TGF-β1 rs1800469基因多态性与新疆汉族原发性高血压的相关性研究

为研究转化生长因子β1(TGF-β1)基因单核苷酸多态(SNP)rs1800469及血浆水平与新疆汉族原发性高血压(EH)的关系。采用整群抽取随机抽样的方式,以新疆沙湾县732名汉族人(EH组365人,对照组367人)为研究对象,进行流行病学调查和临床检查,并采集血样。用双抗体夹心法(ELISA试剂盒)测量TGF-β1血浆浓度。SNaPshot方法进行基因分型。rs1800469基因型及等位基因在EH组和对照组分布差异无显著性(P>0.05)。TGF-β1血浆水平在EH组与对照组各基因型和等位基因之间无差异(P>0.05)。结果表明:在新疆汉族人群中TGF-β1基因rs1800469位点存在C/T分子变异,与原发性高血压缺乏关联。同时TGF-β1基因rs1800469位点多态性与TGF-β1血浆水平不相关。

eNOS基因27bp VNTR多态性与新疆汉族原发性高血压的相关性研究

为探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因27bp VNTR多态性与新疆汉族原发性高血压(EH)的相关性。采取整群随机抽样的方法,选取新疆沙湾县汉族346名EH患者(EH组)与385名正常对照者(NT组)为研究对象,进行流行病学调查和临床检查,并采集血样。采用荧光标记扩增产物长度多态分析方法检测eNOS基因27bp VN-TR多态性。结果显示:eNOS基因27bp VNTR基因型bb.aa.ab.bc在EH组及NT组中的分布频率分别为278(80.3%)、3(0.9%)、65(18.8%)、0(0%)和306(79.5%)、4(1.0%)、74(19.2%)、1(0.3%)。等位基因b、a、c在EH组和NT组中分布频率分别为621(89.7%)、71(10.3%)、0(0%)和687(89.2%)、82(10.6%)、1(0.2%),EH组和NT组基因型和等位基因分布频率无显著性差异(P>0.05)。由此可知,eNOS基因27bp VNTR多态性可能与新疆汉族原发性高血压不相关。

内皮型一氧化氮合酶基因标签单核苷酸多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的关联研究

目的:探讨新疆哈萨克族人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因标签单核苷酸多态性与原发性高血压之间的关系。方法:采用流行病学病例—对照研究,酚—氯仿法进行DNA抽取及纯化,用SNaPshot分型技术对新疆哈萨克族363例原发性高血压患者(病例组)和370例健康对照者(对照组)进行eNOS基因的6个标签单核苷酸的多态性(tSNP)rs1800783、rs7830、rs3918188、rs1799983、rs2070744和rs1800779分型,并测定十项生化指标,测量体重指数、腰臀比等指标。结果:新疆哈萨克族人群eNOS基因6个tSNP在病例组各基因型频率和等位基因频率与对照组分布差异无统计学意义(P>0.05)。性别分层发现eNOS基因rs1799983男性病例组与对照组G和T等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05),男性病例组G等位基因频率(80.8%)低于对照组(87.9%),而T等位基因频率(19.2%)高于对照组(12.1%),T等位基因患病风险为G等位基因的0.587倍(95%CI 0.370～0.901,P=0.015)。发现除rs1800783、rs1800779、rs2070744位点间存在强的配对连锁不平衡外,其它tSNP各位间不存在配对强连锁不平衡,所构建的单体型在病例组和对照组的分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:eNOS基因rs1799983 T等位基因可能是新疆哈萨克族男性原发性高血压的遗传易感基因;rs1800783与rs1800779、rs2070744位点间存在强连锁不平衡;6个tSNP构建的单体型与原发性高血压无相关性。

