新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系

为探讨新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系。收集46例新疆维吾尔族宫颈癌标本,采用基因测序方法检测C/EBPα第一外显子的突变,利用PCR扩增方法分析HPV16病毒的感染,进行统计学分析。结果发现C/EBPα第一外显子突变的患者HPV16病毒感染率高。且C/EBPα第一外显子突变的患者与未突变的患者的HPV16病毒的感染率存在显著性差异。McNemanr检验P<0.05双侧。由此可知,新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα基因第一外显子突变与HPV16病毒的感染相关。C/EBPα第一外显子突变可能是导致宫颈癌的一个重要因素。

WISP2基因在细胞核高表达对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨宫颈癌组织和细胞中WISP2(Wnt-1 inducible secreted protein 2)基因的表达情况并分析WISP2基因是否与HPV感染有关,检测WISP2基因在细胞核中高表达对宫颈癌细胞增殖以及迁移的影响。方法 采用正常宫颈组织37例、CIN(宫颈上皮内瘤变)组织27例及宫颈癌组织35例制作组织芯片,采用免疫组织化学染色(Immunohistochemical staining, IHC)对所收集样本中WISP2蛋白质表达情况进行分析。运用HC-2(第二代杂交俘获技术)检测所收集样本HPV(Human papillomavirus)感染情况。构建WISP2过表达质粒,实验组和对照组分别为过表达WISP2组和空质粒组(NC组)。Western blot实验和qRT-PCR实验分别检测目的基因在宫颈癌细胞中的表达水平;MTT实验和划痕实验分别对SiHa、HeLa细胞增殖能力以及迁移能力进行测定。结果 WISP2基因在宫颈癌细胞质与核内均有表达,且WISP2基因在CIN 3和宫颈癌组织的细胞质中低表达,在细胞核中高表达(P<0.05);WISP2基因表达与HPV感染具有相关性(P<0.05);WISP2基因在细胞核表达量升高后,细胞增殖、迁移能力均明显增强(P<0.05);WISP2基因细胞核中表达量的升高导致β-catenin、Vimentin、Slug蛋白质表达量升高,Claudin-1蛋白质表达量降低(P<0.05)。结论 WISP2在细胞核表达量增加对促进宫颈癌细胞增殖、迁移和EMT(Epithelial-mesenchymal transformation)的发生具有重要作用,WISP2基因细胞核中高表达可能是导致宫颈癌发生发展。

新疆维吾尔族妇女宫颈癌NKX6-1基因甲基化检测

为探讨NKX6-1基因启动子甲基化与HPV16感染在新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生中的作用。收集43例新疆维吾尔族妇女正常宫颈组织、30例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和48例宫颈癌组织。采用PCR方法检测HPV16感染;甲基化特异性PCR方法检测NKX6-1基因启动子区甲基化状况,并分析启动子甲基化与HPV16感染与宫颈癌的相关性。结果显示,正常宫颈组,CIN和宫颈癌组中的NKX6-1基因甲基化率分别为11.63%、46.67%和77.08%,差异有统计学意义(P<0.01);HPV16的感染率分别为13.95%,36.67%和66.66%,三组差异均有统计学意义(P<0.01)。NKX6-1甲基化与HPV16感染无显著相关性(P>0.05)。由此可知,NKX6-1基因启动子甲基化与HPV16感染无相关性,但与维吾尔族宫颈癌发生相关。

