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18β-甘草次酸对Wistar大鼠和自发性高血压大鼠脑微动脉平滑肌细胞缝隙连接的影响 被引量:6
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作者 陈新燕 司军强 +4 位作者 李丽 赵磊 魏丽丽 蒋学伟 马克涛 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 2013年第3期251-254,共4页
目的:本研究比较正常血压Wistar大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)脑微动脉段平滑肌细胞电生理学及偶联力的异同,并观察18β-甘草次酸(18β-GA)对脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接的影响。方法:去除脑微动脉段外层结缔组织后,应用全细胞膜片钳技... 目的:本研究比较正常血压Wistar大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)脑微动脉段平滑肌细胞电生理学及偶联力的异同,并观察18β-甘草次酸(18β-GA)对脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接的影响。方法:去除脑微动脉段外层结缔组织后,应用全细胞膜片钳技术,观察18β-甘草次酸对Wistar大鼠和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞膜电容(Cinput)、膜电导(Ginput)和膜电阻(Rinput)的影响。结果:①SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput高于Wistar大鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。②18β-GA可以浓度依赖性的降低脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput(或者增加Rinput)。18β-GA抑制Wistar大鼠和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞Ginput的IC50分别为1.7和2.0μmol/L,差异无统计学意义(P>0.05)。18β-GA浓度≥100μmol/L时,Wistar大鼠和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput、Ginput或Rinput与单个平滑肌细胞十分接近。结论:SHR脑动脉平滑肌细胞间缝隙连接耦联力增强。18β-GA可以浓度依赖抑制Wistar大鼠和SHR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接,对两种大鼠的抑制效力相似。18β-GA的浓度≥100μmol/L时可以完全阻断脑微动脉平滑肌细胞间的缝隙连接。 展开更多
关键词 自发性高血压大鼠 脑微动脉 18Β-甘草次酸 缝隙连接 平滑肌细胞
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STIM2、TRPC3在人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流和NO生成中的作用 被引量:3
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作者 王静 钟华 +4 位作者 赵慧 王腊梅 庞丽娟 孙志萍 何芳 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期327-332,I0001,共7页
目的:研究Ca2+感受蛋白基质相互作用分子2(STIM2)及瞬时型感受器电位3(TRPC3)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流和NO生成中的作用。方法:1免疫荧光技术检测HUVEC中STIM2和TRPC3的蛋白表达。2利用转染技术将构建... 目的:研究Ca2+感受蛋白基质相互作用分子2(STIM2)及瞬时型感受器电位3(TRPC3)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流和NO生成中的作用。方法:1免疫荧光技术检测HUVEC中STIM2和TRPC3的蛋白表达。2利用转染技术将构建的STIM2干扰质粒(STIM2shRNA)和TRPC3干扰质粒(TRPC3shRNA)分别转染入HUVEC,实时定量RT-PCR和Western blot检测STIM2shRNA、TRPC3shRNA转染后的抑制效率。3取2~5代细胞随机分组:实验组(即精胺+Ca2++shSTIM2-002组和精胺+Ca2++shTRPC3-004组),其余两组分别为对照组(Control组,即精胺+Ca2+组),空质粒组(Vehicle组,即精胺+Ca2++Vehicle组),分别将上述4组细胞与CaR激动剂孵育,各组用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步测定[Ca2+]i和NO生成的变化。结果:1免疫荧光技术检测显示STIM2和TRPC3两者均表达于HUVEC胞浆。2实时定量RT-PCR及Western blot检测结果显示:与Control组相比,shSTIM2-002和shTRPC3-004干扰后,STIM2和TRPC3mRNA的表达均明显降低(抑制率分别为88.2%和74.0%,P<0.05);STIM2和TRPC3蛋白的表达亦明显降低(抑制率分别为79.9%和71.8%)(P<0.05)。3[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值的测定结果显示:与精胺+Ca2+组的[Ca2+]i、NO净荧光强度值相比,精胺+Ca2++ShSTIM2-002组、精胺+Ca2++ShTRPC3-004组及精胺+Ca2++Vehicle组均无显著差异(均P>0.05)。结论:STIM2和TRPC3均未单独参与CaR介导的Ca2+内流和NO的生成过程。 展开更多
关键词 Ca2+感受蛋白基质相互作用分子2 瞬时型感受器电位3 一氧化氮 钙离子 人脐静脉内皮细胞
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Orai2参与了HUVEC外钙敏感受体介导的Ca^(2+)内流和NO生成 被引量:2
