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携带CYB m.15024G>A突变的原发性高血压家系遗传学分析 被引量:2
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作者 贺云帆 李文旭 +2 位作者 刘贞 张娟娟 管敏鑫 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期510-517,共8页
目的:探讨线粒体细胞色素B(CYB)15024G>A突变在原发性高血压发生发展中的作用。方法:分析课题组前期收集的高血压患者的线粒体全基因组测序结果,对其中一例携带线粒体CYB 15024G>A突变的高血压患者及该例先证者的家系开展临床资... 目的:探讨线粒体细胞色素B(CYB)15024G>A突变在原发性高血压发生发展中的作用。方法:分析课题组前期收集的高血压患者的线粒体全基因组测序结果,对其中一例携带线粒体CYB 15024G>A突变的高血压患者及该例先证者的家系开展临床资料采集及分子遗传学检测,将外周静脉血标本来源的淋巴细胞转化为永生化淋巴细胞系,并对其进行线粒体蛋白质、腺苷三磷酸(ATP)、线粒体膜电位和细胞内活性氧检测。结果:该原发性高血压家系外显率为42.9%,发病年龄为46~68岁。线粒体全基因组测序结果显示母系成员均携带高度保守的线粒体CYB 15024G>A突变,该突变影响线粒体CYB的二级、三级结构和蛋白质折叠自由能,从而改变其结构稳定性及突变位点周围电子传递功能区结构。与对照组比较,携带线粒体CYB 15024G>A突变的细胞株线粒体CYB表达量、ATP产量和线粒体膜电位水平下降,且活性氧水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论:线粒体CYB 15024G>A突变影响呼吸链亚基结构及线粒体功能,进一步导致细胞功能障碍,表明该突变可能在原发性高血压中发挥作用。 展开更多
关键词 原发性高血压 线粒体DNA 基因突变 呼吸链 线粒体功能障碍 母系遗传
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发育期兔眼外肌的组织学特点
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作者 楼江涛 彭一一 +2 位作者 王春晓 许梅萍 余新平 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期50-57,共8页
目的:研究发育期兔眼外肌的组织形态、肌球蛋白重链表达、活化卫星细胞比例等组织学特征,探讨不同发育期兔眼外肌在组织学上是否存在发育性改变。方法:实验研究。于2022年7—9月间选取2周龄、4周龄、3月龄的新西兰大白兔各4只,取其右眼... 目的:研究发育期兔眼外肌的组织形态、肌球蛋白重链表达、活化卫星细胞比例等组织学特征,探讨不同发育期兔眼外肌在组织学上是否存在发育性改变。方法:实验研究。于2022年7—9月间选取2周龄、4周龄、3月龄的新西兰大白兔各4只,取其右眼上直肌中腹部肌肉切片,用HE染色、免疫组织化学染色方法观察分析不同年龄兔的眼外肌的形态特点、肌球蛋白重链亚型在不同层次(内、外眶层、球层)的表达情况以及活化卫星细胞比例。采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis检验比较组间差异。结果:组织形态上,随年龄增加,眼外肌分层逐渐清晰,肌束形成,肌纤维增粗。肌球蛋白重链表达:fast-2X亚型在外眶层少数纤维[35%(17%)]([中位数(四分位距)])中表达,且随年龄增加而增多(P<0.001);Slow-tonic亚型主要表达于球层纤维[62%(7%)]中,呈现为弱表达,各年龄段兔的眼外肌差异无统计学意义(P=0.147)。Emb亚型在内眶层[63%(33%)]和球层[18%(13%)]的部分肌纤维中表达,且随年龄的增加而减少(均P<0.001)。neo亚型在所有肌纤维中均有表达,年龄增长无明显改变。3月龄兔眼外肌的活化卫星细胞比例明显多于2周龄和4周龄兔的眼外肌[分别为13%(9%)、0%(1%)、1%(4%),均P<0.05]。结论:2周龄~3月龄兔的眼外肌在组织形态,fast-2X、Emb亚型MyHC的表达,活化卫星细胞比例上存在发育性改变;幼年至青春期可能是眼外肌发育成熟的一个重要时期。 展开更多
关键词 眼外肌 发育特点 肌球蛋白重链 卫星细胞
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髓样分化蛋白2基因沉默对高糖诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制、凋亡及炎症反应的影响 被引量:5
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作者 林中民 陈国荣 +3 位作者 张泉波 王芳 项兰婷 曹琼洁 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期273-279,共7页