新疆地区妇女宫颈感染人乳头瘤病毒16型E1、E2的遗传变异分析

目的新疆是宫颈癌高发的地区之一,人乳头瘤病毒的基因变异可能会增加其感染人体的风险并增强该病毒介导的免疫逃逸能力,HPV(Human Papillomavirus)16 E1、E2是病毒在转录及复制过程中的重要蛋白质,E1、E2核苷酸位点的突变可能导致蛋白质的改变,从而影响宫颈癌的发生发展。方法收集80例HPV16感染阳性宫颈粘液样本,提取DNA后进行PCR扩增,将纯化后的PCR产物进行一代测序,并对E1、E2基因进行进化学分析,了解HPV16在新疆地区的基因多态性,统计病理信息分析相关突变位点与宫颈癌的进展关系。结果80个HPV16阳性样本中,E1发生突变的样本有34个,发生核苷酸突变的位点有25个,(11个错义突变,14个同义突变)。HPV16 E2发生突变的样本有53个,发生核苷酸突变的位点有14个,(11个错义突变,3个同义突变)。在HPV16 E1上常见的核苷酸突变位点为A978G(14/80)、G1473A(10/80)所对应的氨基酸改变为I326M、M491I,在HPV16 E2上常见的核苷酸突变位点为C2295A(14/80)、C2546T(20/80),所对应的氨基酸改变为T135K、P219S。结论由系统发育树结果可看出有77个样本属于欧洲株,3个样本属于亚洲株。没有发现非洲株和北美/亚裔株。

基于生物信息学分析EDIL3基因在宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨表皮生长因子样重复序列和盘状蛋白I样结构域3(EDIL3基因)在宫颈癌中表达及其对宫颈癌细胞SiHa、HeLa迁移的作用。方法运用GEPIA、UALCAN、OncoLnc数据库分析EDIL3基因mRNA在宫颈癌组织中的表达水平、基因启动子甲基化状态和预后的意义;采用免疫组织化学染色、Western blot、qRT-PCR分别检测宫颈癌组织和细胞中EDIL3蛋白及EDIL3基因mRNA表达水平;构建EDIL3-pcDNA3.1过表达质粒,转染分为实验组(转染过表达EDIL3-pcDNA3.1质粒)和对照组NC(转染空质粒),transwell实验检测宫颈癌细胞SiHa、HeLa的迁移。结果生物信息学数据库分析显示EDIL3基因mRNA在宫颈癌组织中低表达并且存在启动子高甲基化(P<0.05),在宫颈癌不同分期中EDIL3基因的表达无差异(P>0.05),EDIL3高表达与宫颈癌患者不良预后相关(P<0.05);免疫组织化学染色、Western blot、qRT-PCR与数据库分析结果一致,在宫颈癌组织和细胞中EDIL3基因均低表达(P<0.05),且其表达水平与HPV感染无明显相关性(P>0.05);Transwell实验显示过表达EDIL3后增强宫颈癌细胞SiHa、HeLa的迁移能力(P<0.05)。结论EDIL3基因在宫颈癌组织和细胞中低表达并不受HPV感染的影响,而EDIL3高表达影响患者预后且促进宫颈癌细胞SiHa、HeLa的迁移能力。

新疆维吾尔自治区妇女宫颈感染人乳头瘤病毒16型E4和L2的遗传变异分析

目的探讨人乳头瘤病毒16(HPV16)E4、L2基因变异及氨基酸变化,分析HPV16的进化特征。方法从医院收集40例HPV16感染阳性的宫颈脱落细胞样本和40例宫颈组织细胞样本,提取样本的病毒DNA,对40例宫颈脱落细胞的DNA进行HPV16 E4和L2 Sanger测序及对40例宫颈组织细胞DNA高通量测序,构建HPV16 E4和L2基因系统进化树,分析HPV16 E4和L2基因的变异特征。结果有72个HPV16 E4变异样本,10个核苷酸变异位点(4种错义变异和7种同义变异),74个HPV16 L2变异样本,40个核苷酸变异位点(23种错义变异和18种同义变异)。宫颈癌(CC)中T4177C、A4288C、A4654C变异频率明显高于非宫颈癌,差异有统计学意义(P<0.05)。结论①新疆维吾尔自治区主要流行病毒株为欧洲株,少数为亚洲株。②HPV16 L2基因中T4177C、A4288C、A4654C在宫颈癌中的变异频率高于非宫颈癌,且G4181A与亚洲株相关。

miR-181a靶向Bcl-2调控氧糖剥夺/再灌注模型诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡

目的皮层是响应脑缺血缺氧最为敏感的组织之一,基于前期深度测序技术,我们筛选获得响应脑缺血缺氧应激的皮层区目标基因miR-181a及Bcl-2。本研究旨在SH-SY5Y细胞株氧糖剥夺/复糖复氧模型验证二者靶向调控关系及功能,明确miR-181a—Bcl-2调控网络在OGD/R诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法采用线栓法构建大鼠缺血缺氧再灌注损伤模型,脑切片TTC染色及行为学评分法评估模型。应用qRT-PCR及Western Blot验证目标基因的表达。生物信息学分析miR-181a与Bcl-2的靶向结合位点并比对结合位点的保守性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181a与Bcl-2靶向结合的特异性。采用OGD/R细胞模型体外模拟脑缺血再灌注损伤,检测凋亡相关蛋白表达及Hoechst荧光染色评估细胞凋亡。结果大鼠大脑中动脉阻塞后miR-181a、Bcl-2表达变化趋势相反。RNA hybird软件预测miR-181a可结合Bcl-2的3′-UTR区,且结合区域高度保守。双荧光素酶报告基因实验发现,相对于Bcl-23′UTR-WT与mimic-NC共转染组,Bcl-23′UTR-WT与miR-181a mimic共转染后的荧光活性更低(P<0.001),而Bcl-2-Mut与miR-181a mimic共转染组,荧光活性无显著差异(P>0.05)。分别用miR-181a的模拟物及抑制物转染OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞,miR-181a可以抑制Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平(P<0.001)。过表达miR-181a显著增加了SH-SY5Y细胞的凋亡(P<0.001),而抑制miR-181a表达可使SH-SY5Y细胞凋亡显著降低(P<0.001)。结论miR-181a可靶向结合Bcl-2,下调miR-181a可通过促进Bcl-2的表达进而抑制SH-SY5Y神经细胞OGD/R损伤诱导的细胞凋亡。

HPV16 E6-295T/G和E6-350T/G变异位点影响IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的研究

目的探讨HPV16(Human Papillomavirus Type 16)E6-295T/G和E6-350T/G变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。方法在宫颈癌细胞C33A(HPV阴性)中分别转染真核表达载体295G/350G-GV230、295T/350G-GV230和295T/350T-GV230作为实验组,以NC-GV230作为对照组。通过免疫组织化学法、Western blot方法检测HPV16 E6295T/G、350T/G不同变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。通过IBM SPSS Statistics 26软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义,免疫组织化学法定量采用image J软件进行阳性细胞计数。结果Western blot结果显示,免疫分子干扰素κ(Interferon Kappa,IFNκ)的表达,HPV16 E6-295G/350G变异组较HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组降低(P<0.01,P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的免疫分子主要组织相容性复合体I类(Major Histocompatibility Complex Class I,MHC-I)的表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的信号转导子和转录激活子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,STAT1)表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05,P<0.01)。变异组HPV16 E6-295G/350G与HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G变异组相比,干扰素调节因子9(Interferon Regulatory Factor 9,IRF9)表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论HPV16病毒E6蛋白质可以降低IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9的蛋白质表达水平,E6基因T295G/T350G变异降低这些分子的表达作用最强。

LncRNA PVT1在胃癌中的研究进展

长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位体1(Long Non-Coding Ribonucleic Acid Plasmacytoma Variant Translocation 1,LncRNA PVT1)是一种在多种肿瘤中异常表达的LncRNA,与肿瘤的发生、侵袭、患者预后等密切相关。近年来,越来越多的研究表明LncRNA PVT1在胃癌中发挥重要作用。本文将聚焦于LncRNA PVT1在胃癌发生发展及治疗过程中的最新研究进展,探讨并展望其在胃癌的发展及治疗中的价值与可能性。