中国新疆地区肥胖、糖尿病前期和2型糖尿病检出率及民族分布特征

目的了解中国新疆地区汉族、哈萨克族和维吾尔族肥胖、糖尿病前期和2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的检出率。方法于2017年间在新疆地区募集87748名志愿者参与该横断面调查。肥胖的标准根据中国营养治疗专家超重/肥胖医学专家共识;2型糖尿病的诊断根据新修订的《中国2型糖尿病防治指南(2017版)》;血脂异常的指标根据2016年修订的《中国成人血脂异常防治指南》和《高甘油三酯血症及其心血管风险管理专家共识》。结果(1)维吾尔族肥胖检出率(23.28%)是汉族的1.58倍(14.75%),哈萨克族肥胖检出率(18.31%)是汉族的1.24倍。哈萨克族女性肥胖检出率是男性的1.37倍,维吾尔族女性肥胖检出率是男性肥胖检出率的1.72倍,而在汉族个体中,男性肥胖检出率是女性的2.42倍。(2)糖尿病前期检出率:汉族为7.39%,哈萨克族为2.3%,维吾尔族为5.8%。2型糖尿病检出率:汉族为11.81%,哈萨克族为2.24%,维吾尔族为5.49%。(3)年龄、腰围、甘油三酯(triglyceride,TG)是汉族2型糖尿病的风险因素;年龄、体质量、TG、低密度脂蛋白(low⁃density lipoprotein,LDL)为哈萨克族2型糖尿病的风险因素;性别、年龄、体质量、体质量指数(body mass index,BMI)、腰围、TG、总胆固醇(total cholester⁃ol,TC)是维吾尔族2型糖尿病的风险因素。(4)新疆北部肥胖比例为15.6%,东部和南部分别为21.5%和23.2%;新疆北部(7.2%)和东部(6.2%)地区2型糖尿病的检出率高于南部(4.8%)地区。结论中国新疆地区汉族、维吾尔族和哈萨克族肥胖、糖尿病前期和糖尿病检出率存在显著差异,不同民族2型糖尿病的危险因素不同;新疆不同地区肥胖、糖尿病前期和2型糖尿病检出率也存在显著差异。

MIRU技术在石河子地区部分结核杆菌基因分型聚类分析中的初步应用

目的采用结核杆菌散在分布重复单位(mycobacterial interspersed repetitive units,MIRU)分型技术,对石河子地区结核杆菌临床分离株进行基因分型及聚类分析,初步筛选可用于石河子地区结核杆菌临床分离株基因分型的MIRU位点。方法以本实验室保存的结核杆菌临床分离株基因组DNA为模板,采用PCR技术与核酸凝胶电泳技术,分别对7个MIRU位点进行检测,计算分辨指数,应用ntsys2.10e软件对菌株基因型进行聚类分析。结果石河子市33株临床分离株有22种基因型,均与结核杆菌标准株(H37Rv)不同;在石河子地区结核杆菌临床分离株的7个MIRU位点中,分辨率高的位点有1个(MIRU26);中等有2个(MIRU10,MIRU16);低的有3个(MIRU23,MIRU39,MIRU40);有一个位点分辨率为0(MIRU27);石河子地区分离株总HGI指数为:0.966。结论本实验选取的7个MIRU位点中有3个(MIRU26,MIRU10和MIRU16)可用于石河子地区结核杆菌临床分离株初步基因分型。

高甲基化相关的CCL5低表达促进肝癌细胞增殖及免疫抑制

目的肝细胞癌的进展与免疫微环境的失调密切相关。趋化因子在招募免疫细胞进入肿瘤组织的过程中起着重要作用。本文探讨了CCL5在肝癌进展中的作用。方法通过GEO数据库分析CCL5在肝癌组织中的表达及与患者预后的关联,通过免疫组织化学染色检测CCL5在肝癌患者临床标本中的表达情况,通过TCGA数据库分析CCL5与免疫浸润的相关性及表达量异常的原因。结果CCL5在肝细胞癌组织中表达下降并与患者预后不良相关。CCL5低表达与肝癌组织中的免疫细胞浸润减少有关,而过表达CCL5能够抑制肝癌细胞的增殖。启动子DNA高甲基化引起了CCL5在肝癌组织中的低表达。结论高甲基化相关的CCL5低表达能够促进肝癌免疫抑制及肿瘤细胞的增殖,CCL5可作为肝癌的一个预后指标和潜在治疗靶点。