目的:研究髓样分化蛋白2(MD2)基因沉默对高糖(HG)诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制、凋亡及炎症反应的影响及其机制。方法:体外大鼠心肌细胞系H9C2细胞随机分为4组(n=3):LG组、HG组、HG+NC组、HG+si-MD2组,分别转染MD2基因小干扰RNA(si-MD2)... 目的:研究髓样分化蛋白2(MD2)基因沉默对高糖(HG)诱导的大鼠心肌细胞增殖抑制、凋亡及炎症反应的影响及其机制。方法:体外大鼠心肌细胞系H9C2细胞随机分为4组(n=3):LG组、HG组、HG+NC组、HG+si-MD2组,分别转染MD2基因小干扰RNA(si-MD2)或阴性对照24h后进行低糖或高糖处理48h。RT-qPCR检测MD2及细胞内炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平,MTS法、流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡率,Westernblot法检测细胞内相关蛋白的表达水平及磷酸化水平。结果:转染si-MD2后,H9C2细胞中MD2的表达水平明显下降(P<0.01)。与低糖(LG)组比较,高糖处理后的H9C2细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平显著升高,细胞增殖能力下降并发生G1期阻滞,细胞凋亡率和CleavedCaspase-3蛋白水平升高(P<0.01)。而MD2基因沉默可拮抗高糖对H9C2细胞增殖、细胞周期、凋亡及细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA水平的影响(P<0.05)。Westernblot测定结果表明高糖处理后的H9C2细胞中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和C-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的磷酸化水平明显升高,而MD2基因沉默可抑制高糖诱导下的ERK1/2、P38MAPK和JNK蛋白激活(P<0.01)。结论:MD2基因沉默可能通过抑制ERK、P38MAPK和JNK信号通路的激活来减少高糖诱导的大鼠心肌细胞炎症细胞因子表达,减少心肌细胞凋亡,促进细胞增殖。 展开更多
关键词 髓样分化蛋白2 大鼠心肌细胞 炎症因子 细胞凋亡 增殖
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未来人工照明:向阳光靠近——人工智能照明与视觉健康 被引量:5
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作者 瞿佳 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2017年第9期513-517,共5页
光对于人眼的正常发育和视觉形成起到了至关重要的作用。人工照明所形成的人类新环境是现代社会发展的必然,而涉及眼健康或眼损伤的环境关联因素之一也是人工照明。在未来人工智能照明的科技发展中,如何寻求适宜眼健康的科技方向?综... 光对于人眼的正常发育和视觉形成起到了至关重要的作用。人工照明所形成的人类新环境是现代社会发展的必然,而涉及眼健康或眼损伤的环境关联因素之一也是人工照明。在未来人工智能照明的科技发展中,如何寻求适宜眼健康的科技方向?综合光与视觉的科学研究和诸多分析观点,作者提出,未来的人工智能照明应该向“阳光”靠近,合理构建光谱组成、模拟自然光节律,并实现可调节化。 展开更多
关键词 人工智能照明 视觉健康 自然光
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microRNA-203通过靶向SRC抑制人角膜上皮细胞增殖与迁移 被引量:1
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作者 徐微微 罗广营 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期900-907,共8页
角膜上皮损伤修复对于维持角膜的完整性和透明度至关重要,其分子调控机制尚未明了。本室前期研究发现,miR-203在小鼠角膜上皮损伤修复中显著下调,提示miR-203在该进程中发挥重要作用。本研究首先通过小鼠在体实验,证实miR-203在角膜上... 角膜上皮损伤修复对于维持角膜的完整性和透明度至关重要,其分子调控机制尚未明了。本室前期研究发现,miR-203在小鼠角膜上皮损伤修复中显著下调,提示miR-203在该进程中发挥重要作用。本研究首先通过小鼠在体实验,证实miR-203在角膜上皮损伤修复中的急剧下调。体外实验将miR-203转染入人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells, HCECs),使miR-203过表达。应用MTS法、EdU检测、流式细胞术、划痕实验和小孔迁移实验检测转染后细胞增殖、细胞周期及细胞迁移的变化情况。结果发现,过表达miR-203能抑制HCECs增殖(P<0.01),其细胞周期各时相比例中G1期上调了10.63%,并能诱导人角膜上皮细胞发生凋亡(P<0.001),划痕实验及小孔迁移检测均证实,过表达miR-203能抑制HCECs迁移。通过生物信息学预测及Western印迹验证SRC原癌基因(SRC proto-oncogene)是miR-203作用的靶基因。进一步在HCECs中敲减SRC,发现人角膜上皮细胞增殖速率放缓(P<0.001)。与阴性对照组相比,SRC敲减组细胞G1期上调了17.19%,且凋亡率增加(P<0.01)。划痕实验及小孔迁移实验也证实,降低SRC表达能抑制HCECs迁移。该研究表明,miR-203可能通过下调靶基因SRC的表达,进而影响HCECs的增殖及迁移。本研究将为miR-203在角膜损伤修复过程中的作用机制提供理论依据,并为临床治疗角膜损伤提供新靶点。 展开更多
