核酸探针杂交及酶联显色方法定量检测微小RNA-21

目的:建立一种基于核酸探针杂交及酶联显色的高灵敏方法,实现对微小RNA-21(miRNA-21)的定性和定量检测。方法:将生物素标记的miRNA-21捕获探针通过生物素-亲和素系统固定在96孔板上,当靶miRNA-21出现在反应体系中时,能够与固定在96孔板上的捕获探针结合。利用辣根过氧化物酶标记的DNA检测探针的催化和信号放大作用,催化底物3,3’,5,5’-四甲基联苯胺,使反应体系出现颜色变化,根据颜色变化对miRNA-21的浓度进行定性和定量分析。结果:通过考察方法的灵敏度、精密度、回收率可得该方法最低检测限可达0. 81 pmol·L-1,相对标准偏差均在7. 5%以下,回收率在78. 9%~119. 2%之间,结论:本研究建立了一种高通量显色分析方法,该方法能够高灵敏检测miRNA-21,且具有良好的灵敏度、重复性和回收率。