下调MSC p43抑制前脂肪细胞分化

为探讨多合成酶复合体蛋白43(multisynthetase complex protein 43,MSC p43)对前脂肪细胞分化的调节作用。建立了"cocktail"诱导剂处理3T3-L1细胞的分化模型;通过western bolt和q PCR法检测MSC p43在前脂肪细胞分化过程中的表达特征;利用RNA干扰技术下调MSC p43蛋白表达,并检测干扰对前脂肪细胞分化的影响;利用油红O染色法鉴定前脂肪细胞的成脂作用;通过qPCR法定量促成脂早期转录因子C/EBPβ、C/EBPδ,晚期转录因子C/EBPα、PPARγ及脂肪细胞特征性标记物Glut4、LDLR的表达。结果显示,MSC p43在前脂肪细胞分化早期(1-6d)高表达,随后(7 d以后)降低;下调该蛋白不影响C/EBPβ、C/EBPδ表达,但显著抑制C/EBPα及PPARγ表达,并降低诱导细胞的油红O染色水平及Glut4、LDLR表达。由此可知,下调MSC p43抑制前脂肪细胞3T3-L1的诱导分化,其作用机制是通过下调促成脂转录因子C/EBPα及PPARγ实现的。

TCP11基因在宫颈癌中表达的意义

目的探讨TCP11基因在宫颈癌组织和细胞中的表达水平以及与HPV感染、患者临床特征和预后之间的关系。方法运用UALCAN数据库及GEPIA数据库分析TCP11基因在宫颈癌中的表达及其与宫颈癌患者年龄和肿瘤分级的关系;运用The Human Protein Atlas(HPA)数据库、UALCAN数据库及Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)数据库分析TCP11基因的表达与宫颈癌患者生存率的关系;运用UALCAN数据库分析在宫颈癌中TCP11基因启动子甲基化状态。运用组织芯片分析TCP11基因在正常宫颈及宫颈癌组织中表达水平。利用第二代杂交捕获技术(HC-2)检测所收集样本HPV感染情况。体外培养HaCaT细胞(一种永生化的上皮细胞)及宫颈癌SiHa、HeLa、C33A细胞,利用Western blot、qRT-PCR分别检测宫颈癌细胞中TCP11蛋白和mRNA表达水平。结果运用HPA、UALCAN、GEPIA数据库分析发现TCP11基因在宫颈癌组织中高表达,且与宫颈癌患者生存率显著相关(P<0.05);TCP11基因表达与宫颈癌患者的年龄及肿瘤分级无显著相关性(P>0.05)。组织芯片结果统计发现TCP11基因在宫颈癌组织中高表达(P<0.05)。与HaCaT细胞相比,TCP11蛋白和mRNA在宫颈癌SiHa、HeLa、C33A细胞系中均显著升高(P<0.05)。HC-2结果显示TCP11基因的表达可能不受HPV感染的影响(P>0.05)。结论 TCP11基因在宫颈癌组织及细胞中高表达,其表达水平与患者预后相关且可能不受HPV感染的影响。

鸡胚背根神经节的摘取方法及培养条件的改进优化

探讨摘取鸡胚DRG的有效方法,并对培养条件进行优化,为神经营养因子突起鉴定奠定基础。根据鸡胚DRG的生长状态和解剖特点,采用分部摘取法摘取鸡胚DRG,利用NGF对不同部位的DRG进行鉴定,同时通过不同血清浓度、不同培养基及不同观察时间鸡胚DRG神经突起的生长状态,对培养条件进行优化。结果显示分部摘取法摘取鸡胚DRG提高了实验的可操作性和可重复性;综荐骨部的鸡胚DRG为实验最佳取材部位;无血清RPMI-1640培养基为最适神经突起生长鉴定培养基。