关键词 角膜损伤修复 miR-203 增殖 迁移
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小鼠形觉剥夺对不同类型视网膜神经节细胞形态的影响
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作者 支知娜 孙翠敏 +2 位作者 傅芊 陈斯 周翔天 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期451-461,共11页
目的观察小鼠形觉剥夺对不同类型RGC形态的影响。方法实验研究。60只B6.Cg-Tg (Thy1-YFP)HJrs/J转基因小鼠随机分为形觉剥夺组及对照组,分别为28、32只。形觉剥夺组小鼠右眼通过遮盖片进行单眼遮盖2周作为剥夺眼,同时纳入对侧眼进行分... 目的观察小鼠形觉剥夺对不同类型RGC形态的影响。方法实验研究。60只B6.Cg-Tg (Thy1-YFP)HJrs/J转基因小鼠随机分为形觉剥夺组及对照组,分别为28、32只。形觉剥夺组小鼠右眼通过遮盖片进行单眼遮盖2周作为剥夺眼,同时纳入对侧眼进行分析。对照组小鼠不作任何处理,取右眼作为对照眼。形觉剥夺前及形觉剥夺后2周,测量两组小鼠屈光度及眼轴相关参数;采用免疫组织化学染色对视网膜上表达黄色荧光蛋白(YFP)的RGC进行三维重构和形态分析;采用免疫荧光染色对RGC数量进行统计。形觉剥夺组剥夺眼及其对侧眼、对照眼之间各参数比较采用单因素方差分析。结果形觉剥夺后2周,形觉剥夺组剥夺眼较对侧眼和对照眼出现了显著的近视改变(F=15.009,P<0.001),同时伴有玻璃体腔深度加深(F= 3.360,P=0047)、眼轴延长(F=5.011,P=0.013),但前房深度和晶状体厚度无明显变化(P>0.05)。在视网膜后极部,形觉剥夺组剥夺眼RGC数量较对侧眼、对照眼明显减少,差异有统计学意义(F=4.769 ,P= 0.035)。根据树突野形态,三维重构的RGC可分为4种类型。4类RGC形态在形觉剥夺后均发生了改变。其中三类参与形觉信息传递的RGC出现树突分布变丰富的改变;而参与非形觉信息传递的第四类RGC形态则发生了双眼对称性改变,表现为树突节段变少、长度变长,同心圆分析发现其树突分支点数目变少、长度变短。结论形觉剥夺影响了RGC形态,其中参与形觉和非形觉的RGC形态变化不同。 展开更多
关键词 近视 退行性 视觉 视网膜神经节细胞 树突 动物实验
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MicroRNA-96对人视网膜色素上皮细胞增殖与迁移的影响 被引量:2
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作者 王丽花 赵云萍 +3 位作者 金珊珊 王教 陈晓燕 闫东升 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期184-190,共7页
目的:探讨MicroRNA-96(miR-96)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖和迁移的影响。方法:实验研究。通过RNA原位杂交检测人胚胎眼(20周)石蜡切片中RPE层miR-96的表达情况。将miR-96和随机序列寡核苷酸链[阴性对照(NC)]通过阳离子脂质体介导... 目的:探讨MicroRNA-96(miR-96)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖和迁移的影响。方法:实验研究。通过RNA原位杂交检测人胚胎眼(20周)石蜡切片中RPE层miR-96的表达情况。将miR-96和随机序列寡核苷酸链[阴性对照(NC)]通过阳离子脂质体介导转染人眼RPE细胞,采用细胞增殖实验(MTS)、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移能力。通过生物信息学及Western blot法确定miR-96作用的靶基因。应用Western blot检测miR-96对细胞增殖迁移相关信号通路蛋白(Akt、ERK)及细胞周期相关蛋白(p-Cdc2、CyclinD2、p-Rb)表达的影响。组间数据比较采用独立样本t检验。结果:miR-96在人眼RPE细胞中有表达。MTS结果显示,转染NC、miR-96后,人眼RPE细胞的相对增殖速率分别为100%、74%±2%,差异有统计学意义(t=42.174,P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,转染miR-96后阻滞在G1期的RPE细胞明显多于转染NC后,且差异有统计学意义(t=-18.444,P=0.003)。Transwell实验结果显示,与转染NC相比,转染miR-96能显著抑制RPE细胞的迁移,差异具有统计学意义(t=6.754,P=0.002)。进而,明确了MITF是miR-96作用的靶基因。Western blot检测结果显示,转染miR-96后细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb(t=11.211,P=0.002)、p-Cdc2(t=9.133,P=0.003)、CyclinD2(t=7.542,P=0.005)以及迁移相关信号通路蛋白p-ERK(t=16.699,P<0.001)、p-Akt(t=23.552,P<0.001)的表达水平均降低。结论:miR-96通过作用于靶基因MITF,调控细胞周期和迁移相关蛋白的表达从而抑制人RPE细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮 microRNA-96 细胞增殖 细胞迁移 MITF
