新藤黄酸诱导人胃癌MGC-803细胞线粒体途径凋亡的实验研究

目的：研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,并探讨其抗肿瘤的作用机制。方法：MTT法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术（FCM）检测MGC-803细胞凋亡率;H2DCFDA探针法流式细胞术检测细胞内活性氧的含量;罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位（△Ψm）的改变;Western blot法检测细胞内P53蛋白的表达变化。结果：新藤黄酸在1.0~12.0μmol/L浓度范围内可抑制人胃癌细胞MGC-803细胞的增殖;增加细胞内活性氧的含量;降低线粒体膜电位;诱导细胞发生凋亡并呈浓度依赖性;Western blotting结果显示,新藤黄酸明显升高MGC-803细胞凋亡诱导基因P53的表达。结论：新藤黄酸可诱导人胃癌MGC-803细胞的凋亡,其机制可能与促进P53介导的线粒体途径依赖的细胞凋亡相关。

牡丹籽油降血脂、降血糖作用的实验研究

目的研究牡丹籽油对高脂血症大鼠的作用,并观察对糖尿病小鼠及小鼠糖耐量的影响。方法高脂饲料喂养SD雄性大鼠建立高脂血症模型,造模同时连续灌胃给药30 d,检测各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平;尾静脉注射四氧嘧啶诱导高血糖小鼠模型,连续灌胃给药30 d,检测小鼠血糖值;正常小鼠连续给药30 d后,灌胃葡萄糖溶液(2.5 g·kg-1),于给糖前及给糖后30、60、120 min分别检测血糖含量变化。结果高脂血症大鼠在灌胃给予牡丹籽油30 d后,低剂量组TC水平显著降低,高剂量组TG水平明显降低,且HDL-C值显著升高;牡丹籽油各剂量组均显著降低糖尿病小鼠的血糖值,且呈现一定的剂量依赖性;糖耐量实验发现,牡丹籽油可降低正常小鼠的血糖水平,在给糖30 min时的降糖作用最为明显。结论牡丹籽油可降低高脂血症大鼠的血脂水平,同时具有降低糖尿病小鼠血糖、改善正常小鼠糖耐量的作用。

中国传统文化与中医院校人文教育探讨

中国传统文化影响着中医药学的形成和发展,其核心精神贯穿于中医药文化理念当中。加强中医院校的人文教育,对于广大医学生道德取向和精诚济世行为准则的确立具有重要的现实意义。在中医院校的人文教育中,应注重营造传统文化氛围,在课堂内外及临床实践中加强传统文化教育。

舒尔经片对实验性子宫肌瘤及痛经的作用

目的:探讨舒尔经片对实验性大鼠子宫肌瘤及小鼠痛经模型的影响,为舒尔经片临床用于抗子宫肌瘤及治疗痛经作用提供实验依据。方法:①采用雌、孕激素负荷诱导大鼠子宫肌瘤模型,同时灌胃给予舒尔经片(1.12、0.56、0.28 g/kg),1次/d共30 d,测量大鼠子宫、卵巢系数及子宫横径,放射免疫法检测血清雌二醇和孕酮含量,显微观察子宫的病理形态学改变;②复制缩宫素致小鼠痛经模型,观察不同剂量舒尔经片(1.44、0.72、0.36g/kg)对小鼠扭体潜伏期及扭体次数的影响;热板法观察舒尔经片对小鼠痛阈的影响。结果:舒尔经片1.12 g/kg能显著降低子宫肌瘤大鼠子宫系数及横径,提高卵巢系数,降低大鼠血清中孕酮水平,改善子宫的病理学变化。舒尔经片各剂量均能不同程度减少小鼠扭体次数,延长扭体反应潜伏期,提高热板致小鼠的痛阈值。结论:舒尔经片对大鼠子宫肌瘤有一定的抑制作用,对痛经有较强的镇痛作用。

