MFG-E8对卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感度的影响及分子机制

目的探讨沉默MFG-E8基因对SKOV3细胞抗癌药物敏感度的影响及其相关机制。方法小干扰技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中MFG-E8基因并对干扰效率进行测定。CCK-8检测转染MFG-E8 siRNA后SKOV3细胞对顺铂的敏感度。qRT-PCR检测MFG-E8基因沉默后多重耐药蛋白ABCB1及ABCC1 mRNA的表达,qRT-PCR及Western blot检测沉默MFG-E8对ETM相关蛋白的影响。结果MFG-E8 siRNA可有效沉默MFG-E8蛋白水平的表达;不同浓度顺铂作用于MFG-E8 siRNA转染组与阴性对照组NC siRNA两组细胞48 h后,随药物浓度增高,两组细胞增殖抑制率均上升,MFG-E8 siRNA转染组细胞增殖抑制率上升较明显(P<0.01)。3μg/ml顺铂浓度作用于两组细胞48、72 h后,与阴性对照组相比,MFG-E8 siRNA转染组细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,MFG-E8 siRNA转染组中ABCB1及ABCC1 mRNA表达均明显降低。qRT-PCR及Western blot结果显示,沉默MFG-E8基因可下调SKOV3细胞中N-Cadherin、Vimentin、Snail mRNA及蛋白的表达,上调E-Cadherin mRNA及蛋白表达。结论沉默MFG-E8基因可增加SKOV3细胞对顺铂的敏感度,下调多重耐药蛋白ABCB1及ABCC1 mRNA表达,其机制可能与沉默MFG-E8抑制EMT进程有关。

αvβ6整合素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响

目的 探讨αvβ6整合素介导的细胞与细胞外基质的黏附 ,及其对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响。方法 采用流式细胞仪测定卵巢癌细胞株SKOV3、AO、3AO细胞表面αvβ6整合素的表达 ,并利用酶联免疫吸附实验、吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色法分析顺铂诱导的细胞凋亡及αvβ6整合素对细胞凋亡的影响。结果 SKOV3、AO、3AO细胞均表达αvβ6整合素 ,其相对荧光指数 (FI)均为 1 0 3± 0 0 1。顺铂可以诱导SKOV3、AO、3AO细胞凋亡 ,经顺铂 (10 μg/ml)作用 4 8h后 ,酶联免疫吸附实验结果显示 ,生长于αvβ6整合素配体———纤维粘连蛋白 (FN)上的细胞的富集系数 (EF)分别为 2 11± 0 0 4、2 15± 0 0 6、2 11± 0 0 4 ,明显低于生长于非整合素配体———多聚赖氨酸 (polylisin)上的细胞 (分别为 3 5 1± 0 0 3、3 5 5± 0 0 4、3 6 6± 0 0 4 ,P <0 0 1) ;吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色法结果显示 ,生长于FN上的细胞凋亡率分别为 (5 0± 0 7) %、(5 0± 0 7) %、(6 0± 0 7) % ,明显低于生长于polylisin上的细胞凋亡率[分别为 (2 8 0± 0 7) %、(2 8 0± 0 7) %、(2 9 0± 0 7) % ,P <0 0 0 1],用αvβ6整合素的特异性阻断抗体封闭过的细胞再次生长于FN上时 ,细胞凋亡率 [分别为 (15 0±