宫颈癌细胞中RNA干扰SNX 10基因对细胞增殖和凋亡影响的研究

目的探讨分拣蛋白SNX 10基因在宫颈癌组织及细胞中的表达水平及其与HPV感染的关系,探讨SNX 10基因对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响。方法采用组织芯片法分析SNX10蛋白在正常宫颈及宫颈癌组织中表达情况。设计SNX 10基因的ShRNA干扰片段分别转染宫颈癌SiHa细胞和HeLa细胞,实验组包括:转染Sh-SNX10-303和Sh-SNX10-647的细胞组,未转染的细胞和非干扰转染细胞(NC组)为对照组。Western blot及qRT-PCR方法检测SNX 10基因在宫颈癌细胞中蛋白质及mRNA表达水平,通过第二代杂交俘获技术(hybrid capture system-2,HC-2)检测宫颈组织中HPV感染情况,CCK-8实验检测细胞增殖情况,流式细胞术分析干扰SNX 10基因表达后细胞凋亡率的变化。结果组织芯片实验发现宫颈癌组织细胞中,SNX10基因高表达,差异显著(P<0.05);其表达与HPV感染尚未发现明显关联(P>0.05);在干扰SNX10基因的表达之后,宫颈癌SiHa和HeLa细胞的增殖受到抑制,并且其凋亡率也升高(P<0.05)。结论SNX10基因对HPV感染没有影响,但在宫颈癌组织和细胞中高表达,SNX10基因可能作为一个靶标用于宫颈癌的预防和治疗。

Kozak序列对nNOS基因表达及神经细胞分化的影响

为探讨Kozak调控序列对nNOS(neuronal nitric oxide synthase,神经型一氧化氮合酶)基因表达的影响,并验证其在神经细胞分化过程中的作用。构建了含有经典Kozak序列调控元件及野生型前导序列的人源nNOS表达载体;通过qPCR和western blot技术检测不同表达载体在SH-SY5Y细胞中的转录水平和翻译效率;利用SH-SY5Y神经细胞的诱导分化模型进一步验证不同的nNOS表达调控序列对于神经细胞分化的影响;通过测量和定量神经突起长度,结合q PCR法定量神经细胞分化关键标志物Tau和MAP2的表达来表征神经细胞分化程度。结果显示,经典Kozak调控元件(-3位A和G)和野生型前导序列(含-3位A)都能显著提高nNOS载体的表达效率,其中,野生型序列效率更高,但Kozak元件和野生型序列均不影响nNOS转录。在SH-SY5Y神经细胞分化模型中,Kozak元件也能促进分化进程,野生型序列的促分化作用最强。由此可知,通过对比不同调控序列,获得了以野生型序列引导的nNOS高效表达载体。Kozak元件对不同基因的调节效果差异较大,针对特定基因,有必要通过详细的对比实验确认最佳调控序列。

EIF4A1在胃癌组织中的表达及其沉默对胃癌细胞的增殖迁移的影响研究

目的 观察真核翻译起始因子4A1(eukaryotic translation initiation factor 4A1,EIF4A1)在胃癌组织中的表达以及沉默EIF4A1对人胃癌细胞株MGC-803增殖、迁移能力的影响。方法 免疫组织化学法检测EIF4A1在胃癌和癌旁组织中的表达,real time-PCR、Western Blot检测EIF4A1在胃癌细胞(MGC-803)和正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达。在胃癌细胞MGC-803中干扰EIF4A1的表达,采用real time-PCR检测EIF4A1 mRNA表达水平,Western Blot检测EIF4A1蛋白表达水平,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力,Western Blot检测E-cadherin, N-cadherin,基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase 2,MMP2)蛋白表达水平。结果 胃癌组织中EIF4A1的表达量(74.51%)高于癌旁组织(29.03%),胃癌细胞中EIF4A1的表达高于正常胃黏膜细胞,差异均具有统计学意义(P<0.05)。干扰EIF4A1后,实验组(si-EIF4A1)OD值低于对照组(si-NC),实验组平板克隆形成数为33.33±3.51,对照组为56.33±3.51,实验组穿膜细胞数为283.22±43.18,对照组354±88.43,以上结果差异均具有统计学意义(P<0.05)。Western Blot结果显示E-cadherin表达上调,N-cadherin、MMP2表达下调。结论 EIF4A1在胃癌中高表达并与胃癌细胞增殖密切相关,其可能通过EMT相关蛋白和MMP2介导肿瘤细胞迁移。

