白藜芦醇调控Nrf2-GPX4通路对H_(2)O_(2)诱导肺泡上皮细胞铁死亡的影响

目的探索白藜芦醇(RES)调控核因子E2相关因子2(Nrf2)-谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路对H_(2)O_(2)诱导A549细胞铁死亡的影响。方法将人肺泡上皮A549细胞随机分为对照组、H_(2)O_(2)组、RES低浓度(RES-L,50μmol/L)组、RES中浓度(RES-M,100μmol/L)组、RES高浓度(RES-H,150μmol/L)组、ML385(Nrf2抑制剂,2μmol/L ML385)组、RES-H+ML385(150μmol/L RES+2μmol/L ML385)组。除对照组外,其余各组均经H_(2)O_(2)处理细胞后,再使用相应剂量的药物或抑制剂进行干预。干预结束后,MTT法测定各组细胞活力,试剂盒检测细胞内铁离子含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平;透射电子显微镜观察线粒体结构;Western blot法检测Nrf2、GPX4、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果与对照组相比,H_(2)O_(2)组线粒体形态较受损严重,细胞存活率、SOD、GSH含量以及Nrf2、GPX4、HO-1蛋白表达均降低,铁离子、MDA含量增加(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,随着RES浓度的增加,A549细胞线粒体形态损伤得到改善,细胞存活率、SOD、GSH含量以及Nrf2、GPX4、HO-1蛋白表达逐渐增加,铁离子、MDA含量逐渐下降(P<0.05),但ML385组细胞线粒体损伤加重,细胞存活率、SOD、GSH含量以及Nrf2、GPX4、HO-1蛋白表达均降低,铁离子、MDA含量增加(P<0.05),且ML385处理可逆转RES对H_(2)O_(2)诱导A549细胞的保护作用。结论RES可能通过激活Nrf2-GPX4信号通路降低H_(2)O_(2)诱导的A549细胞内氧化应激水平,抑制铁死亡。