼠在体心脏I-R损伤。

CaMKⅡ活性抑制降低内质网应激诱导的大鼠心肌细胞死亡

目的探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ与内质网应激诱导的大鼠心肌细胞死亡的相关性。方法以成年SD大鼠心肌细胞为研究对象,使用毒胡萝卜素、衣霉素和brefeldin A诱导心肌细胞内质网应激,用碘化丙啶染色评价心肌细胞存活率,观察心肌细胞死亡情况。Western blot检测葡萄糖调节蛋白(GRP)78和DNA核苷酸序列CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)的表达。通过GRP78和CHOP上调评价内质网应激反应。结果毒胡萝卜素、衣霉素和brefeldin A呈时间和剂量依赖方式诱导内质网应激反应和心肌细胞的死亡(P<0.01),使GRP78和CHOP蛋白表达上调(P<0.05),KN93和AIP阻断CaMKⅡ活性后,GRP78和CHOP蛋白表达与各自的未阻断对照组相比下调(P<0.05),内质网应激反应减弱,内质网应激诱导的细胞死亡减少(P<0.05)。结论毒胡萝卜素、衣霉素和brefeldin A诱导的内质网应激可能是通过CaMKⅡ依赖途径介导大鼠心肌细胞死亡。CaMKⅡ可能是治疗心肌梗死或防治心衰的新靶点。

兔慢性缺氧心肌细胞β_2-肾上腺素受体表达的变化及其机制

目的探讨慢性缺氧心肌细胞β2-肾上腺素受体(β2-AR)表达的变化及其机制。方法成年雄性新西兰兔随机分成正常组、假手术组和紫绀组,其中紫绀组行肺动脉分支与左心耳侧侧吻合术,建立紫绀型心脏病动物模型。术后5周,监测动脉血氧分压(PO2)、动脉血氧饱和度(SaO2);Langendorff逆向灌注酶法分离心肌细胞,测定心肌细胞存活率;Western blot检测心肌细胞β2-AR、caspase-3、p-Akt蛋白表达水平。结果术后第5周,与正常组、假手术组相比,紫绀组PO2、SaO2显著降低,心肌细胞存活率显著下降,β2-AR、p-Akt蛋白表达明显低下,而caspase-3表达显著升高(分别P<0.01或<0.05)。结论兔紫绀型心脏病动物模型慢性缺氧心肌细胞β2-AR蛋白表达降低,可能是通过PI3K/Akt调节caspase-3的表达促进凋亡。