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机器学习确定特征性生物标志物预测主动脉瓣置换术后不良心血管事件 被引量:1
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作者 林锐 王媛 +3 位作者 周宁 严昱 周翔天 杜杰 《临床心血管病杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期248-253,共6页
目的:使用机器学习确定与主动脉瓣置换手术后不良心血管事件相关的特征性生物标志物,并验证其预测不良心血管事件发生的价值。方法:纳入2016-2019年在北京安贞医院住院行主动脉瓣置换手术的患者共1455例,收集其临床特征和实验室检查指... 目的:使用机器学习确定与主动脉瓣置换手术后不良心血管事件相关的特征性生物标志物,并验证其预测不良心血管事件发生的价值。方法:纳入2016-2019年在北京安贞医院住院行主动脉瓣置换手术的患者共1455例,收集其临床特征和实验室检查指标。对所有患者进行1年以上的术后随访,以全因死亡、心力衰竭或心肌梗死发作再入院作为不良心血管事件,使用机器学习筛选特征性生物标志物,进一步验证其预测预后的价值。结果:使用多种机器学习构建模型确定特征性生物标志物为术前B型钠尿肽和术后24 h的超敏肌钙蛋白I。COX比例风险模型结果显示,术前B型钠尿肽[HR(95%CI):1.758(1.191,2.595),P<0.01]与术后超敏肌钙蛋白I[HR(95%CI):1.830(1.137,2.945),P=0.013]是主动脉瓣置换术后不良事件发生的独立危险因素。当术前B型钠尿肽和术后24 h的超敏肌钙蛋白I共同升高时,能在一定程度上预测主动脉瓣置换患者不良事件发生[HR(95%CI):1.937(1.072,3.500),P=0.028)]。结论:基于机器学习方法确定特征性生物标志物为术前B型钠尿肽和术后24 h的超敏肌钙蛋白I,二者联合可用于预测主动脉瓣置换术后的不良心血管事件。 展开更多
关键词 主动脉瓣置换术 机器学习 血清生物标志物 不良事件
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microRNA-127抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控研究 被引量:8
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作者 曹琼洁 董菁 +3 位作者 李丽 陈晓燕 王教 闫东升 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2018年第9期546-551,565,共7页
目的:研究microRNA-127(miR-127)在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达水平及其对细胞增殖的影响。方法:实验研究。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-127在葡萄膜黑色素瘤细胞M23和SP6.5与正常葡萄膜黑色素细胞UM95中的表达水平。细胞... 目的:研究microRNA-127(miR-127)在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达水平及其对细胞增殖的影响。方法:实验研究。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-127在葡萄膜黑色素瘤细胞M23和SP6.5与正常葡萄膜黑色素细胞UM95中的表达水平。细胞实验通过阳离子脂质体介导的方法将miR-127和阴性对照(NC)转染入M23和SP6.5中,并应用细胞增殖实验法(MTS法)和流式细胞技术分别检测细胞增殖能力和细胞周期,采用WesternBlot法检测转染miR-127后细胞周期相关蛋白的表达。另外,通过RT-qPCR检测用表观药物5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和(或)曲古抑菌素A(TSA)处理后的M23和SP6.5细胞内miR-127的表达水平。MiR-127的表达量及细胞实验各参数在2组间比较采用独立样本t检验。结果:miR-127在M23和SP6.5中的表达水平低于UM95(t=72.2、591.5,P<0.001)。MTS结果显示,在M23和SP6.5细胞中,转染miR-127组相对细胞数目较NC组的100%分别减少至(62.3±4.2)%和(65.4±2.3)%,差异具有统计学意义(t=12.7、21.6,P<0.001)。流式细胞技术分析显示,转染miR-127组处于G0/G1期的M23和SP6.5细胞数量比例明显高于NC组(t=-6.7,P=0.003;t=-9.9,P<0.001),同时处于S期的M23和SP6.5细胞数量比例明显低于NC组(t=8.6,P=0.001;t=12.7,P<0.001)。WesternBlot结果表明miR-127可明显降低M23和SP6.5细胞内磷酸化Rb蛋白的表达水平(t=22.2、15.6,P<0.001)。此外,miR-127在M23和SP6.5细胞中的表达可被5-Aza-dC和TSA诱导上调(P<0.05)。结论:miR-127通过抑制细胞周期而抑制人葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖,并可被DNA甲基化和组蛋白乙酰化表观遗传机制调控。 展开更多