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作者 王腊梅 钟华 +4 位作者 赵慧 王静 庞丽娟 孙志萍 何芳 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第5期595-601,共7页
目的研究钙释放激活的钙调素2(Orai2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用。方法 1)用转染技术将构建的Orai2干扰质粒(Orai2shRNA)转染入HUVEC,用实时定量RT-PCR和Western blot检测O... 目的研究钙释放激活的钙调素2(Orai2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用。方法 1)用转染技术将构建的Orai2干扰质粒(Orai2shRNA)转染入HUVEC,用实时定量RT-PCR和Western blot检测Orai2 mRNA和蛋白的表达。2)取2~5代HUVEC,分别以精胺激活CaR(钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活)、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231(激活ROC及阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(阻断ROC及激活SOC)为细胞模型。实验分为3组:特异性质粒转染组(Orai2shRNA组),未转染组(空白对照组),空质粒组(vehicle组),用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO的生成。结果 1)与control组相比,shOrai2-71干扰后,Orai2 mRNA和蛋白的表达均明显降低,抑制率分别为75.75%和70.58%(P<0.05)。2)与对照组和空质粒组相比,在4种不同处理因素作用下,Orai2shRNA转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05)。结论 Orai2参与了HUVEC中CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成。 展开更多
关键词 Orai2 一氧化氮 钙离子 人脐静脉内皮细胞
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As_2O_3联合γ分泌酶抑制剂MW167对人肝癌HepG_2/ADM细胞耐药性的影响 被引量:1
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作者 杨莉 王雪雯 +1 位作者 周明 张帆 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期1-7,共7页
目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)和γ分泌酶抑制剂MW167单独及联合作用对HepG_2/ADM细胞耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度As_2O_3(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00mg·L-1)和MW167(10、20和40μmol·L... 目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)和γ分泌酶抑制剂MW167单独及联合作用对HepG_2/ADM细胞耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度As_2O_3(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00mg·L-1)和MW167(10、20和40μmol·L-1)处理HepG_2/ADM细胞24、48和72h后细胞的吸光度(A)值,计算细胞增殖抑制率,确定药物作用浓度和时间;将HepG_2/ADM细胞分为空白组、As_2O_3组、MW167组、As_2O_3和MW167联合组;根据MTT结果选取无细胞毒剂量的As_2O_3、MW167干预各组细胞48h后,FCM法检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)、Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达水平。结果:在同一浓度时,As_2O_3和MW167对HepG_2/ADM细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长而升高(P<0.05或P<0.01);在同一时间点,As_2O_3和MW167对HepG_2/ADM细胞的增殖抑制率随药物浓度的增加而升高(P<0.05);确定As_2O_3和MW167的无毒剂量分别为0.25mg·L-1和10μmol·L-1,干预时间为48h。药物干预48h后,与空白组比较,各干预组细胞凋亡率均升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显(P<0.01)。与空白组比较,各干预组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)和Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),其中以联合组降低最为明显(P<0.01);与空白组比较,各干预组Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显(P<0.01)。结论:As_2O_3可逆转HepG_2/ADM细胞的耐药性,其作用机制可能与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、下调细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)和Bcl-2基因及蛋白表达水平及上调Bax基因和蛋白表达水平有关。 展开更多
关键词 三氧化二砷 肝肿瘤 NOTCH信号通路 多药耐药 细胞凋亡 细胞增殖
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As_2O_3联合γ分泌酶抑制剂对HepG_2细胞凋亡的诱导作用及其机制 被引量:1
