棉蚜V-ATPase-A基因RNAi载体的构建及其在转基因拟南芥的基因表达

V-ATPase-A具有催化ATP水解的活性位点的功能,被确认为看家基因。通过构建蚜虫V-ATPase-A干扰载体,运用蘸花法转入拟南芥中,筛选出纯合子后进行转录水平的分析,再对取食相应转基因拟南芥的蚜虫体内V-ATPase-A基因进行表达分析。结果表明,拟南芥上能成功表达dsRNA,而取食3个line的转基因拟南芥的蚜虫体内V-ATPase-A基因表达量是取食野生型拟南芥的17%、10%、4%,基因明显受到抑制,成功的干扰了蚜虫体内V-ATPase-A基因。

棉花DEELA基因干扰载体的构建及转化研究

本研究联合了棉花DELLA蛋白基因GhGAI1和GhGAI2的部分序列构建了在棉花纤维细胞中优势表达hpRNA的表达载体。通过农杆菌介导法转化新疆主栽棉花品种新陆早33号,在其不同生长期对其不同组织部位进行大田转化,主要侵染方法有茎尖浸润法、花苞注射法和花喷洒法,以研究不同方法的转化效率。对T1代植株进行卡那霉素筛选及PCR检测,结果表明这3种侵染方法均获得了抗卡那霉素的转化植株,而只在通过花喷洒法和花苞注射法获得的抗性植株中检测到目的基因。