卵巢低反应患者抗苗勒管激素与干细胞生长因子表达及其相关性研究

目的:研究卵巢低反应患者抗苗勒管激素(AMH)和干细胞生长因子(SCF)的表达情况及二者的相关性。方法:选择年龄均小于35岁行体外受精-胚胎移植或卵细胞浆内单精子注射的卵巢低反应患者132例(卵巢低反应组)和正常对照组91例。采用ELISA检测两组患者血清和卵泡液中AMH蛋白和SCF蛋白的表达。分离并培养颗粒细胞,采用RT-PCR检测两组患者颗粒细胞中AMH mRNA和SCF mRNA表达相对灰度值,并对卵巢低反应患者颗粒细胞中两者表达进行相关性分析。结果:1与正常对照组比较,卵巢低反应组血清AMH蛋白表达(2.21±1.11 ng/ml vs 10.49±3.29 ng/ml)和卵泡液AMH蛋白表达(4.21±0.73 ng/ml vs 5.42±0.64 ng/ml)均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01;P<0.05)。2卵巢低反应组颗粒细胞中AMH mRNA表达相对灰度值较正常对照组显著降低(4.10±0.80 vs 6.20±1.40,P<0.01),而SCF mRNA表达相对灰度值较正常对照组明显增加(4.69±1.12 vs 3.10±1.40,P<0.05)。3卵巢低反应组颗粒细胞中AMH mRNA和SCF mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.56,P<0.05)。结论:AMH的表达水平与卵巢反应性有关,卵巢低反应患者颗粒细胞中AMH表达显著降低,并与SCF的表达负相关,二者可能存在调控关系。

用自然周期方案、激素替代周期方案准备内膜的助孕治疗者短时和过夜培养冻胚的移植结局观察

目的观察用自然周期方案、激素替代周期方案准备内膜的助孕治疗者短时和过夜培养冻融胚胎的移植结局。方法 293对夫妇采用冷冻-复苏胚胎移植(FET)助孕治疗,共337个移植周期,根据移植前内膜准备方法分为自然周期组(NC组,采用自然周期准备方案)和激素替代周期组(HRT组,采用激素替代周期准备方案),每组再根据胚胎解冻后体外培养时间(短时培养和过夜培养)分层,观察FET结局(种植率、临床妊娠率、流产率、多胎率)。结果 NC组、HRT组种植率分别为32.69%、21.83%,临床妊娠率分别为59.15%、41.73%,流产率分别为7.14%、16.22%,多胎率分别为21.43%、13.51%,NC组种植率和临床妊娠率高于HRT组(P均<0.05)。NC组短时培养、过夜培养种植率分别为28.13%、35.87%,临床妊娠率分别为53.57%、62.79%,流产率分别为6.67%、7.41%,多胎率分别为20.00%、22.22%,两者比较差异均无统计学意义。HRT组短时培养、过夜培养种植率分别为21.92%、21.74%,临床妊娠率分别为44.19%、39.42%,流产率分别为21.05%、11.11%,多胎率分别为12.28%、14.81%,两者比较差异均无统计学意义。NC组、HRT组短时培养FET结局比较差异无统计学意义。与HRT组过夜培养者相比,NC组过夜培养者种植率和临床妊娠率高(P均<0.05)。结论自然周期较激素替代周期内膜准备方法可获较好FET结局,主要体现在胚胎解冻后体外培养时间选择为过夜培养时。

人卵巢颗粒肿瘤细胞COV434中抗苗勒氏管激素抑制干细胞生长因子表达的实验研究

目的探讨人卵巢颗粒肿瘤细胞COV434中AMH对SCF表达的抑制作用。方法用课题组前期已构建及鉴定成功转染AMH真核表达载体p IRES2-EGFP-AMH的COV434细胞系作为实验组,将空质粒载体转染的COV434细胞系作为阴性对照组;未经转染的COV434系作为空白对照组,分别采用Western blot和免疫荧光法检测不同干预组SCF蛋白的表达水平。结果1Western blot实验结果显示转染AMH真核表达载体p IRES2-EGFP-AMH的COV434中AMH表达较空白对照组和阴性对照组明显增强(P<0.05),阴性对照组和空白对照组无统计学差异(P>0.05)。2Western blot实验结果显示SCF在实验组表达较空白对照组和阴性对照组显著降低(P<0.05)。3免疫荧光实验结果显示SCF在实验组的平均光密度值较阴性对照组及空白对照组的表达显著升高(P<0.05)。结论人卵巢颗粒肿瘤细胞COV434中AMH能有效抑制SCF蛋白的表达,为颗粒细胞中AMH调控SCF机制的研究提供科学基础。

抗苗勒氏管激素(AMH)对离体人卵巢黄素化颗粒细胞干细胞因子(SCF)表达负调控的研究

目的:研究人卵巢黄素化颗粒细胞中抗苗勒氏管激素(AMH)对干细胞因子(SCF)表达的影响。方法:收集15例年龄<35岁因男方因素行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者的卵巢颗粒细胞,经原代培养,加入不同浓度基因重组人抗苗勒氏管激素(rhAMH),分别于培养的第4日与第6日采用实时定量PCR(RT-PCR)和免疫组织化学检测空白对照组与各实验组SCFmRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR和免疫组织化学均证实人卵巢黄素化颗粒细胞在不同浓度rhAMH干预后,SCFmRNA及蛋白的表达显著减少(P<0.05),其中15 ng/ml rhAMH抑制作用最明显;实验组第4日与第6日颗粒细胞表达SCFmRNA及蛋白无明显差异(P>0.05)。结论:AMH可有效抑制人卵巢黄素化颗粒细胞SCF mRNA及蛋白的表达。

siRNA干扰AMH基因对人卵巢颗粒肿瘤细胞COV434中SCF表达的影响

目的研究siRNA干扰AMH基因对人卵巢颗粒肿瘤细胞COV434中SCF表达的影响。方法针对AMH设计合成的4条siRNA分别转染COV434细胞,RT-PCR法检测AMH mRNA表达的变化,筛选出其中沉默AMH基因最高效的siRNA;用RT-PCR法联合免疫荧光化学法(IHC)检测该siRNA干扰AMH基因对COV434细胞中SCFmRNA和蛋白表达的影响。结果 14条siRNA均使细胞中AMH的mRNA表达降低(P<0.05),以AMH-4-siRNA沉默效果最好。2AMH-4-siRNA转染组的SCFmRNA表达量(1.3472)明显高于空白组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);空白组和阴性对照组SCFmRNA差异无统计学意义(P>0.05)。3 AMH-4-siRNA组SCF蛋白相对表达量(0.342±0.052)较空白组(0.246±0.065)和阴性对照组(0.248±0.072)显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),空白组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论构建siRNA可有效干扰COV434细胞AMH的表达,应用siRNA干扰AMH基因能够促进人卵巢颗粒肿瘤细胞COV434中SCF的表达。