关键词 葡萄膜黑色素瘤 microRNA-127 细胞周期 细胞增殖 表观遗传调控
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Adverse events of intravenous immunoglobulin infusions:a three-year retrospective study in China 被引量:4
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作者 Shurong Shao Wei Guo 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2019年第1期56-61,共6页
Intravenous immunoglobulin(IVIG) is biological product, which is extensively used in pediatric patients, with high adverse effects on children among different brand preparations. In the present study, we aimed to desc... Intravenous immunoglobulin(IVIG) is biological product, which is extensively used in pediatric patients, with high adverse effects on children among different brand preparations. In the present study, we aimed to describe the adverse events of pediatric patients given IVIG infusions in China. Data were collected from all patients receiving IVIG infusion at the largest children’s hospital in Ningbo of China form January 2015 to December 2017. Descriptive statistics was used. A total of 2100 patients received IVIG infusion. All the patients who experienced adverse reactions were children(0.48%), with the highest frequency of infusion among those age 1 to 3 years old(40%). Among 10 infusions with adverse reactions, the most common indication was Kawasaki disease(40%) followed by severe pneumonia(30%). Rash was the most common adverse event(80%), followed by chest pain & cough(50%) and cyanosis(40%). Adverse events were observed to occur most frequently within 30 min from onset of infusion. Most of the reactions occurred with the large dose and the indications of used for. Since the hospital changed the brand, the incidence of adverse reactions was decreased from 1.39% to 0.13%. In this study, 0.48% of pediatric patients given IVIG infusions experienced adverse events. Anaphylactoid reaction was the most common manifestation. Symptoms occurred within 30 min from onset of infusion, which were affected by the dose, the value of lgE, the indications and the different brands. 展开更多
关键词 Intravenous immunoglobulin Adverse reactions CHILDREN Retrospective study