异位表达LncRNA PVT1/EIF4A1促进胃癌细胞增殖迁移的作用研究

目的探索长链非编码RNA人浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)协同真核翻译起始因子4A1(human eukaryotic translation initiation factor4A1,EIF4A1)促进人胃癌细胞SGC-7901增殖与迁移能力的作用。方法使用Western Blot检测EIF4A1、real time-PCR检测PVT1在胃癌细胞(SGC-7901、NCI-N87、MGC-803、BGC-823)和正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达量。单独或共同过表达胃癌细胞SGC-7901中的PVT1和EIF4A1,EIF4A1的蛋白表达量使用免疫印迹法检测,PVT1的表达水平使用real time-PCR检测,采用划痕实验和Transwell实验检验细胞的迁移能力,采用MTT实验和平板克隆形成法检验细胞的增殖情况,采用免疫印迹法检测E-cadherin,N-cadherin,smad3和TGF-β蛋白表达量。结果以正常胃黏膜细胞作为对照,筛选有统计学差异的PVT1和EIF4A1的本底表达量低的胃癌细胞(P<0.05)。单独或共同过表达胃癌细胞中PVT1和EIF4A1后,共同过表达组平板克隆形成数为492±8.72,单独过表达PVT1组平板克隆形成数为251±1.53,单独过表达EIF4A1组平板克隆形成数为228±1.52,对照组平板克隆形成数为205±2.08。在MTT实验中,共同过表达组OD值高于单独过表达组和对照组。Transwell结果显示共同过表达组迁移细胞数为308±29.10,单独过表达PVT1组迁移细胞数为222±14.42,单独过表达EIF4A1组迁移细胞数为206±10.58,对照组迁移细胞数为169±18.04。划痕实验结果提示共同过表达组伤痕愈合速率高于单独过表达组和对照组。免疫印迹结果说明共同过表达组E-cadherin低于单独过表达组和对照组,共同过表达组N-cadherin、smad3和TGF-β高于单独过表达组和对照组。以上结果均具有统计学差异(P<0.05)。结论过表达PVT1和EIF4A1可以协同促进SGC-7901细胞的增殖能力,并通过改变EMT相关蛋白的表达促进胃癌细胞SGC-7901的迁移能力。

缝隙连接在同型半胱氨酸介导的高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

为探讨缝隙连接在同型半胱氨酸(Hcy)介导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用。取大鼠胸主动脉,采用组织贴块法进行原代培养,取3～5代细胞。分别采用不同浓度的Hcy(0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5mmol/L)作用24h,用MTT法测定各组吸光值(A值),确定Hcy的作用浓度。取生长正常的细胞,分为4组:对照组(自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞组);不同干预组(均与自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞孵育):Hcy各浓度组;缝隙连接阻断剂(18α-GA)组;Hcy+18α-GA组;继续培养24h,用MTT法测细胞的增殖活性。结果显示:与对照组比较,0.025mmol/L及0.05mmol/L的Hcy浓度刺激下A值增大(P<0.05);缝隙连接阻断剂组A值降低。与Hcy组相比,Hcy+缝隙连接阻断剂组A值降低(P<0.05)。由此可知,缝隙连接可能参与了Hcy介导的高血压血管平滑肌细胞增殖。