安徽省民间医药调查工作回顾与展望

2011～2012年为全面了解我省民间医药暨民营中医医疗机构现状,进一步发挥民间医药的特色和优势,推动民间医药的传承和创新,为人民群众健康服务,安徽省开展了全省民间医药暨民营中医医疗机构现状调查工作。通过采用面上调查统计、现场实地调查和接受献方献药等调查方式,对我省的民间医药和民营中医医疗机构的现状有了较为直观的认识,掌握了第一手的资料,记录下了一些有价值的信息,为后期数据的整理分析提供了依据,为下一步工作的开展提供了方向。

伊拉地平对MPP^+损伤PC12细胞保护作用的实验研究

目的研究伊拉地平(ISR)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)损伤的PC12细胞的保护作用及可能机制。方法MPP+处理PC12细胞建立帕金森病细胞模型;4-甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;双氯荧光黄乙酸乙酯(DCFHDA)染色流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)的生成;JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位(MMP)。结果 1 mmol·L-1MPP+处理PC12细胞24 h后能明显抑制细胞生长(P<0.01);降低线粒体膜电位;ROS含量增加。2μmol·L-1伊拉地平预处理后,PC12细胞存活率显著增加(P<0.01);线粒体膜电位升高;ROS生成减少。结论伊拉地平对MPP+损伤的PC12细胞具有保护作用,其作用机制可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,阻止线粒体氧化应激发生有关。

益气活血法防治脑缺血实验研究进展

脑血管疾病是中老年人的常见病,因其高发病率、高复发率、高致残率、高病死率的特点,成为目前疾病三大死亡原因之～.本病以脑卒中为主,尤以缺血性脑卒中最为多见,且近年来呈上升趋势.缺血性脑卒中,以突然昏仆、不省人事、半身不遂、口眼歪斜、语言不利为主症,属于中医学“中风”范畴.气虚血瘀是缺血性中风主要病机特点,治宜益气活血法.益气以改善气虚状态,活血以畅通气血渗灌.近年来,随着对缺血性中风实验与临床研究的不断深入,中医药治疗缺血性中风的临床疗效不断提高.

益气活血法治疗缺血性中风的实验研究概况

脑血管病是致死的重要病种之一[1]。脑卒中已经成为严重危害人类健康的主要疾病之一。其中,缺血性脑卒中占66.4%,且一直呈上升趋势[2]。因此,缺血性中风一直是我国中风病研究的重点。气虚血瘀是缺血性中风的根本病机,益气活血法成为防治缺血性中风的根本途径[3]。学者们对益气活血法防治缺血性中风的研究已经从分子水平进行多方面的探讨[4]。作者就近5年益气活血法治疗缺血性中风的实验研究进展概述如下。

益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠Notch3和Frizzled2 mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch3和Frizzled2 mRNA表达及这2种蛋白在海马CA1区表达的影响。方法:线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2 h,再灌注1周,随机分为假手术组、缺血再灌注组、益气活血方组和补肾生髓方组。采用Notch信号通路基因芯片PCRAssay检测额顶叶皮质Notch3和Frizzled2 mRNA表达,免疫组化EnVision两步法检测海马CA1区Notch3和Friz-zled2蛋白表达。结果:缺血再灌注组Frizzled2 mRNA表达显著高于假手术组(P<0.05),益气活血方组Notch3mRNA表达显著高于缺血再灌注组(P<0.05),补肾生髓方组Frizzled2 mRNA表达显著低于模型组(P<0.05),益气活血方组Frizzled2 mRNA表达显著高于补肾生髓方组(P<0.05)。缺血再灌注组Notch3和Frizzled2蛋白表达均高于假手术组(P<0.05),2种中药复方组Notch3和Frizzled2蛋白表达均高于缺血再灌注组(P<0.05),补肾生髓方组Notch3蛋白表达高于益气活血方组(P<0.05)。结论:益气活血方和补肾生髓方能通过增强额顶叶或海马CA1区Notch3 mRNA及蛋白表达,降低Frizzled2 mRNA及蛋白表达,调节Notch信号转导通路,促进脑损伤修复。