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DZNep靶向EZH2抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖 被引量:4
11
作者 赵云萍 金珊珊 +3 位作者 刘琦 王教 王丽花 闫东升 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2020年第7期492-499,共8页
目的:探讨EZH2抑制剂3-deazaneplanocin A(DZNep)对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法:实验研究。先采用Western blot法检测EZH2在正常葡萄膜黑色素细胞(UM95、UM96)和葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中的表达,然后在M23和SP6.5细... 目的:探讨EZH2抑制剂3-deazaneplanocin A(DZNep)对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法:实验研究。先采用Western blot法检测EZH2在正常葡萄膜黑色素细胞(UM95、UM96)和葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中的表达,然后在M23和SP6.5细胞的培养基中加入DZNep进行处理,作为实验组;以溶剂DMSO处理作为阴性对照组。采用MTS、平板克隆形成、EdU实验以及流式细胞术分别检测细胞存活、克隆形成能力、细胞增殖以及细胞周期。Western blot技术检测DZNep对细胞中H3K27me3修饰水平,细胞周期相关蛋白以及ERK信号通路的影响。组间数据均采用独立样本t检验进行比较。结果:EZH2在M23和SP6.5细胞中的表达水平与在UM95细胞中的表达相比显著升高(t=25.050,P=0.002;t=14.220,P=0.005)。MTS结果显示,DZNep显著抑制M23和SP6.5细胞的活性,呈浓度和作用时间依赖性。与阴性对照组相比,实验组中M23和SP6.5细胞的克隆形成数量显著降低(t=3.364,P=0.015;t=6.997,P<0.001),并且反映细胞增殖的EdU标记细胞比例明显减少(t=5.117,P=0.002;t=3.399,P=0.015)。流式细胞术检测结果显示,与阴性对照组相比,实验组中M23和SP6.5细胞处于G1期的细胞比例均显著升高(t=6.199,P=0.003;t=3.729,P=0.020)。Western blot检测结果显示,与阴性对照组相比,实验组M23和SP6.5细胞中的EZH2(t=5.214,P=0.035;t=13.530,P=0.005)、p-Rb(t=4.551,P=0.045;t=4.655,P=0.043)、E2F1(t=8.090,P=0.015;t=9.313,P=0.011)以及p-ERK(t=4.819,P=0.040;t=8.951,P=0.012)表达均有降低,H3K27me3修饰水平显著下降(t=5.257,P=0.034;t=5.697,P=0.030)。结论:DZNep能够抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖,具有治疗葡萄膜黑色素瘤的应用前景。 展开更多
关键词 葡萄膜黑色素瘤 EZH2 3-deazaneplanocin A 细胞增殖
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MITF在葡萄膜黑色素瘤细胞中的功能研究 被引量:3
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作者 徐微微 陈伟伟 王丽花 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2020年第5期858-867,共10页
该研究首先通过qRT-PCR和Western blot发现,MITF在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的RNA水平及蛋白水平都显著高于葡萄膜黑色素细胞中的水平。通过RNA干扰技术下调葡萄膜黑色素瘤细胞中的MITF的表达,采用MTS实验、细胞平板克隆实验发现,MITF下... 该研究首先通过qRT-PCR和Western blot发现,MITF在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的RNA水平及蛋白水平都显著高于葡萄膜黑色素细胞中的水平。通过RNA干扰技术下调葡萄膜黑色素瘤细胞中的MITF的表达,采用MTS实验、细胞平板克隆实验发现,MITF下调后葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖能力被显著抑制。利用流式细胞术及Hoechst染色、Caspase 3/7活性检测发现其细胞周期受到阻滞,且凋亡水平增加。通过RTCA xCELLigence DP检测系统定量检测发现,si-MITF能抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的迁移及侵袭能力。