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作者 周明 王雪雯 +2 位作者 杨莉 宋海林 段晶晶 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期470-475,共6页
目的:探讨As2O3通过Notch信号通路对HepG2细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG2细胞分为空白组、As2O3组、MW167组和联合组;采用不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结果... 目的:探讨As2O3通过Notch信号通路对HepG2细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG2细胞分为空白组、As2O3组、MW167组和联合组;采用不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结果选取无细胞毒剂量As2O3和MW167(As2O30.25mg·L-1、MW167 10μmol·L-1)分组干预HepG2细胞48h;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法检测Notch-1、Bcl-2和Caspase-3mRNA和蛋白表达水平。结果:不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞均可抑制细胞增殖,呈剂量效应关系;无细胞毒剂量As2O3和MW167处理不同分组HepG2细胞48h后,与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞凋亡率升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显;与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞中Bcl-2、Notch-1mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),其中以联合组降低最为明显;与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞中Caspase-3mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显。结论:As2O3可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与通过Notch信号通路下调细胞中Bcl-2、Notch-1基因和蛋白表达水平以及上调细胞中Caspase-3基因和蛋白表达水平有关联。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 γ分泌酶抑制剂 三氧化二砷 细胞凋亡
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小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制 被引量:1
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作者 钟华 龚艳 +5 位作者 吴玲玲 赵慧 王静 孙志萍 邓峰美 何芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期577-583,共7页
目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2~3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激... 目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2~3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激动剂精胺(spermine)和负性变构调节剂Calhex 231。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)。Western blotting检测HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达,免疫共沉淀技术检测Cav-1和CaR相互作用。用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae,Western blotting检测caveolae的标志蛋白Cav-1和浮舰蛋白1(flotillin-1)及CaR表达。同时检测胞膜、胞浆和高尔基体标志蛋白:转铁蛋白受体(TfR)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-外被体蛋白(β-COP)。检测富含Cav-1膜(CEM)区、非caveolae I区(NCF I)和II区(NCF II)的Cav-1和CaR表达。结果:(1)细胞外液为含钙液时,Calhex 231完全阻断精胺刺激引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),MβCD可加强精胺升高[Ca2+]i的作用(P<0.05)。不同浓度MβCD处理后各组Cav-1和CaR相互作用的差异无统计学意义(P>0.05);(2)免疫共沉淀结果显示,各组Cav-1和CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05);(3)与control组比较,spermine+Ca2+组、filipin+spermine+Ca2+组和MβCD+spermine+Ca2+组CEM区的Cav-1和CaR蛋白表达均降低(P<0.05),NCF I区的Cav-1和CaR蛋白表达增加(P<0.05),NCF II区Cav-1蛋白表达增加(P<0.05),而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在HUVECs中,Cav-1和CaR共定位于同一caveolae区,同时Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1抑制CaR膜定位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关。 展开更多
关键词 小凹蛋白-1 人脐静脉内皮细胞 受体 钙敏感 钙信号
