红番3号加工番茄遗传转化再生体系的建立

本研究以加工番茄红番3号子叶为外植体,对加工番茄再生体系无菌苗的苗龄、培养基激素的配比和培养基基质选择方面进行优化。结果表明:8～10 d的子叶为最佳的外植体。以MS为基本培养基,附加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L-1)分别与不同浓度6-BA(1.0、1.5、2.0、2.5mg·L-1)/ZT(0.1、0.5、1.5、2.0mg·L-1)的组合。经诱芽比较,在不同浓度6-BA/ZT与不同浓度IAA组合中,诱导出愈伤组织和不定芽分化最高的培养基为MS+ZT 0.5mg·L-1+IAA 0.1mg·L-1+植物凝胶2g·L-1。以1/2MS添加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L-1)进行生根比较,再生芽在1/2MS+IAA 0.1mg·L-1生根培养基上生根最好。

新疆海岛棉新海15体细胞胚胎的发生及植株再生

为了扩展可再生棉花的基因型,选取新疆自育海岛棉品种新海15的胚珠为外植体,利用组织培养的方法进行再生体系的建立。结果表明:含0.5mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D的MSB培养基,在暗培养条件下可诱导胚珠,产生初始愈伤;愈伤分化则以含0.05/0.1mg/L KT和0.1mg/L 2,4-D的MSB培养基效果较佳;选取浅黄色、结构疏松的愈伤组织在含较高浓度IBA和较低浓度KT、2,4-D的3种调控培养基上依次继代,以此实现胚性愈伤组织的增殖及细胞状态调控;液体悬浮培养和干燥胁迫处理均有利于胚性愈伤的体细胞胚胎诱导;子叶胚的萌发及植株再生则以含谷氨酰胺和天冬酰胺的1/2 MSB培养基效果较佳。

棉花GhGAI1基因克隆及其功能的初步分析

DELLA蛋白是赤霉素信号通路中重要的蛋白质作用因子,负调节植物体中赤霉素的水平,同时受到生长素、脱落酸和乙烯的共同调节。根据已知的生物信息数据,本研究克隆了棉花GhGAI1基因,序列分析表明它编码DELLA蛋白。构建GFP与GhGAI1融合蛋白重组质粒,利用根癌农杆菌介导的花浸泡转基因方法转化拟南芥co-lumbia生态型植株,进行过量表达实验。结果表明,GFP-GhGAI1融合蛋白定位于细胞核并且在施加赤霉素后迅速降解,表明该基因编码蛋白参与赤霉素信号通路。

库尔勒香梨苹果褪绿叶斑病毒RNAi载体构建及烟草遗传转化

为了初步研究苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)中CP、MP基因的功能及致病相关性,根据Genbank中登录的ACLSV序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增CP基因5’端序列377bp(PCR-CLA)和MP基因3’端序列354bp(PCR-CLB)作为靶标基因。以植物表达载体pBi35SG12为骨架载体,卡那霉素抗性基因为筛选基因,将靶标基因的正向序列和反向重复序列分别插入到内含子(intron)的两侧,构建RNAi载体pBi35S_CLA和pBi35S_CLB,利用农杆菌介导的方法转化西方烟(Nicotiana occidentalis),通过对各载体的干扰效果评价来分析各基因的主要功能。通过PCR检测pBi35S_CLA和pBi35S_CLB,结果表明已分别获得27株和24株转基因植株。本研究为进一步评价各载体的干扰效果和研究ACLSV主要基因的功能奠定了基础。