Western blot检测发现,MITF下调后葡萄膜黑色素瘤细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb(retinoblastoma)、CDK2(cyclin-dependent kinase 2)、CDK6、细胞周期蛋白D2(Cyclin D2)以及CyclinE2的表达水平下调,与增殖及迁移侵袭密切相关的FAK(focal adhesion kinase)及ERK(extracellular signal-regulated protein kinases)蛋白的磷酸化水平降低。该研究表明,在葡萄膜黑色素瘤细胞中下调MITF的表达后,细胞内部分周期相关蛋白、细胞增殖及迁移侵袭相关蛋白的表达均有下调,导致细胞发生G1期阻滞,使细胞的增殖、迁移及侵袭能力受到抑制,同时也促使细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 葡萄膜黑色素瘤 MITF 细胞增殖 细胞凋亡 细胞侵袭
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microRNA-182抑制人角膜上皮细胞增殖和迁移 被引量:2
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作者 曹琼洁 赵晓婷 +4 位作者 敬霞 王教 陈晓燕 闫东升 瞿佳 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2018年第8期503-508,共6页
目的:通过体内动物实验与体外细胞实验来阐明microRNA-182(miR-182)在角膜上皮损伤修复中的功能。方法:实验研究。体内实验选取5只C57BL/6J野生型小鼠,通过机械刮伤法构建小鼠角膜上皮损伤修复模型作为实验组,对侧眼作为对照组,通过实... 目的:通过体内动物实验与体外细胞实验来阐明microRNA-182(miR-182)在角膜上皮损伤修复中的功能。方法:实验研究。体内实验选取5只C57BL/6J野生型小鼠,通过机械刮伤法构建小鼠角膜上皮损伤修复模型作为实验组,对侧眼作为对照组,通过实时定量RT-PCR法检测miR-182在损伤修复过程(损伤后48h)的表达。体外实验采用脂质体介导的方法将miR-182和随机序列寡核苷酸链转染入人角膜上皮细胞(HCECs),通过细胞增殖实验(MTS法)和细胞克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力,流式细胞术检测细胞周期,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。MiR-182表达量及细胞实验各参数2组间比较采用独立样本t检验。结果:体内实验中,与对照组相比,实验组中5个样本量的miR-182在角膜上皮损伤修复过程中表达水平显著下调(t=147.6、79.2、136.8、41.3、89.8,均P<0.001)。体外实验中,miR-182组相对细胞数目为(81±5)%,与阴性对照组(100%)相比显著减少(t=6.6,P=0.003),同时miR-182组细胞克隆数明显少于阴性对照组。细胞周期检测结果显示实验组处于G1期细胞数量比例为(49±7)%,明显高于阴性对照组的(35±4)%(t=-3.0,P=0.041)。此外,细胞迁移实验结果显示miR-182组HCECs细胞迁移的距离为(99±12)μm,而阴性对照组的迁移距离为(213±14)μm(t=10.8,P=0.001),迁移速度明显变慢。结论:miR-182通过抑制角膜上皮细胞的增殖与迁移,从而对角膜上皮损伤修复起到负调控的作用。 展开更多
关键词 角膜损伤修复 miR-182 角膜上皮细胞 增殖 迁移
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SIRT1对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控 被引量:1
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作者 林永 李丽 +1 位作者 刘琦 闫东升 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2022年第5期329-336,共8页
目的:探讨沉默信息调节蛋白1(SIRT1)对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法:实验研究。通过定量PCR和Western blot法检测SIRT1在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23和SP6.5)和正常人葡萄膜黑色素细胞(DM78、UM95和UM96)中的表达。在葡萄膜黑色素... 目的:探讨沉默信息调节蛋白1(SIRT1)对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法:实验研究。通过定量PCR和Western blot法检测SIRT1在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23和SP6.5)和正常人葡萄膜黑色素细胞(DM78、UM95和UM96)中的表达。在葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中,用EX527抑制SIRT1活性,以溶剂DMSO作为阴性对照组;用SIRT1小干扰RNA(siSIRT1)转染细胞抑制SIRT1表达,以无义小干扰RNA(NC)转染作为阴性对照组。