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钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用 被引量:1
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作者 王腊梅 钟华 +3 位作者 唐娜 庞丽娟 张春军 何芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1773-1780,共8页
目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受... 目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+Ca SR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs;利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位;免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用;取2~3代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(sh STIM1+sh Orai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组),将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激,采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca^(2+)浓度的变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果:STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆,与control组相比,加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后,STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少,且二者的相互作用均减弱;在4种不同处理因素作用下,sh STIM1+sh Orai1组细胞内Ca^(2+)浓度和NO净荧光强度均明显降低(P<0.05)。结论:STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节Ca SR,并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。 展开更多
关键词 基质相互作用分子1 钙释放激活钙通道蛋白1 钙敏感受体 一氧化氮
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吸烟与肥胖及胰岛素抵抗相关性的研究进展 被引量:5
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作者 陆环 张君 +2 位作者 徐文静 褚志华 谢建新 《农垦医学》 2009年第3期253-255,共3页
少量尼古丁可以增加能量消耗并且抑制食欲,致使体重下降。相反,过量吸烟者因饮食结构不合理或体力活动较少,而导致体重增加。此外,吸烟与向心性肥胖密切相关,从而使胰岛素抵抗的发生率升高,同时增加了发生代谢综合症和糖尿病的几率。本... 少量尼古丁可以增加能量消耗并且抑制食欲,致使体重下降。相反,过量吸烟者因饮食结构不合理或体力活动较少,而导致体重增加。此外,吸烟与向心性肥胖密切相关,从而使胰岛素抵抗的发生率升高,同时增加了发生代谢综合症和糖尿病的几率。本文就吸烟与肥胖及胰岛素抵抗相关性的研究进展加以综述。 展开更多
关键词 吸烟 肥胖 胰岛素抵抗
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KLF4、KLF7在大鼠网膜脂肪组织中的表达与炎症的相关性研究 被引量:6
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作者 王翠喆 哈晓丹 +5 位作者 李伟 许彭 顾雅娟 王淼 谢建新 张君 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期204-209,共6页
目的检测肥胖大鼠网膜脂肪组织KLF4及KLF7 m RNA表达水平,分析其与炎症的相关性。方法 Wistar健康雄性大鼠高脂喂养,诱导肥胖模型。高脂喂养后第4、10周检测大鼠血脂、血糖水平;ELISA法测定血浆中TNF-α、LPT、APN水平;10周后,q RT-PCR... 目的检测肥胖大鼠网膜脂肪组织KLF4及KLF7 m RNA表达水平,分析其与炎症的相关性。方法 Wistar健康雄性大鼠高脂喂养,诱导肥胖模型。高脂喂养后第4、10周检测大鼠血脂、血糖水平;ELISA法测定血浆中TNF-α、LPT、APN水平;10周后,q RT-PCR法检测网膜脂肪组织KLF4、KLF7及NF-κB炎症信号通路关键因子m RNA表达水平。结果高脂喂养4周后,实验组大鼠体质量开始显著高于对照组,第10周实验组大鼠体质量进入平台期,但仍高于对照组(P<0.05)。高脂喂养第4及第10周,实验组大鼠血浆FFA、Glu、TG、TC、LDL、TNF-α水平高于对照组,LPT、APN水平低于对照组(P<0.05)。网膜脂肪组织中,实验组TLR9、KLF4 m RNA表达水平低于对照组,KLF7、SRC和IL-6 m RNA表达水平高于对照组;TLR9与血浆FFA负相关,与KLF4正相关;KLF4与SRC、NF-κB负相关;KLF7与TLR4、SRC、NF-κB和IL-6正相关,与KLF4负相关(P<0.05)。结论肥胖状态下,高水平的FFA一方面可与TLR4结合上调KLF7表达,促进炎症因子表达,导致释放组织发生炎症;同时,可抑制TLR9水平而下调KLF4表达,减弱KLF4对炎症信号通路关键因子的抑制作用,从而促进炎症反应。 展开更多
关键词 肥胖大鼠 网膜脂肪组织 KLF4 KLF7 炎症
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KLF9和KLF15在维吾尔族网膜脂肪中的表达及其与炎症相关性分析 被引量:3
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作者 王翠喆 哈晓丹 +3 位作者 谢建新 许彭 李伟 张君 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1653-1656,1660,共5页