腹部脂肪组织脂联素表达与新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病的相关性研究

为探讨脂联素(adiponectin,APN)m RNA表达与新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病的相关性。将样本分为3组:正常组(18.5 kg/m2≤BMI≤24 kg/m2)50例,肥胖组(BMI≥28 kg/m2)48例,2型糖尿病组(餐后2 h血糖≥11.1mmol/L空腹血糖≥7.0 mmol/L)16例,腹部择期手术时取其网膜脂肪组织,采用实时定量RT-PCR(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)对上述3组样本中的脂联素m RNA表达进行检测。采用SPSS17.0进行统计学分析。结果显示,肥胖及糖尿病组个体体重、腰围、臀围、腰臀比及体质指数均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肥胖组男女性别间差异有统计学意义(P<0.01)。比较各组脂联素m RNA相对拷贝数后发现,正常对照组显著高于肥胖及糖尿病组,差异均有统计学意义(P<0.01)。同时肥胖组高于糖尿病组,但差异无统计学意义(P=0.753)。腹部脂肪组织脂联素m RNA相对拷贝数与BMI显著负相关(r=-0.334,P=0.045),与腰围显著负相关(r=-0.053,P=0.047),与血糖水平显著负相关(r=-0.129,P=0.017)。由此可知,腹部脂肪组织中脂联素m RNA的低表达是新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病发生的危险因素之一。

细胞外液酸碱度改变对自发性高血压大鼠脑动脉平滑肌细胞电生理特性的影响

目的:探讨细胞外液酸碱度(pHo)的改变对自发性高血压大鼠(SHR)脑动脉平滑肌细胞电生理特性的影响。方法:取200~250 g自发性高血压大鼠,应用全细胞膜片钳记录技术观察细胞外液酸碱度改变后对SHR脑动脉平滑肌细胞膜电流的作用,进一步揭示其离子机制。结果:①pHo酸化可电压依赖性的抑制SHR脑动脉平滑肌细胞的外向电流。其主要抑制SHR脑动脉平滑肌细胞0^+60 mV区间的电流幅度;②1 mmol/L TEA可以有效抑制pHo酸化对脑动脉平滑肌细胞外向电流的抑制作用。结论:pHo的改变引起SHR脑动脉平滑肌细胞外向电流变化,其可能与电压依赖性的抑制SHR脑动脉平滑肌细胞BKCa通道电流有关。

缝隙连接在血管内皮和平滑肌细胞中的作用及其与高血压的关系

细胞间的直接通讯——缝隙连接在控制和协调血管功能方面起重要作用。缝隙连接是沟通相邻细胞质膜的唯一一类通道,为离子、小分子代谢物质、第二信使等细胞间信号分子的直接交换提供一个通道。血管内皮细胞和平滑肌细胞表达多种类型缝隙连接蛋白(connexin,Cx),多种Cx在心血管系统中的共同表达并协调一致地工作,对心血管系统的发育、平滑肌和内皮细胞功能的整合、以及对血管壁细胞功能协调等起着重要作用。在血管发生疾病时Cx表达相应发生改变,以与缝隙连接调节血管紧张度和动脉血压的作用相一致。本综述讨论了在血管内皮和平滑肌细胞在生理和病理情况下(以高血压为例)缝隙连接对血管结构和功能的影响。