细胞增殖实验(MTS)、流式细胞术、平板克隆形成实验分别检测细胞活性、细胞周期以及细胞克隆形成能力。裸鼠眼内成瘤实验检测葡萄膜黑色素瘤细胞眼内成瘤能力。Western blot法检测增殖相关蛋白。组间数据均采用独立样本t检验进行比较。结果:与葡萄膜黑色素细胞相比,葡萄膜黑色素瘤细胞(M23、SP6.5)中SIRT1 mRNA(t=17.08,P<0.001;t=13.24,P<0.001)和蛋白(t=6.26,P=0.008)表达水平显著升高。MTS结果显示,EX527抑制M23和SP6.5细胞活性,并呈药物浓度依赖性;与NC转染组相比,siSIRT1转染组细胞活性显著减弱(t=5.94,P<0.001;t=10.73,P<0.001)。与溶剂DMSO组相比,EX527处理组(t=5.10,P=0.047;t=7.57,P=0.002)和SIRT1 siRNA转染组(t=6.41,P=0.003;t=6.10,P=0.004)中处于G1期的细胞比例均显著升高。另外,M23和SP6.5细胞EX527处理组(t=5.04,P=0.001;t=5.93,P<0.001)和siSIRT1转染组(t=11.44,P<0.001;t=8.24,P<0.001)克隆形成数量显著降低。在裸鼠眼内成瘤实验中,与NC组相比,siSIRT1转染组眼内瘤体大小显著变小(t=5.50,P<0.001)。Western blot结果显示,与DMSO处理组相比,EX527处理组中P21(t=4.63,P=0.010;t=7.90,P=0.001)表达升高,E2F1(t=12.10,P=0.003;t=5.96,P=0.004)、CYCLIND2(t=36.28,P<0.001;t=16.58,P<0.001)、p-RB(t=17.55,P<0.001;t=21.34,P<0.001)表达降低,p-AKT表达下调。与NC转染组相比,siSIRT1转染组中,P21(t=5.88,P=0.004;t=10.51,P<0.001)表达升高,E2F1(t=4.60,P=0.01;t=4.89,P=0.008)、CYCLIND2(t=5.13,P=0.007;t=5.63,P=0.005)、p-RB(t=4.45,P=0.011;t=6.53,P=0.003)表达水平降低,p-AKT(t=9.61,P<0.001;t=6.44,P=0.003)表达下调。结论:抑制SIRT1活性或表达可以明显抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖,提示SIRT1可以作为治疗葡萄膜黑色素瘤的一个新靶标。 展开更多
关键词 沉默信息调节蛋白1 EX527 葡萄膜黑色素瘤细胞 细胞增殖
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MicroRNA-199a-3p对脉络膜黑色素瘤细胞增殖的抑制作用
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作者 王教 王丽花 +2 位作者 曹琼洁 赵云萍 陈林华 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2019年第8期569-575,共7页
目的:探讨MicroRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对脉络膜黑色素瘤细胞OCM290增殖的影响及机制。方法:实验研究。首先采用Real-time PCR技术检测miR-199a-3p在正常的脉络膜黑色素细胞UM96和肿瘤细胞OCM290中的表达情况;其次采用阳离子脂质体Lip... 目的:探讨MicroRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对脉络膜黑色素瘤细胞OCM290增殖的影响及机制。方法:实验研究。首先采用Real-time PCR技术检测miR-199a-3p在正常的脉络膜黑色素细胞UM96和肿瘤细胞OCM290中的表达情况;其次采用阳离子脂质体Lipofectamine介导的转染方法,将miR-199a-3p转染入体外培养的人脉络膜黑色素瘤细胞OCM290中过表达作为实验组,将随机序列寡核苷酸链转染入OCM290细胞作为阴性对照组;然后在转染的基础上运用细胞增殖实验法(MTS法)、克隆形成实验检测细胞增殖和生长能力。流式细胞术检测细胞周期。Western blot法检测与细胞周期相关的信号蛋白如CDK2、CDK4、E2F1等的表达。组间数据比较采用独立样本t检验。结果:miR-199a-3p在UM96中高表达,而在OCM290中表达明显下调(t=13.2,P<0.001)。OCM290细胞转染miR-199a-3p后,MTS结果显示实验组细胞数为对照组的(23.8±1.7)%,细胞增殖明显被抑制(t=78.1,P<0.001);细胞克隆数减少;细胞周期滞留在G1期(t=-8.5,P=0.001);Western blot法检测发现miR-199a-3p能下调OCM290中CDK2、CDK4、E2F1等的表达水平(t=10.3,P=0.001;t=9.9,P=0.001;t=10.4,P<0.001)。结论:miR-199a-3p通过下调调控细胞周期进程的关键蛋白,影响细胞周期的进程,从而抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 MicroRNA-199a-3p 脉络膜黑色素瘤 增殖
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