精液温度对同源卵母细胞妊娠结局的影响

目的 探讨体外受精(IVF)短时受精时精液优化处理后到授精前放置温度对同源卵母细胞受精和妊娠结局的影响。方法 取卵当日,其丈夫用手淫法取精,液化后采用密度梯度离心联合上游法(DGC+CSW)进行精液优化处理,将精液分为两管,一管放置于室温,一管放置于37℃培养箱。将获卵数≥10个的IVF短时受精助孕患者的同源卵子随机分为两组,分别用室温(室温组)和培养箱(对照组)精液行IVF短时受精,比较两组受精及胚胎发育情况。结果 本研究共纳入180个短时受精周期,其中IVF正常受精161个周期,补救单精子卵胞质显微注射技术(Re-ICSI)19个周期。室温组和对照组MⅡ卵数和MⅡ卵率比较,差异无统计学意义(P>0.05);室温组IVF正常受精周期和Re-ICSI周期的受精率、卵裂率、优质胚胎率和囊胚率均稍高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IVF短时受精前优化处理后精液放置温度对妊娠结局无明显影响。

hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a影响PCOS患者颗粒细胞凋亡的研究

目的探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体miR-1260a靶向CASP8对多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞凋亡的影响。方法取健康足月胎儿的脐带进行组织块贴壁法分离培养获得hUC-MSCs,采用流式细胞仪检测其标志性蛋白CD73和CD90的表达。收集hUC-MSCs培养上清液,提取hUC-MSCs外泌体,透射电镜观察其形态,Western blot检测外泌体膜表面标志物热休克蛋白70(HSP70)和肿瘤易感基因101(TSG101)的表达。PKH67标记外泌体,采用激光共聚焦显微镜观察PCOS颗粒细胞对外泌体的内化作用。Western blot检测hUCMSCs外泌体对PCOS颗粒细胞凋亡的影响。利用GSE69909临床样本进行生物信息学分析,得到hUC-MSCs外泌体中异常高表达的miRNAs,并通过实时荧光定量PCR进行验证。合成miR-1260a模拟物及其对照转染至KGN细胞中,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。利用Target Scan Human 7.2数据库进行miR-1260a靶基因的预测,采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-1260a对靶基因的调控作用。qPCR检测PCOS颗粒细胞摄取hUC-MSCs外泌体前后miR-1260a及CASP8的表达情况。结果经鉴定所培养的细胞符合hUC-MSCs的特征,hUC-MSCs外泌体为直径30~150 nm的圆形或椭圆形囊泡状结构,表达标志物蛋白HSP70和TSG101,并且可被PCOS颗粒细胞摄取。与对照组相比,hUC-MSCs上清液处理组及hUC-MSCs外泌体处理组Cleaved-Caspase-8、Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达显著下调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著上调(P<0.05)。经GSE69909数据库筛选及qPCR验证发现miR-1260a在hUC-MSCs外泌体中富集,miR-1260a过表达可显著抑制颗粒细胞的凋亡(P<0.05),经验证miR-1260a可直接靶向CASP8且PCOS颗粒细胞摄取hUC-MSCs外泌体后,颗粒细胞中miR-1260a的表达升高,CASP8的表达降低(P<0.05)。结论hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a通过靶向CASP8抑制PCOS颗粒细胞凋亡。

人脐带间充质干细胞外泌体miR-100对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞炎症的影响

目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体miR-100对多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞炎症的影响。方法 选取2021年3月至2021年12月于石家庄市第四医院生殖医学中心就诊的70例PCOS患者为研究对象(PCOS组),同期70例因输卵管因素助孕治疗的非PCOS患者为对照(对照组),比较两组患者的临床基线资料及IVF妊娠结局相关参数。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测患者颗粒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达。采用二元Logistic回归分析影响PCOS的危险因素。RT-qPCR验证hUC-MSCs外泌体中miR-100的表达水平。合成miR-100模拟物及其对照转染至人卵巢颗粒细胞KGN中,RT-qPCR检测miR-100的表达水平。在脂多糖(LPS)诱导的KGN炎症细胞模型中转染miR-100模拟物及其对照,RT-qPCR检测TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平。采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-100对靶基因的调控作用。miR-100过表达后,Western blotting检测KGN炎症模型中Toll样受体4(TLR4)、 p-IκBa、IκBa、p-p65、 p65蛋白水平。结果 与对照组比较,PCOS组患者体质量指数(BMI)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、窦卵泡数(AFC)、获卵数升高(P值分别为<0.001、<0.001、0.020、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001);但MII卵率和2PN受精率降低,差异有统计学意义(P均<0.001)。与对照组患者比较,PCOS组患者TNF-α、IFN-γ的mRNA水平升高,差异有统计学意义(P均<0.001)。二元Logistic回归分析结果显示,LH、HOMA-IR、TNF-α、IFN-γ是影响PCOS的危险因素(P值分别为0.031、0.001、0.030、0.005)。RT-qPCR结果显示,miR-100在hUC-MSCs-exos中富集,miR-100过表达可抑制LPS诱导的颗粒细胞炎症因子TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平(P值分别为0.041、<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-100能结合TLR4 mRNA 3’UTR并有效抑制其表达(P<0.001)。Western blotting结果显示,与miR-NC组比较,过表达miR-100后KGN炎症模型中TLR4、 p-IκBa和p-p65蛋白表达降低(P值分别为<0.001、<0.001、0.049),IκBa蛋白水平升高(P<0.001)。结论 PCOS患者颗粒细胞TNF-α、IFN-γ表达升高,是影响PCOS的危险因素。hUC-MSCs来源的外泌体miR-100可通过靶向TLR4/NF-κB信号通路抑制PCOS颗粒细胞的炎症反应。

短时受精对供精体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的比较供精与夫体鲜精行体外受精(in vitro fertilization, IVF)短时受精(精卵共培养6 h后去除颗粒细胞),及时补救卵浆内单精子注射(rescure-intracytoplasmic sperm injection, Re-ICSI)对妊娠结局的影响。方法选择134例无精症患者作为供精组,1 032例精液均无明显异常者作为夫精组。采用短时受精并比较两组ReICSI率,IVF正常受精周期和Re-ICSI周期的受精率、卵裂率、D3优质胚胎率、囊胚形成率、可用囊胚形成率、优质囊胚形成率和累积妊娠率等。结果供精组Re-ICSI周期比例(10.4%, 14/134)与夫精组(10.1%, 104/1 032)比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组IVF/Re-ICSI受精率、卵裂率、D3优质胚胎率、囊胚形成率、可用囊胚形成率和优质囊胚形成率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);IVF供精组累积妊娠率显著高于夫精组(P <0.05)。结论对供精IVF患者采用短时受精,Re-ICSI可使患者获得较好的妊娠结局,供精累积妊娠结局好于夫精。