双抗CMV和ToMV RNAi载体的构建及烟草遗传转化

为了获得抗CMV和ToMV的转基因烟草,本试验采用RT-PCR的方法从新疆加工番茄CMV分离物NS0-4克隆了1a复制酶第71～360bp和第1801～2050bp序列作为干扰片段CR9和CR14,以及从ToMV分离物SCS-4克隆了130/180kDa复制酶第658～940bp和第2551～2850bp序列作为干扰片段To9和To14。通过T克隆载体将CR9和To9及CR14和To14进行拼接,分别构建成含反向重复结构拼接片段的RNAi表达载体pBi35STC9和pBi35STC14;利用农杆菌介导法分别将表达载体侵染本氏烟(Nicotiana benthamiana),再生植株经分子检测,结果显示已成功获得了转pBi35STC9烟草9个单株及转pBi35STC14烟草8个单株,为进一步的攻毒试验奠定了基础。