目的:检测维吾尔族网膜脂肪组织KLF9及KLF15 m RNA表达水平,分析KLF9、KLF15与炎症信号通路关键因子的相关性。方法:选取维吾尔族个体NC组50例、OB组45例,检测一般资料和生化指标。采集网膜脂肪组织,RT-PCR法检测KLF9、KLF15及NF-κB炎... 目的:检测维吾尔族网膜脂肪组织KLF9及KLF15 m RNA表达水平,分析KLF9、KLF15与炎症信号通路关键因子的相关性。方法:选取维吾尔族个体NC组50例、OB组45例,检测一般资料和生化指标。采集网膜脂肪组织,RT-PCR法检测KLF9、KLF15及NF-κB炎症信号通路关键因子m RNA表达水平。结果:OB组BMI、WC、HC、WHR、TG和LDL显著高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。维吾尔族网膜脂肪组织中,OB组NF-κB、TNF-α和IL-6 m RNA表达水平显著高于NC组(P<0.05),NF-κB m RNA表达与体重和TG显著正相关(P<0.05),TNF-αm RNA表达与TG和TC显著正相关(P<0.05),IL-6 m RNA表达与HC、TG和LDL显著正相关(P<0.05);OB组网膜脂肪组织KLF15 m RNA表达水平显著低于NC组(P<0.05),与BMI、WC、WHR显著负相关(P<0.05),与HDL正相关,与TG负相关。KLF9 m RNA表达水平高于NC组,与NF-κB显著正相关(P<0.01),与IL-6正相关。结论:KLF15可能通过调控脂代谢发挥抗炎作用;肥胖状态下脂代谢紊乱可能间接上调KLF9的表达,而KLF9作为转录激活因子可能通过调控下游炎症因子的转录活性,从而促进炎症因子的表达和释放。 展开更多
关键词 维吾尔族 网膜脂肪组织 KLF9 KLF15 炎症
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维吾尔族腹腔脂肪组织APN、TNF-α和MCP-1基因DNA甲基化及其mRNA表达与T2DM相关 被引量:1
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作者 王翠喆 哈晓丹 +4 位作者 李伟 许彭 王婷婷 谢建新 张君 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第12期1622-1627,共6页
目的探讨腹部脂肪组织APN、TNF-α和MCP-1基因启动子区DNA甲基化及mRNA表达水平与新疆维吾尔族T2DM发生发展的相关性。方法分别选择维吾尔族正常(NC)、肥胖(Ob)和2型糖尿病(T2DM)个体50例、48例和26例。收集腹部脂肪组织,变性高效液相... 目的探讨腹部脂肪组织APN、TNF-α和MCP-1基因启动子区DNA甲基化及mRNA表达水平与新疆维吾尔族T2DM发生发展的相关性。方法分别选择维吾尔族正常(NC)、肥胖(Ob)和2型糖尿病(T2DM)个体50例、48例和26例。收集腹部脂肪组织,变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测上述基因DNA甲基化,实时定量PCR(RTPCR)检测mRNA表达。结果比较NC、Ob及T2DM组间DNA甲基化阳性率,APN逐渐增加(P<0.05),TNF-α逐渐降低(P<0.01);NC组APN mRNA表达显著高于Ob及T2DM组,TNF-α和MCP-1均显著低于Ob及T2DM组(P<0.05)。APN mRNA表达与BMI、DBP、FPG、TG、LDL显著负相关(P<0.05)。TNF-αmRNA表达与BMI、FPG和TG显著正相关(P<0.05);MCP-1 mRNA表达与体质量、BMI和腰围显著正相关(P<0.05)。APN基因DNA甲基化与其mRNA表达显著负相关(P<0.01),与FPG、TC、TG和LDL显著正相关(P<0.05);TNF-α基因DNA甲基化与其mRNA表达、BMI、FPG、TC、TG和LDL显著负相关(P<0.05)。结论 APN、TNF-α和MCP-1在腹部脂肪组织差异表达可能是引起新疆维吾尔族人群肥胖和T2DM的原因;糖脂代谢紊乱可通过导致腹部脂肪组织APN和TNF-α甲基化水平变化而影响其mRNA表达水平。 展开更多
关键词 维吾尔族 T2DM 脂肪细胞因子 DNA甲基化
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RS102895通过阻断CCL2/CCR2通路抑制PC-3前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移 被引量:3
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作者 王竞州 陈柯茹 +4 位作者 李雪 杨冰琪 庞槐 王翠喆 张君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期781-787,共7页
目的探讨RS102895特异性拮抗CC趋化因子受体2(CCR2),对不同恶性程度前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法体外培养非雄激素依赖性PC-3前列腺癌细胞和雄激素依赖性22RV1前列腺癌细胞,设立空白对照组、重组CC趋化因子配体2(rCCL2)处理组、r... 目的探讨RS102895特异性拮抗CC趋化因子受体2(CCR2),对不同恶性程度前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法体外培养非雄激素依赖性PC-3前列腺癌细胞和雄激素依赖性22RV1前列腺癌细胞,设立空白对照组、重组CC趋化因子配体2(rCCL2)处理组、rCCL2联合RS102895处理组。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell^(TM)法检测细胞侵袭和迁移能力,实时定量PCR检测细胞KI-67抗原(ki67)与基质金属蛋白酶2(MMP2)的mRNA表达水平,Western blot法检测细胞ki67、MMP2的蛋白表达水平。结果与对照组相比,rCCL2处理能够显著增强PC-3细胞的增殖、侵袭及迁移能力,对22RV1细胞的增殖能力具有显著增强作用;同时,rCCL2处理可显著上调PC-3细胞中ki67和MMP2的mRNA及蛋白表达水平。RS102895处理后,可逆转rCCL2的以上作用。结论RS102895可通过特异性阻断PC-3前列腺癌细胞中CCL2/CCR2通路,下调ki67及MMP2的表达,抑制细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 RS102895 CC趋化因子配体2 CC趋化因子受体2 前列腺癌细胞 细胞增殖、侵袭及迁移