脑络欣通对局灶性脑缺血－再灌注大鼠血液流变学及相关调节因子的作用

目的观察脑络欣通对大脑中动脉闭塞缺血-再灌注(MCAO/R)大鼠血液流变学及相关调节因子的影响。方法将Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、通心络组、脑络欣通低剂量(40 mg/ml)组、中剂量(80 mg/ml)组及高剂量(100 mg/ml)组,每组各10只。采用线栓法制备大脑中动脉闭塞缺血-再灌注(MCAO/R)模型。采用全自动血液流变仪检测全血黏度、血浆黏度、红细胞比容(HCT);高性能血凝仪检测血浆纤维蛋白原(FIB)含量;运用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验,检测血小板生成素(TPO)、内皮素(ET)水平;运用激光多普勒仪,于造模后第14天监测各组大鼠的局部脑血流量(rCBF)。结果①假手术组、通心络组、脑络欣通3个剂量组大鼠的全血黏度各项、血浆黏度、HCT和FIB指标均低于模型组,差异有统计学意义,P<0.01。②通心络组、脑络欣通中剂量和高剂量组的HCT低于脑络欣通低剂量组,差异有统计学意义,P<0.01。③假手术组、通心络组及脑络欣通3个剂量组大鼠的TPO、ET水平均低于模型组,rCBF高于模型组,差异具有统计学意义,P<0.01或P<0.05。④脑络欣通中剂量组大鼠TPO水平低于脑络欣通低剂量组,rCBF高于脑络欣通低剂量组,差异具有统计学意义,P<0.05。结论脑络欣通可以改善MCAO/R模型大鼠的血液流变学指标,调节凝血纤溶系统相关因子,对缺血性脑血管病可能具有良好的作用。

参苓白术散对脾虚湿困证溃疡性结肠炎大鼠结肠菌群的影响

目的观察参苓白术散对脾虚湿困证溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠菌群的影响,探讨参苓白术散治疗UC的作用机制。方法将40只Wistar大鼠,随机分为正常对照组、脾虚湿困证UC模型组、参苓白术散组、阳性对照药组。采用传统中医学病因与现代医学病因相结合的方法复制UC模型,给药治疗后,提取结肠内容物细菌总DNA,应用肠杆菌基因间重复共有序列基因扩增(ERIC-PCR)技术进行菌群分析。结果 4组大鼠的结肠内容物菌丛存在整体差异,模型组ERIC-PCR指纹图谱DNA条带较少,存在6条分布较一致的主带;而其他3组ERIC-PCR指纹图谱DNA条带较多,且主带位置分布无统一趋势,其中参苓白术散组ERIC-PCR指纹图谱与正常组最为接近。结论 UC可能存在较单一的肠道优势菌,参苓白术散对脾虚湿困证UC结肠菌群的失衡具有明显的调整作用,可使肠道优势菌种类增加,恢复菌群平衡状态,从而促进损伤肠组织的恢复。

天麻素通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的PC12细胞损伤

目的:研究天麻素(Gastrodin)对谷氨酸诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的影响及可能机制。方法:以谷氨酸建立体外培养PC12细胞损伤模型并采用MTT比色法测定细胞存活率;AO/EB双染法经荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用流式细胞术检测细胞内活性氧含量以及Annexin V/PI染色后的细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白表达。结果:天麻素可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量呈一定的量效关系;同时,天麻素可明显抑制谷氨酸引起的活性氧(ROS)的累积,降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,降低PC12细胞的凋亡率,在0.1～10μmol/L剂量呈量效相关性。结论:在一定剂量范围内,天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的细胞凋亡相关。

