应用突变特异PCR检测HBV前C区nt1896位点突变

目的建立检则HBV前C区突变的突变特异聚合酶链反应(msPCR)方法,探讨前C区突变与肝病临床分型、e系统状态及病毒复制的关系。方法根据HBV前C区nt1896G→A突变设计并合成引物,建立msPCR检测方法,通过测序和扩增产物电泳证实msPCR的特异性。结果229例急性肝炎、慢性肝炎轻度、中度、重度及肝硬化患者nt1896突变株感染率分别为25.0%、5.3%、5.2%、27.8%和20.0%;野生株和突变株混合感染率分别是62.5%、32.9%、50.6%、38.9%和38.0%。221例慢性HBV感染者中,野生株、突变株和混合感染者血清HBeAg阳性率分别为71.3%、34.8%和51.1%;HBVDNA含量分别为7.1×108±3.3×106、7.2×107±1.3×106和2.1×109±2.4×106copies/ml;ALT异常率分别为46.3%、73.9%和54.4%,突变组显著高于野生组(P<0.05)。干扰素治疗后,混合感染者血清HBVDNA的阴转率显著高于野生株(P<0.05)。结论msPCR检测nt1896突变灵敏特异,nt1896突变与肝病严重性有密切关系。

应用系统发育树分析DDBJ基因库中HBV基因序列的基因型

为了充分利用核酸库中的HBV序列信息,探讨DDBJ核酸库中HBV基因序列的基因分型,采用ClustalX(1.8)软件比较HBV基因序列前S区序列差异并产生系统发育树。通过对下载的1471条HBV基因序列进行系统分析,获得了228条前S/S区完整的HBV基因序列,其中有66条序列的基因型已被各种方法所证实。利用软件分析绘制了基于228条HBV前S区基因序列的系统发育树。66条已知基因型HBV基因序列在系统发育树上的分型与其原有基因型完全吻合。在228条HBV基因序列中,有207条序列分别属于A、B、C、D、E、F和G等7个基因型,但另外21条序列不能归属于上述7个基因型的任何一种,而且它们又分为彼此相互独立存在的两群,暂分别称之为未分型Ⅰ和未分型Ⅱ。经比较未分型Ⅰ、Ⅱ和其他7个基因型前S区核苷酸序列,发现未分型Ⅰ、Ⅱ和D型前S区都有33个核苷酸缺失,但三者基因缺失片段的位置和形式各不相同。但其它六型前S区无大片段基因缺失。结果说明采用基于前S区的系统发育树基因分型分析方法正确可靠。除了现已证实的7个基因型外,尚可能存在另外两个新的HBV基因型。

新生儿吸入性肺炎和肺出血与单纯疱疹病毒感染

目的探讨新生儿吸入性肺炎和肺出血与单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)感染的关系.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应的方法(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)检测26例因吸入性肺炎和19例因肺出血死亡的新生儿肺组织中HSV-DNV.结果45例肺组织中,共检出HSV-DNA 19例,总检出率为42.2%(19/45),其中26例吸入性肺炎肺组织中检出10例,检出率为38.5%(10/26),19例肺出血肺组织中检出9例,检出率为47.4%(10/19);吸入性肺炎与肺出血组的HSV-DNA定量值分别为(3.65±7.24)×105与(8.26±2.27)×106,2者比较差异无显著性(P＞0.05);HSV-DNA定量值大于1.0×105基因拷贝/毫克与小于1.0×105基因拷贝/毫克比较,前者临床症状重,死亡时间早.结论在新生儿吸入性肺炎和肺出血致死因素中,应注意HSV感染的作用.对HSV定量值大于1.0×105基因拷贝/毫克的患儿,加强抗病毒的治疗可能是必要的.

HBV核心启动子突变与临床表现及病毒复制的关系

目的 探讨HBV核心启动子nt176 2～ 176 4突变与肝病严重性的关系以及对e系统状态和病毒复制的影响。方法 采用半套式突变特异PCR (msPCR)技术检测 97例各型肝病患者血清nt 176 2～ 176 4突变株的感染状况。结果 经测序和扩增产物电泳证实 ,采用我们设计的引物建立的msPCR方法检测HBV感染者血清nt 176 2～ 176 4突变株和野生株的特异性强 ,方法可靠。急性肝炎、慢性肝炎轻度、中度、重度及肝硬化患者nt176 2～ 176 4突变株感染比例分别为 2 5、7 4 3、10 31、1 3和7 15 ,肝硬化患者nt 176 2～ 176 4突变株感染率显著高于慢性肝炎轻度患者 (P <0 .0 2 5 )。在 92例慢性HBV感染者中 ,野生株 (2 5 92 )、突变株 (42 92 )和混合感染者 (2 5 92 )血清HBeAg阳性率分别为80.0 %、5 6 0 %和 6 4.3% ;HBVDNA含量分别为 (4.4± 8.5 )× 10.8、(1.1± 1.36 )× 10.9和 (1.4± 1.8)× 10.9拷贝 ml;ALT异常率分别为 4 4.0 %、5 2.0 %和 4 2.6 % ;ALT水平分别为 (5 8.6± 79.0 )、(5 7.1± 75.2 )和(6 2 .6± 90.3)IU L ,以上各组之间比较差异无统计学意义。结论 msPCR技术检测nt176 2～ 176 4突变灵敏特异。nt176 2～ 176 4突变与肝病严重性有密切关系 ,这种相关性与突变株的e系统状态、高病毒复制无任何关?

复方中药对银屑病患者外周血白介素12的表达

近年研究认为，银屑病是一种T细胞介导的自身免疫性疾病一。本实验通过体外培养的寻常性银屑病患者外周血树突细胞（DC）IL-12的产生情况，研究复方中药对寻常性银屑病患者外周血DC的IL-12mRNA表达的影响。