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普通生酮基古龙酸菌S_2基因文库的构建和筛选
1
作者
谢莉
窦燕峰
+2 位作者
张铎
张丽萍
赵宝华
《河北师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2008年第1期109-112,共4页
在Vc生产的第2步发酵中,普通生酮基古龙酸菌S2能利用醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为Vc的前体2-酮基-L-古龙酸(2-KLG).对普通生酮基古龙酸菌S2基因组DNA进行部分酶切,与黏粒载体pKC505连接后,用包装蛋白进行包装,转染大肠杆菌DH5α,构建成...
在Vc生产的第2步发酵中,普通生酮基古龙酸菌S2能利用醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为Vc的前体2-酮基-L-古龙酸(2-KLG).对普通生酮基古龙酸菌S2基因组DNA进行部分酶切,与黏粒载体pKC505连接后,用包装蛋白进行包装,转染大肠杆菌DH5α,构建成普通生酮基古龙酸菌S2基因组文库,得到12 000余个转化子.再利用纯化的醇醛脱氢酶免疫家兔制备出合格抗血清,应用免疫酶斑点技术(Dot-ELISA)对文库进行筛选,获得1个阳性克隆K719#.通过检测此基因工程菌的活性,表明在添加辅酶PQQ后,K719#具有使L-山梨糖转化为2-KLG的功能,从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中得到了表达,这为简化Vc的生产工艺奠定了基础.
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关键词
普通生酮基古龙酸菌S2
醇醛脱氢酶
免疫酶斑点技术
文库筛选
下载PDF
职称材料
题名
普通生酮基古龙酸菌S_2基因文库的构建和筛选
1
作者
谢莉
窦燕峰
张铎
张丽萍
赵宝华
机构
河北师范大学生命科学学院
石家庄制药集团发展部
河北省生物研究所
出处
《河北师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2008年第1期109-112,共4页
基金
河北省教育厅自然科学基金(20050131)
文摘
在Vc生产的第2步发酵中,普通生酮基古龙酸菌S2能利用醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为Vc的前体2-酮基-L-古龙酸(2-KLG).对普通生酮基古龙酸菌S2基因组DNA进行部分酶切,与黏粒载体pKC505连接后,用包装蛋白进行包装,转染大肠杆菌DH5α,构建成普通生酮基古龙酸菌S2基因组文库,得到12 000余个转化子.再利用纯化的醇醛脱氢酶免疫家兔制备出合格抗血清,应用免疫酶斑点技术(Dot-ELISA)对文库进行筛选,获得1个阳性克隆K719#.通过检测此基因工程菌的活性,表明在添加辅酶PQQ后,K719#具有使L-山梨糖转化为2-KLG的功能,从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中得到了表达,这为简化Vc的生产工艺奠定了基础.
关键词
普通生酮基古龙酸菌S2
醇醛脱氢酶
免疫酶斑点技术
文库筛选
Keywords
Key words:Ketogulonigenium vulgate
L-sorbose/L-sorbosne dehydrogenase
Dot-ELISA
gene library and selection
分类号
Q939 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
普通生酮基古龙酸菌S_2基因文库的构建和筛选
谢莉
窦燕峰
张铎
张丽萍
赵宝华
《河北师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2008
0
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职称材料
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参考文献
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