牡丹籽油体外及对脂代谢紊乱大鼠体内抗氧化作用的研究

研究牡丹籽油的体外自由基清除率及对脂代谢紊乱大鼠体内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的酶比活力及丙二醛(MDA)含量的影响。采用α,α-二苯-β-苦味肼(DPPH·)法、[2,2-连氮-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐](ABTS)法计算自由基清除率(Inhibition percent,IP);比色法测定脂代谢紊乱大鼠肝组织及血清SOD、GSH-Px酶比活力及MDA含量。牡丹籽油清除自由基能力与其浓度呈明显的量效(正比)关系。与模型对照组比较,中、高剂量组SOD、GSH-Px酶比活力显著提高,MDA含量降低,差异具有统计学意义(P<0.05),表明牡丹籽油具有明显的体内外抗氧化作用。

两种中药复方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的影响

目的:观察补肾生髓方和益气活血方对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质LRP5和β-Catenin蛋白表达的影响。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾生髓方组、益气活血方组。线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2?h再灌注2周。治疗组连续给药2周,采用免疫组化EnVision两步法检测额顶叶皮质LRP5和β-Catenin表达的阳性面积和平均吸收光密度值。结果:皮质LRP5的平均吸收光密度值(A值),模型组与假手术组之间无明显差异,模型组与补肾组差异显著(P<0.05),模型组与益气组差异不明显,补肾组与益气组之间有明显差异(P<0.01);皮质LRP5的阳性面积值(Area值),模型组与假手术组差异不显著,与各治疗组之间有明显差异(P<0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。皮质β-Catenin的A值,模型组与假手术组之间有明显差异(P<0.05),益气组、补肾组与模型组之间无明显差异,补肾组与益气组之间无明显差异;皮质β-Catenin的Area值,模型组与假手术组之间无明显差异,与各治疗组之间差异具有显著性(P<0.05),补肾组与益气组之间无明显差异。结论:益气活血方和补肾生髓方能通过降低额顶叶皮质LRP5和升高β-Catenin蛋白表达,调节Wnt信号转导通路,促进脑缺血再灌注后内源性神经干细胞的增殖分化。

益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区wnt5a、LRP5蛋白表达的影响

目的:探讨补肾生髓方和益气活血方对脑缺血大鼠海马CA1区wnt5a、LRP5蛋白表达的影响。方法:采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组。脑缺血2 h,持续灌注10 d,采用免疫组化Envision两步法观察缺血侧海马CA1区wnt5a、LRP5蛋白表达。结果:与假手术组比,模型组wnt5a和LRP5蛋白表达的平均吸收光密度值显著高于假手术组(P<0.05);与模型组比,补肾生髓方组与益气活血方组wnt5a蛋白表达的平均吸收光密度值显著高于模型组(P<0.05),补肾生髓方组LRP5蛋白表达的平均吸收光密度值显著低于模型组(P<0.05)。结论:两种中药复方可通过增强海马CA1区wnt5a蛋白表达,抑制LRP5蛋白的表达,调节wnt/β-catenin信号转导通路。

电针对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的观察电针对脑心综合征(cerebral-cardiac syndrome,CCS)大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达的影响。方法从70只健康SD大鼠中随机选择10只作为假手术组,其余60只用于CCS模型复制。选取造模成功的大鼠30只,分为模型组、电针组和电针非经非穴组,每组10只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核方法造模,假手术组向大鼠尾状核注入等量0.9%氯化钠注射液。于造模第1天开始电针,电针组选取水沟、风府、内关和心俞穴,电针非经非穴组选取臀部非经非穴点4处,每次20min,每天1次,连续3天。假手术组和模型组仅每天抓空1次。分别采用TUNEL法和免疫组化法检测血肿周围脑组织细胞凋亡及Caspase-3表达。结果假手术组偶可见TUNEL细胞,Caspase-3少量表达;模型组血肿周围组织出现较多的TUNEL阳性细胞,Caspase-3大量表达;电针组TUNEL阳性细胞和Caspase-3表达均较模型组和电针非经非穴组明显减少(P<0.01)。结论电针可以抑制CCS大鼠脑组织细胞凋亡,其机制可能与下调血肿周围脑组织Caspase-3表达有关。