大鼠脑缺血再灌注损伤后脑皮层神经突起生长素(neuritin)表达变化的研究

本研究旨在探讨大鼠短暂性脑缺血损伤后不同时间点脑皮层中神经突起生长因子(neuritin)表达的变化规律,为研究neuritin在神经修复中的作用奠定基础数据。采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作TGI大鼠模型,按伤后不同时间分为3、7、14、21d组,用免疫印迹及定量PCR的方法检测大鼠脑皮层neuritin蛋白质及mRNA的表达,并分析其表达变化特点。免疫印迹结果显示:3d、21d实验组皮层neuritin的表达与对照组相比无明显变化;7d和14d实验组Neuritin蛋白表达量,显著高于3、21d和对照组。Neuritin mRNA定量PCR结果表明:与对照组相比,各实验组无明显变化。基于Neuritin mRNA和蛋白质的表达特点,推测可能通过某种转录后调控机制调控Neuritin蛋白表达的变化。TGI后,机体启动神经修复机制,Neuritin蛋白表达迅速升高,并维持两周较高水平的表达。当修复完成后Neuritin又恢复到正常水平。这种变化规律提示neuritin在神经损伤中可能具有重要的修复作用。

miR-34a-5p对KSHV感染的神经细胞增殖和迁移能力的影响

目的研究miR-34a-5p对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)感染的神经细胞增殖和迁移能力的影响。方法选择KSHV感染的SH-SY5Y神经细胞(SK-RG)和SH-SY5Y细胞,进行差异表达的miRNA转录组测序和生物信息学分析,通过qRT-PCR法验证SH-SY5Y、SK-RG中miR-34a-5p表达水平。采用Lipofectamine 2000分别将miR-34a-5p mimics与miR-NC转染至SK-RG细胞,qRT-PCR检测转染效果。采用MTT法及平板克隆实验检测细胞增殖能力。通过Transwell及划痕实验比较两组细胞的迁移能力。采用TargetScan分析miR-34a-5p与候选靶基因c-fos基因3'UTR区的结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-34a-5p和c-fos 3'UTR区的靶向调控关系以分析其作用机制。采用Western blot在转染miR-34a-5p mimics与miR-NC的细胞中检测靶基因c-fos的表达。结果转录组测序结果及qRT-PCR验证均提示,SK-RG细胞中miR-34a-5p的水平低于SH-SY5Y细胞(P<0.05)。于SK-RG细胞中过量表达miR-34a-5p后,MTT和平板克隆实验结果表明miR-34a-5p组细胞增殖能力低于miR-NC对照组(P<0.05)。Transwell和细胞划痕实验结果表明,miR-34a-5p组细胞迁移能力低于miR-NC对照组(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果提示miR-34a-5p可通过3'UTR区调控c-fos的表达。Western blot结果显示,miR-34a-5p可负向调控c-fos表达。结论miR-34a-5p可能通过抑制c-fos的表达而抑制KSHV感染的神经细胞的增殖和迁移能力,可能成为治疗KSHV感染相关疾病的小分子miRNA候选药物。

干扰FOS表达对KSHV感染的神经元细胞增殖的影响

目的探讨在卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma associated herpesvirus,KSHV)感染的神经元细胞中干扰FOS基因表达,对细胞增殖和KSHV病毒的影响。方法采用强力霉素和丁酸钠诱导islk.219细胞的病毒r KSHV.219进入裂解态并提取病毒,采用病毒提取液感染SH-SY5Y细胞,采用荧光显微镜观察GFP确定感染成功,采用real time-PCR检测KSHV感染与未感染SH-SY5Y细胞FOS基因的表达;构建FOS基因的干扰质粒;并与KSHV感染的SH-SY5Y细胞中干扰FOS的表达,采用real time-PCR和Western blot确定干扰效率,采用real time-PCR检测干扰与未干扰细胞中KSHV病毒因子LANA、RTA以及K8.1的mRNA表达情况,采用MTT法检测细胞增殖能力,PI染色结合流式细胞技术检测细胞周期;结果重组病毒r KSHV.219能够成功感染SH-SY5Y细胞,FOS基因在KSHV感染的SH-SY5Y细胞中表达上调(P<0.05);干扰FOS基因后,FOS基因的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);KSHV病毒因子LANA、RTA以及K8.1的mRNA表达水平均有降低(P<0.05);MTT结果提示,干扰FOS表达抑制了KSHV感染的SH-SY5Y细胞增殖(P<0.05);干扰48 h后感染细胞周期被阻滞在G0/G1期(P<0.05)。结论 KSHV能够感染神经元细胞SH-SY5Y,干扰FOS表达能抑制感染细胞的增殖,阻滞细胞周期G0/G1期的进程,靶向干扰FOS在KSHV感染引起的神经系统疾病的治疗中具有一定的价值。