转录因子KLF7高表达与前列腺癌发生的相关性及其靶基因预测

目的探讨KLF7高表达与前列腺癌(PCa)发生的相关性,并对其可能的下游靶基因进行筛选。方法比较前列腺增生(BPH)患者(n=22)以及PCa患者(n=30)血糖、血脂及一般资料的差异;调取石蜡包埋的前列腺组织标本,运用免疫组织化学法检测组织中KLF7及其下游因子IL-6,以及肿瘤发生相关因子E-钙粘蛋白、Ki67的表达量。运用统计学方法,比较各因子在BPH和PCa患者前列腺组织中的表达差异,并分析KLF7表达与各因子之间的相关性。运用Cistrome Data Browser数据库对KLF7可能的下游靶基因进行预测。结果 PCa患者血清中总前列腺特异性抗原(TPSA)含量显著高于正常体检及BPH个体(P<0.001);PCa患者前列腺组织中KLF7及IL-6表达量显著高于BPH患者前列腺组织(P<0.05),肿瘤发生相关因子Ki67表达量显著高于BPH患者前列腺组织(P<0.05),E-钙粘蛋白的表达量在两组间无显著差异。相关性分析结果显示:前列腺癌组织中KLF7的表达与患者血清中TPSA含量显著正相关(r=0.465,P=0.001),与癌组织中IL-6的表达显著正相关(r=0.437,P=0.014),与癌组织中Ki67的表达显著正相关(r=0.434,P=0.002),与癌组织中E-钙粘蛋白的表达显著正相关(r=0.473,P=0.009)。生物信息学分析结果显示:转录因子KLF7可能通过调控肿瘤相关基因STAT3,DDX20,ZNF233,ZNF581,ZNF487,ZNF580,ZNF391,ZNF793,HMGB1,DMAP1,CTNNB1,ZBTB45等参与肿瘤的发生发展。结论 KLF7高表达可能是前列腺癌发生的危险因素,前列腺癌组织中KLF7的表达与IL-6、Ki67以及E-钙粘蛋白的表达显著正相关。KLF7可能通过调控一系列肿瘤相关基因的表达参与肿瘤发生发展的过程。

miR-203的表达与新疆哈萨克族食管鳞癌关系的探讨

为了探讨miR-203在食管鳞癌组织(ESCC)和食管癌旁组织(NCAT)中的表达情况及其与甲基化状态的关系,从而进一步了解ESCC的发生和发展,应用原位杂交方法检测54例ESCC和30例NCAT中miR-203表达及细胞定位。结果表明:(1)miR-203的表达率在ESCC为37.0%,低于NCAT的表达率60.0%,二者间差异有统计学意义(χ2=4.105,P<0.05);(2)miR-203的低表达可能与甲基化相关;(3)miR-203的表达可能与ESCC的浸润深度相关。结论:建立了一种检测miR-203表达的方法。miR-203在ESCC中的表达降低可能是由于甲基化引起,为以后研究食管癌致病机制打下实验基础。

C17∶0激活GPR40受体的作用及信号转导分子机制研究

目的研究长链脂肪酸C17∶0对GPR40受体的激活作用,并探讨其介导的信号转导分子机制。方法在体外培养HEK293T细胞的基础上,免疫荧光结合共聚焦显微镜检测受体膜定位和内吞情况;通过多功能酶标仪检测Ca^(2+)流的强弱;Western Blot检测ERK1/2的磷酸化水平。结果免疫荧光结果显示:C17∶0可通过招募β-arrestin 2介导GPR40内吞;胞内Ca^(2+)动员检测结果证实:长链脂肪酸C17∶0可作用于GPR40引起胞内Ca^(2+)浓度升高;Western Blot结果显示:C17∶0可作用于GPR40诱导ERK1/2磷酸化。结论C17∶0是GPR40的内源性配体,通过激活Gaq和Gai/o蛋白介导的信号通路,引起胞内Ca^(2+)动员及ERK1/2的磷酸化。

紫草素通过调控ERK1/2-NF-κB通路改善2型糖尿病小鼠肝损伤

目的本研究利用网络药理学及分子对接技术,探究紫草素改善2型糖尿病(T2DM)小鼠肝损伤靶点及机制。方法利用靶点数据库及疾病数据库挖掘紫草素药物靶点及T2DM肝损伤疾病靶点,韦恩交集法收集紫草素-T2DM肝损伤的共有靶点,String数据库构建蛋白互作(PPI)网络,Glue-GO及Metascape数据库分析Biological Process及KEGG。AutoDock进行分子对接。ELISA检测血清丙二醛(MDA)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)含量,HE染色观察肝脏形态,Q-PCR检测炎症因子及抗氧化酶基因表达,Western blot检测细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)、NF-κB等蛋白表达。结果紫草素与T2DM肝损伤的共有靶点105个,36%共有靶点富集在“regulation of inflammatory response”生物学过程,KEGG信号通路主要涉及“AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications”等炎症通路。紫草素与ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、蛋白激酶B(AKT)有较好的对接活性。体内动物实验结果显示,与模型组相比,紫草素显著减少肝脏组织炎性颗粒细胞浸润,抑制脂质空泡形成,减少血清MDA、AST、ALT含量(P<0.05),上调SOD1、SOD2、CAT抗氧化酶基因表达(P<0.05),下调p-ERK1/2/ERK1/2、p-NF-κB/NF-κB及IL-1β等炎症因子表达(P<0.01)。结论紫草素能通过增加抗氧化酶基因表达及抑制ERK1/2-NF-κB信号通路改善T2DM肝损伤。