丹皮酚对脂多糖／三磷酸腺苷诱导的小胶质细胞NLRP3炎症小体激活的影响

目的观察丹皮酚(Pae)对脂多糖(LPS)与三磷酸腺苷(ATP)诱导大鼠原代小胶质细胞NLRP3炎症小体激活的影响,探讨Pae对小胶质细胞炎症反应的抑制作用及其具体机制。方法采用白细胞分化抗原11b(CD11b)免疫荧光染色法鉴定小胶质细胞;采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;采用Western blot检测细胞NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平;采用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的水平。结果 LPS(0.5 mg·L-1)/ATP(5 mmol·L-1)能增加小胶质细胞ROS及上清液IL-1β水平,上调细胞NLRP3、ASC和caspase-1蛋白水平;Pae能减少细胞ROS和上清液IL-1β水平,抑制LPS和ATP双信号上调的NLRP3、ASC和caspase-1蛋白水平。结论 Pae能抑制LPS/ATP激活的小胶质细胞NLRP3炎症小体,减少细胞上清液IL-1β水平,Pae对NLRP3炎症小体抑制作用可能与其下调小胶质细胞ROS水平有关。

新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响

目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol.L-1)处理24 h、48 h和72 h对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用;新藤黄酸作用CNE-1细胞24 h后的IC50为2.34μmol.L-1,再结合倒置显微镜观察的结果故选用2.0μmol.L-1作为药物作用浓度。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,并应用透射电子显微镜检测细胞凋亡形态改变及线粒体损伤;Western blot检测p-p38、p38、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白和线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达。结果新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1生长和增殖有抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加或作用时间的延长细胞活力明显下降。通过电镜可见2.0μmol.L-1新藤黄酸作用CNE-1细胞后细胞体积皱缩变圆,细胞核发生典型核染色质固缩等细胞凋亡形态学的变化;与control组相比包括对线粒体的损伤。Western blot表明p-p38蛋白表达有所上调,特别是在短时间(120 min)内,p-ERK1/2蛋白表达呈现时间依赖性下降;而p38和ERK1/2表达则基本不变。Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达也呈现时间依赖性增加。结论新藤黄酸能诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡,增强Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达,同时对p-p38和p-ERK1/2蛋白也有影响。

从肾精与脑髓关系谈补肾生髓法在缺血性中风恢复期治疗中作用

肾与脑在结构上互为联系,脑髓之源滥觞于肾精,二者在生理上密切相关,病理上相互影响。缺血性中风恢复期病位在脑之脉络,肾精亏虚,精不生髓,脑中脉络缺乏肾精之濡养为其主要病机,故临床治疗应以补肾生髓为治本之法,辅以补气活血化痰通络之剂,标本兼治。

大鼠血浆中的新藤黄酸HPLC测定及其药代动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中新藤黄酸浓度的HPLC方法,并用于新藤黄酸在大鼠体内的药代动力学研究。方法以藤黄酸为内标,建立大鼠血浆中新藤黄酸的HPLC测定方法。采用该方法测定大鼠单剂量静脉注射1、2、4 mg.kg-1新藤黄酸后不同时间点大鼠血浆中的新藤黄酸的浓度,对其血药浓度-时间采用BABP 3.0软件拟合,计算药动学参数。结果血浆中新藤黄酸在0.07～18.0 mg.L-1浓度范围,其线性关系良好(r=0.999),定量下限为0.07 mg.L-1,提取回收率分别为大于70%,其日内、日间RSD均小于10%。新藤黄酸以1、2和4 mg.kg-1静脉给药后,在大鼠体内的T12分别为(43.61±0.61)、(46.07±2.11)和(46.73±1.14)min,AUC0-t分别为(158.52±6.27)、(211.13±9.33)和(361.37±14.97)min.mg.L-1。结论所建立的HPLC法样品前处理简便、操作简便、能满足新藤黄酸在大鼠体内的药代动力学研究。