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SP110基因过表达对THP-1细胞体外抗结核杆菌作用的研究
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作者 贾鹏霞 刘丙雨 +4 位作者 李新月 张万江 程江 吴江东 马雅静 《农垦医学》 2020年第1期13-16,共4页
目的:观察SP110基因过表达对人单核巨噬细胞株THP-1生长状态的影响,探讨SP110基因过表达对THP-1体外杀伤结核分枝杆菌H37Ra作用的影响。方法:构建SP110基因过表达模型,体外感染结核分枝杆菌H37Ra,感染24h、96h后细胞裂解物细菌培养菌落... 目的:观察SP110基因过表达对人单核巨噬细胞株THP-1生长状态的影响,探讨SP110基因过表达对THP-1体外杀伤结核分枝杆菌H37Ra作用的影响。方法:构建SP110基因过表达模型,体外感染结核分枝杆菌H37Ra,感染24h、96h后细胞裂解物细菌培养菌落计数(CFU)的方法观察实验组细胞、对照组细胞抗结核分枝杆菌H37Ra感染活性。结果:在mRNA水平实验组细胞SP110基因获得高表达;MTT法检测未发现SP110基因的过表达对THP-1巨噬细胞的生长有显著的影响;体外抗分枝杆菌H37Ra显示H37Ra感染24h后实验组巨噬细胞裂解物CFU与对照组无差异,而感染96h后实验组CFU低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:SP110基因的过表达增强了巨噬细胞杀伤胞内吞噬的结核分枝杆菌H37Ra的能力,对巨噬细胞的增殖无抑制作用。 展开更多
关键词 SP110 慢病毒 结核杆菌 巨噬细胞
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自发性高血压大鼠和Wistar大鼠脑动脉Cx45表达的差异 被引量:4
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作者 李新芝 司军强 +4 位作者 陈新燕 庞丽娟 李丽 魏丽丽 马克涛 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第11期39-42,共4页
目的探讨脑动脉细胞间缝隙连接在高血压病中的变化。方法应用全细胞膜片钳、定量RT-PCR和Western blot技术,比较自发性高血压(SH)大鼠(n=30)和Wistar大鼠(n=30)脑动脉上缝隙连接耦联力,以及连接蛋白45(Cx45)在mRNA和蛋白水平的表达。结... 目的探讨脑动脉细胞间缝隙连接在高血压病中的变化。方法应用全细胞膜片钳、定量RT-PCR和Western blot技术,比较自发性高血压(SH)大鼠(n=30)和Wistar大鼠(n=30)脑动脉上缝隙连接耦联力,以及连接蛋白45(Cx45)在mRNA和蛋白水平的表达。结果①应用全细胞膜片钳技术发现,SH大鼠脑动脉平滑肌细胞膜电容和膜电导都明显高于正常Wistar大鼠(P<0.05),提示SH大鼠脑动脉平滑肌细胞间的缝隙连接耦联力增强。②应用定量RT-PCR技术发现,SH大鼠脑动脉Cx45 mRNA的表达升高(P<0.05)。③应用Western blot发现,SH大鼠脑动脉Cx45的蛋白表达升高(P<0.01)。结论 SH大鼠可能通过上调平滑肌细胞上Cx45的表达,增强脑动脉平滑肌细胞间缝隙连接通讯,保证血管的同步收缩。 展开更多
关键词 自发性高血压 大鼠 脑动脉 缝隙连接 连接蛋白 全细胞膜片钳技术
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新疆地区汉族高血压患者人巨细胞病毒gB基因型分析
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作者 唐娜 李佳蔚 +6 位作者 钟华 刘永敏 李新芝 魏丽丽 王腊梅 邓峰美 何芳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第12期1061-1067,共7页
目的调查新疆地区汉族人群及高血压患者人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株,研究其糖蛋白B(gB)基因型分布。方法采用病例-对照研究方法,采集300例高血压患者和200例非高血压(对照)中的HCMV活动性感染外周血标本。使用Real-time PCR、PC... 目的调查新疆地区汉族人群及高血压患者人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株,研究其糖蛋白B(gB)基因型分布。方法采用病例-对照研究方法,采集300例高血压患者和200例非高血压(对照)中的HCMV活动性感染外周血标本。使用Real-time PCR、PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及测序技术检测HCMV-DNA,鉴别gB基因型并构建进化树。结果 18例HCMV活动性感染患者中高血压患者占77.8%(14/18),健康对照组22.2%(4/18),差异有统计学意义(χ~2=5.556,P〈0.05)。汉族人群中存在4种gB基因型,其中gB1占5.6%(1/18),gB2占50%(9/18),gB1+2占38.9%(7/18),gB2+3占5.6%(1/18),差异有统计学意义(χ~2=11.333,P〈0.05);高血压患者中存在3种gB基因型,其中gB1占7.1%(1/14),gB2占57.1%(8/14),gB1+2占35.7%(5/14),差异无统计学意义(χ~2=4.069,P〉0.05)。男性高血压患者存在两种基因型,其中gB2占87.5%(7/8),混合基因型gB1+2占12.5%(1/8);女性高血压患者存在3种基因型,gB1和gB2各占16.7%(1/6),混合基因型gB1+2占66.7%(4/6)。男、女患者gB基因型分布差异有统计学意义(χ~2=6.725,P〈0.05)。生物信息学分析10例单一gB基因核苷酸序列差异性为0~3.9%,氨基酸序列差异性为0~3.8%。结论新疆地区汉族居民HCMV感染流行株gB基因型存在单一及混合gB基因型,人群以gB2型为主,高血压男性以gB2型为主,高血压女性以gB1+2型为主;尚未发现gB3和gB4型,该人群中单一gB基因序列变异不大。本研究中感染HCMV的高血压患者所占比例高于健康对照组,提示HCMV感染可能为新疆汉族人群高血压易感的诱因之一。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 原发性高血压 gB基因型