一氧化氮对鱼藤酮诱导神经细胞损伤的调节作用

目的基于SH-SY5Y细胞,建立并优化鱼藤酮诱导的帕金森氏症细胞模型。方法一氧化氮是介导PD病变过程中多巴胺能神经元退变的主要影响因素之一,但采用试剂盒检测鱼藤酮刺激的细胞模型中并未检测到NO的明显改变,使用通用型及神经特异型一氧化氮合酶抑制剂L-NAME及7-NI,均未对鱼藤酮的毒性作用产生任何调节作用。为了研究NO对于鱼藤酮神经损伤模型的调节作用,我们加入了NO供体GSNO与鱼藤酮共处理细胞。结果NO的加入使SH-SY5Y神经细胞转为坏死样死亡形态。GSNO与鱼藤酮共处理与单纯鱼藤酮刺激相比,SHSY5Y细胞中的酪氨酸羟化酶蛋白含量及多巴胺水平降低更显著,细胞线粒体膜电位下调幅度更大,α-突触核蛋白有更显著的增加。结论GSNO的加入能更有效的模拟帕金森氏症中神经元退变的主要特征,是对鱼藤酮诱导模型的有益补充。

HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌中的分布及对IRF9的影响

目的分析HPV16 E6-295T/G、E7-647A/G多态性位点在子宫颈鳞状细胞癌、CIN1中的分布及其在维吾尔族与汉族之间分布的特点,探讨其对IRF9表达的影响。方法运用TCGA数据库及GEPIA数据库分析子宫颈癌组织中IRF9的表达及其与子宫颈癌肿瘤分级的关系;收集67例维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本、21例维吾尔族CIN1标本,68例汉族子宫颈鳞状细胞癌标本和28例汉族CIN1标本,从收集的标本中提取DNA,PCR扩增E6和E7基因,PCR产物纯化后测序。将HPV16感染阳性标本进行免疫组化检测。结果维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为31例(46.27%)和7例(10.45%),CIN1标本中变异均为7例(33.33%)。汉族子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295T/G、E7-647A/G变异分别为12例(17.65%)和37例(54.41%),CIN1变异分别为8例(28.57%)和13例(46.43%)。维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中E6-295T/G的变异率高于汉族,汉族子宫颈鳞状细胞癌中E7-647A/G的变异率高于维吾尔族,差异有统计学意义(P<0.05)。CIN1标本中两民族间E6-295T/G和E7-647A/G的变异,差异无显著性(P>0.05)。免疫组化结果显示,IRF9在子宫颈鳞状细胞癌中的表达高于CIN1(P<0.05),子宫颈鳞状细胞癌标本中E6-295G/E7-647A变异组IRF9的表达高于E6-295T/E7-647G变异组和E6-295T/E7-647A未变异组(P<0.05)。E6-295T/E7-647G变异组与E6-295T/E7-647A未变异组的IRF9蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。结论维吾尔族子宫颈鳞状细胞癌中HPV16 E6-295T/G变异高于汉族,汉族E7-647A/G变异高于维吾尔族。HPV16 E6-295T/G变异的子宫颈鳞状细胞癌组织中IRF9蛋白表达水平增高,可能在子宫颈癌的发生中起作用。