关注寄生虫在布鲁菌病传播中的作用

布鲁菌病是世界分布最广泛的人兽共患传染病。布鲁菌病主要通过水平传播（如性行为、排泄物或分泌物的污染等）感染。近年，有关寄生虫（如线虫、虱、蜱）在布鲁菌病的传播中的作用有少量报道，为此，文中结合国内外这方面的一些研究报道，重点阐述寄生虫在布鲁菌病传播中的作用，以引起广大布鲁菌病研究者的关注。

布鲁杆菌M5-90△bp26基因缺失株的构建与免疫原性的比较研究

目的构建布鲁杆菌M5-90△bp26基因缺失株，对比观察其免疫原性与M5—90亲本株的区别，研制毒力弱、安全性能好并能进行鉴别诊断的布鲁杆菌弱毒候选苗。方法利用常规分子生物学技术构建布鲁杆菌M5-90△bp26基因缺失株并进行遗传稳定性检测和常规细菌学性质鉴定；用1．0×10^9CFU／2Inl剂量的M5—90亲本株和M5-90△bp26基因缺失株分别免疫绵羊，所得血清与纯化的BP26蛋白进行Westernblot免疫印迹实验，比较M5—90Abp26基因缺失株与M5—90亲本株在体液免疫中对BP26蛋白识别上的差异；用试管凝集试验（SAT）检测受试绵羊不同时期（0、7、14、21、30、45d）的血清效价；安全性试验用1．0×10^6、6．0×10^6、2．0×10^7CFU／O．2ml的M5-90亲本株和M5-90△bp26基因缺失株分别免疫接种小鼠，观察、记录小鼠接种疫苗后的临床症状和死亡情况，比较二者的毒力。结果遗传稳定性检测M5—90亲本株PCR扩增出长度约1279bp的片段，而2—15代的M5-90△bp26基因缺失株扩增出长度约629bp的片段，后者测序结果表明出现bp26基因650bp的缺失；常规细菌学性质鉴定结果，M5-90△bp26由M5—90亲本株的单因子血清试验M型转变为R型，BK2噬菌体裂解实验由阳性转变为阴性，鉴定为深度变异菌株；Westernblot免疫印迹实验表明M5—90△bp26基因缺失株免疫绵羊所获得的血清与纯化的BP26蛋白不发生反应，而M5—90亲本株可发生反应；STA试验表明M5-90△bp26基因缺失株诱导绵羊产生抗体水平（1：50）明显低于M5—90亲本株（〉1：800）；安全性试验表明M5-90△bp26基因缺失株毒力比M5—90亲本株明显减弱。结论成功构建M5-90△bp26基因缺失株。与M5-90亲本株比较，M5-90△bp26基因缺失株具有毒力弱、能区分自然感染与疫苗免疫的特点，可作为标记疫苗的候选株。

布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspA、BspF的原核表达及布鲁菌免疫逃逸分析

目的克隆并表达布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BspA、BspF并推测其免疫逃逸机制。方法以羊种布鲁菌16M基因组为模板，利用PCR扩增布鲁菌分泌蛋白BspA（BAB1-0678）、BspF（BAB1-1948）基因，连接质粒pMD19-T后测序，将测序正确的基因片段经双酶切后克隆至pET-30a（＋）载体中，转化大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS—PAGE）和蛋白质免疫印迹（Western blot）分析鉴定表达产物；并与先天性免疫分子的蛋白序列进行比对分析。结果成功克隆了BspA、BspF基因，片段大小分别为576、1287bp；SDS—PAGE显示，BspA、BspF蛋白相对分子质量分别约为28×10^3、55×10^3；Western blot分析显示，BspA、BspF蛋白均可与布鲁菌阳性血清发生特异性反应，并且与先天性免疫分子白细胞介素1R（IL-1R）、髓样细胞分化因子88（MyD88）、Toll样受体2（TLR-2）、Toll样受体4（TLR-4）、单免疫球蛋白白介素1相关受体（SIGIRR）有同源性。结论成功获得了布鲁菌BspA、BspF蛋白，通过同源性分析，证明BspA、BspF蛋白在布鲁菌感染宿主过程中具有免疫逃逸的作用。研究结果为进一步研究布鲁菌的致病机制和揭示布鲁菌免疫逃逸机制提供了理论依据。