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肥胖、2型糖尿病过程中大鼠肝脏形态结构变化的比较 被引量:5
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作者 张君 褚志华 +4 位作者 陆环 徐文静 丁毓磊 杨丽 谢建新 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第12期2246-2248,F0003,共4页
目的:探讨在肥胖、糖尿病过程中大鼠肝脏形态结构的变化。方法:Wistar雄性大鼠,随机分为:普通饮食组,高脂饮食组,高脂饮食+链脲佐菌素组。第0周随机抽取6只大鼠处死后取肝脏进行石蜡包埋,HE染色,制成切片。在饲养过程中选取不同时间点,... 目的:探讨在肥胖、糖尿病过程中大鼠肝脏形态结构的变化。方法:Wistar雄性大鼠,随机分为:普通饮食组,高脂饮食组,高脂饮食+链脲佐菌素组。第0周随机抽取6只大鼠处死后取肝脏进行石蜡包埋,HE染色,制成切片。在饲养过程中选取不同时间点,各组随机处死2只大鼠,取肝脏进行石蜡包埋,HE染色,切片,镜下观察,比较各组差异。结果:与对照组相比,肥胖组大鼠肝脏组织中脂肪细胞数目增多、体积变大,随肥胖程度的增加而加剧,导致肝发生中、重度脂肪变性。肝细胞肿胀,肝窦间隙变窄,可见炎性细胞浸润增多,凋亡细胞增多。糖尿病组大鼠,肝脏组织中脂滴形成,出现大的脂囊。肝细胞出现细胞核固缩,凋亡细胞增多,有炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主,未见巨噬细胞增多。血管壁硬化、玻璃样变性。结论:在肥胖/糖尿病发生、发展过中,大鼠肝脏中有脂肪的异位储存(肝脂肪样变性),并伴随有炎性细胞的浸润。 展开更多
关键词 肥胖/糖尿病 肝脏 结构变化
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TNF-α基因308位点的SNP与新疆维吾尔族2型糖尿病的易感性的关系 被引量:3
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作者 褚志华 张君 +4 位作者 田世坤 袁红玲 徐文静 陆环 谢建新 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第6期1098-1100,1091,共4页
目的:研究TNF-α基因单核苷酸多态性(SNP)308G-A位点与新疆地区维吾尔族人2型糖尿病之间的关系。方法:以聚合酶链式反应--限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)技术,对120例2型糖尿病患者和120例正常对照者TNF-α基因308位点SNP多态性进行... 目的:研究TNF-α基因单核苷酸多态性(SNP)308G-A位点与新疆地区维吾尔族人2型糖尿病之间的关系。方法:以聚合酶链式反应--限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)技术,对120例2型糖尿病患者和120例正常对照者TNF-α基因308位点SNP多态性进行基因分型。采用酶联免疫法测定T2DM患者105例及正常对照98例血清TNF-α水平,利用统计学方法分析其影响因素。结果:SNP308多态性位点的基因型和等位基因频率在病例组和正常对照组中的分布存在差异,差异有统计学意义(P<0.05);正常对照组血清TNF-α水平为(26.30±15.54)pg/ml较汉族人群低,病例组为(29.89±14.48)pg/ml,病例组与对照组TNF-α水平无差异(p>0.05)。病例组血清TNF-α与FPG、TC、FINS、LDL-C、HOMA-IR呈显著负相关。结论:(1)TNF-α基因SNP308多态性位点与新疆地区维吾尔族人群2型糖尿病有明显相关性;(2)TNF-α水平在新疆维吾尔族糖尿病组与正常对照组之间差异无统计学意义。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子Α 2型糖尿病 新疆维吾尔族
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肥胖大鼠血浆中脂肪因子和骨代谢因子的相关性研究 被引量:2
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作者 李伟 王翠喆 +6 位作者 刘宗智 许彭 王婷婷 丁毓磊 王淼 谢建新 张君 《中国妇幼保健》 CAS 2015年第34期6108-6111,共4页
目的 探讨高脂诱导肥胖大鼠血脂、血糖及血浆中脂肪细胞因子水平与骨代谢因子的相关性。方法 5-6周龄Wistar健康雄性大鼠,随机分为普通饲料(对照组)和高脂饲料(实验组),连续喂养14周,诱导大鼠肥胖模型。分别于第0、4、6、8、10周每... 目的 探讨高脂诱导肥胖大鼠血脂、血糖及血浆中脂肪细胞因子水平与骨代谢因子的相关性。方法 5-6周龄Wistar健康雄性大鼠,随机分为普通饲料(对照组)和高脂饲料(实验组),连续喂养14周,诱导大鼠肥胖模型。分别于第0、4、6、8、10周每组选取8只,空腹麻醉后眼底静脉取血并分离血浆,测定血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、葡萄糖(Glu)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平;酶联免疫法测定血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子NF-κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)、瘦素(LPT)及脂联素(APN)水平。结果 喂养4周后,2组大鼠体重差异开始有统计学意义(P〈0.05),实验组显著高于对照组。至第10周,2组大鼠体重均进入平台期,体重不再增加,但2组差异仍有统计学意义(P〈0.01),实验组仍高于对照组。实验组大鼠血浆中Glu、FFA、TG、TC、LDL、TNF-α、RANKL、RANK、LPT水平始终高于对照组大鼠,而APN水平低于正常大鼠,差异有统计学意义(P〈0.05);大鼠血浆中骨代谢因子RANKL与TNF-α、FFA、TG显著正相关(r值分别为0.412、0.270、0.321,P值均〈0.05),RANK与TNF-α、FFA、TG及LPT显著正相关(r值分别为0.392、0.270、0.326,0.271,P值均〈0.05)。结论 肥胖状态下大鼠血脂代谢紊乱可通过影响脂肪细胞因子APN及LPT水平始动炎症发生,而炎症状态下高水平TNF-α通过影响RANKL及RANK导致骨代谢异常。 展开更多
