抗菌肽在家蝇胚胎细胞中的表达及活性测定

目的在原核表达家蝇抗菌肽Attacin基因的研究基础上,为进一步提高抗菌肽的活性,利用重组杆状病毒Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统转染家蝇胚胎细胞系MDEC-07114,对其活性进行探索研究。方法构建pFastBac^(TM) HTA质粒,将重组质粒转化Escherichia coli(E.coli)DH10细胞,通过蓝白斑筛选,挑取阳性克隆。构建抗菌肽Attacin的家蝇胚胎细胞真核表达系统。构建Bacmid-pFastBac^(TM)-Attacin表达系统并转染家蝇胚胎细胞,提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白,纯化,SDS-PAGE和Western-Blot对蛋白表达情况进行检测、鉴定。结果重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞,细胞出现分离、停止生长、直径变大等现象;培养上清和细胞裂解物蛋白经SDS-PAGE检测,在22 KD出现了1条特异性条带;通过Western-Blot实验检测目的蛋白在家蝇胚胎细胞中成功表达;通过细菌实验测得其产物有较好的抑菌活性。结论与E.coli BL21(DE3)原核表达系统相比,家蝇胚胎细胞系灵敏度较好,但仍有较大提升空间。

腔镜及开腹手术对阑尾穿孔腹膜炎脓毒症患儿血浆TNF-α、IL-6及IL-10的影响分析

探讨腔镜及开腹手术对阑尾穿孔腹膜炎脓毒症患儿血浆TNF-α、IL-6及IL-10的影响。选择2013年5月~2016年5月我院收治的74例阑尾穿孔腹膜炎脓毒症手术患儿作为研究对象,以随机数字表将均分为两组,即对照组与研究组各37例。对照组采用传统开腹阑尾切除术,研究组采用微创腹腔镜阑尾切除术。研究组手术时间、出血量、胃肠功能恢复时间及住院时间均低于对照组(P<0.05)。研究组术后TNF-α、IL-6低于对照组(P<0.05),IL-10高于对照组(P<0.05)。相较于开腹手术,腹腔镜治疗阑尾穿孔腹膜炎脓毒症具有手术时间短、出血量少、术后恢复快等优势,且有效抑制了炎症因子的表达,提高了免疫功能,适于临床应用。