脂肪酸通过内质网应激促进脂肪细胞miR-4431表达及释放的作用及机制研究

目的探讨棕榈酸(Palmitic acid,PA)对脂肪细胞内质网应激,以及对miR-4431表达及释放水平的影响,阐明肥胖后microRNAs表达及释放水平变化的可能分子机制。方法收集正常(n=6)及肥胖受试个体(n=6)腹部脂肪组织样本,qRT-PCR检测内质网应激标志物PERK、IRE1α、ATF6及miR-4431的表达水平。构建饮食诱导的肥胖小鼠模型,动态监测小鼠体重,评价小鼠葡萄糖耐量及胰岛素耐量,qRT-PCR检测小鼠附睾脂肪组织中PERK、IRE1α、ATF6、miR-4431的表达水平及血清中miR-4431的释放水平。体外培养小鼠胚胎成纤维细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞后,使用200μmol·L^(-1)及500μmol·L^(-1)PA处理,qRT-PCR检测细胞PERK、IRE1α、ATF6及miR-4431表达水平及细胞培养上清液中miR-4431的释放水平。运用生物信息学数据库TransmiR和hTFtarget分析预测miR-4431上游的转录调控网络。结果(1)肥胖受试个体脂肪组织中内质网应激标志物PERK、IRE1α、ATF6及miR-4431的表达水平显著高于正常体重受试个体(P<0.05),且miR-4431表达水平与受试个体血糖及脂肪组织中PERK、IRE1α、ATF6的表达水平呈正相关;(2)同普通饮食对照组小鼠相比,高脂饮食喂养的肥胖小鼠血糖水平显著升高、葡萄糖耐量及胰岛素敏感性受损(P<0.05),附睾脂肪组织中内质网应激标志物PERK、IRE1α、ATF6、miR-4431的表达水平显著升高;同时小鼠血清中miR-4431含量显著增加(P<0.05),且与小鼠血糖、内质网应激标志物PERK、IRE1α、ATF6的表达水平正相关;(3)使用不同浓度PA处理诱导分化成熟的脂肪细胞后,细胞中PERK、IRE1α、ATF6、miR-4431的表达水平及上清中miR-4431含量均显著高于对照组(P<0.05)。(4)内质网应激相关转录因子参与了miR-4431的表达调控。结论肥胖后脂肪组织内质网应激可能是miR-4431表达增加的重要原因;高浓度棕榈酸可诱发脂肪细胞内质网应激,并促进miR-4431的表达及释放。

结核分枝杆菌Hsp16.3对感染巨噬细胞凋亡的影响

为研究结核分枝杆菌Hsp16.3对感染巨噬细胞凋亡的影响。分别用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(H37Rv)、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株Hsp16.3基因缺失突变株(△H37Rv)、卡介苗(BCG)和卡介苗Hsp16.3基因缺失突变株(△BCG)感染RAW264.7巨噬细胞株,使用流式细胞技术于感染1、3、6及12h检测各组感染巨噬细胞的凋亡率,并分析其变化。结果显示,巨噬细胞感染结核分枝杆菌后凋亡率升高,其中在感染1、3、12h,BCG组与H37Rv组比较差异具有统计学意义(P<0.05);在感染1、3h,△BCG组与△H37Rv组比较差异具有统计学意义(P<0.05);在感染3、6、12h,△H37Rv组与H37Rv组比较差异具有统计学意义(P<0.05),△BCG组与BCG组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。由此可知,结核分枝杆菌Hsp16.3可抑制感染巨噬细胞的凋亡。

抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)淀粉分支酶SBEⅡa和SBEⅡb基因多态性分析

【目的】克隆抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)中淀粉合成酶关键基因SBEⅡa和SBEⅡb进行多态性分析,从分子水平阐述不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。【方法】根据Gene Bank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)和SBEⅡb(AY740401.1)基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡa和SBEⅡb基因序列,利用Clustal.W进行测序结果的比对分析,NCBI Conserved domain和inte Pro在线网站对SBEⅡa和SBEⅡb氨基酸序列进行结构域预测,寻找影响抗性淀粉含量的主效基因位点。【结果】克隆了SBEⅡa(2 471 bp)、SBEⅡb(2 510 bp)基因ORF(open reading frame,ORF)全长。序列分析表明:SBEⅡa、SBEⅡb基因与公布的序列同源性分别为98.64%和99.07%。【结论】SBEⅡa基因ORF的三个结构域中未发现影响籽粒抗性淀粉含量的候选差异位点。在SBEⅡb基因编码区羧基C-末端的3个候选差异位点和α-淀粉催化酶结构域的1个候选差异位点可能是造成小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。SBEⅡa、SBEⅡb氨基N-末端前面序列中共计10个单碱基变异作为潜在差异位点,也可能参与SBE基因的表达。

人食管鳞癌Eca109细胞株中肿瘤干细胞的分离与鉴定

为分离富集人食管鳞癌Eca109细胞株中肿瘤干细胞,并对其"干细胞"特性进行鉴定。采用无血清(DMEM/F12 1∶1,无血清)成球培养法获得细胞球,应用免疫荧光细胞化学技术检测Eca109细胞株中细胞球细胞中干性相关转录因子的表达;平板克隆和MTT法检测细胞体外增殖情况;Transwell小室法检测其细胞侵袭能力。结果显示,无血清培养4 d获得Eca109细胞球;P75NTR和Oct-4荧光定位于细胞球细胞的细胞核上,Eca109细胞为细胞核和细胞浆表达,但是Oct-4荧光强度比P75NTR弱;MTT法测增殖显示细胞细胞球增殖率明显高于Eca109细胞,差异有统计学意义(P<0.001);平板克隆实验显示细胞球细胞形成克隆团数高于Eca109细胞;Transwell小室法结果显示细胞球细胞侵袭力高于Eca109细胞。由此可知,食管鳞癌Eca109细胞系通过无血清成球培养法获得细胞球,细胞球存在肿瘤干细胞。

18β-甘草次酸对豚鼠微动脉平滑肌细胞BKCa通道的增强作用

本研究应用全细胞膜片钳技术在离体豚鼠小脑前下动脉(AICA)和肠系膜动脉(MA)的平滑肌细胞上,观察300μmol/L 18β-甘草次酸(18βGA)对微动脉平滑肌细胞膜电流的影响。结果显示:(1)18βGA能够增强微动脉平滑肌细胞外向电流,300μmol/L 18βGA使AICA和MA平滑肌细胞外向电流(+40mV)分别从234±36pA和154±25pA增强到376±41pA(n=8,P<0.05)和348±45pA(n=11,P<0.01)。18βGA增强微动脉平滑肌细胞外向电流具有电压依赖性,18βGA主要增强0～+40mV电压区间的激活电流,其中对+40mV阶跃电压激活电流的作用最强。(2)300μmol/L 18βGA的净电流与10mmol/L TEA和50nmol/L ChTX相似,与1mmol/L 4-AP不同。预灌流10mmol/L TEA后300μmol/L 18βGA对微动脉平滑肌细胞外向电流的增强作用完全消失。上述结果提示300μmol/L 18βGA能够电压依赖的增强豚鼠AICA和MA微动脉平滑肌细胞BKCa通道电流。