关键词 肥胖 血脂 血糖 脂肪细胞因子 骨代谢因子
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钙敏感受体介导的人脐静脉内皮细胞钙内流及一氧化氮生成过程中TRPCI与STIM1的相互作用 被引量:1
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作者 王腊梅 钟华 +3 位作者 唐娜 庞丽娟 张春军 何芳 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期978-984,共7页
目的探讨经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)与基质相互作用分子1(STIM1)在钙敏感受体(CaR)介导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙离子(Ca2+)内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。 方法取华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产... 目的探讨经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)与基质相互作用分子1(STIM1)在钙敏感受体(CaR)介导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙离子(Ca2+)内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。 方法取华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科健康孕产妇剖宫产新生儿的新鲜脐带,原代培养HUVEC并传代。将所得HUVEC分别与CaR激动剂精胺[激活钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)]、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231(阻断SOC阻、激活ROC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(激活SOC、阻断ROC)共孵育。采用免疫荧光技术检测HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达,免疫共沉淀法检测TRPC1与STIM1之间的相互作用。取2~3代HUVEC进行分组,将构建的TRPC1、STIM1干扰质粒(shTRPC1、shSTIM1)联合转染HUVEC即shTRPC1+shSTIM1组 (实验组)、vehicle-shTRPC1+vehicle-shSTIM1组 (空质粒组)和对照组,将3组细胞分别加入上述4种不同的药物进行干预。采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVEC细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化,NO荧光探针DAF-FM负载方法同步检测HUVEC中NO生成的变化。 结果(1) HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达:激光共聚焦显微镜下观察,正常对照组HUVEC中TRPC1和STIM1蛋白的表达呈阳性,二者共定位于胞浆。Calhex231+TPA+精胺+Ca2+组、Ro31-8220+精胺+Ca2+组和Go6976+精胺+Ca2+组HUVEC中定位于胞浆中的TRPC1、STIM1均减少,二者结合也减少。(2) HUVEC中TRPC1与STIM1的相互作用:Calhex231+TPA+精胺+Ca2+组、Ro31-8220+精胺+Ca2+组和Go6976+精胺+Ca2+组STIM1/TRPC1和TRPC1/STIM1的相对比值的百分数分别为(25.98±2.17)%和(44.10±4.01)%、(20.85±1.01)%和(46.31±3.47)%、(23.88±2.05)%和(39.65±2.91)%,均明显低于对照组的(100.00±4.66)%和(100.00±6.40)%以及精胺+Ca2+组的(106.04±2.45)%和(107.78±2.66)%(P均〈0.05)。(3) 联合转染TRPC1与STIM1对4种不同药物诱导的HUVEC中[Ca2+]i和NO生成的影响:联合转染TRPC1与STIM1对4种不同药物诱导的HUVEC中[Ca2+]i两激发光荧光强度比的变化值(Δratio)和NO净荧光强度值的影响趋势是一致的,均为实验组[Ca2+]iΔratio值和NO净荧光强度值均明显低于对照组和空质粒组(P均〈0.05),而空质粒组与对照组比较二者差异均无统计学意义(P均〉0.05)。 结论TRPC1与STIM1以二元复合物的形式共同调节CaR介导HUVEC Ca2+内流及NO生成。 展开更多
关键词 内皮细胞 脐静脉 细胞内钙离子感觉蛋白质类 受体 钙敏感 一氧化氮
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解耦连蛋白在2型糖尿病及其并发症中作用 被引量:5
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作者 冯晓朋 谢建新 《中华实用诊断与治疗杂志》 2013年第6期526-527,共2页
解耦连蛋白2是线粒体内膜上一种阴离子载体蛋白,在体内分布广泛,有抑制氧应激、负调节β细胞分泌胰岛素、促进脂肪酸代谢的作用。解耦连蛋白2-866G/A基因多态性影响胰岛β细胞分泌功能,与2型糖尿病发病相关。本文对解耦连蛋白2在2型糖... 解耦连蛋白2是线粒体内膜上一种阴离子载体蛋白,在体内分布广泛,有抑制氧应激、负调节β细胞分泌胰岛素、促进脂肪酸代谢的作用。解耦连蛋白2-866G/A基因多态性影响胰岛β细胞分泌功能,与2型糖尿病发病相关。本文对解耦连蛋白2在2型糖尿病及其并发症中的作用作一综述。 展开更多
关键词 2型糖尿病 解耦连蛋白2 DNA多态性 糖尿病周围神经病变 糖尿病视网膜病变
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