“双一流”医科院校建设背景下医学微生物与免疫学实验教学的优化探讨

"双一流"医科学校建设背景下,高素质创新型、应用型人才的培养成为医学教育的重要内容。医学微生物学与免疫学不仅是医学、药学等专业的必修课程,而且是连接基础医学课程与临床医学课程的重要桥梁。为提高医学微生物学与免疫学实验课教学质量,激发学生兴趣,使学生快速掌握实验技能,培养其利用现有知识解决问题的能力,针对医学微生物学与免疫学实验教学中存在的不足,通过整合、删减及增加新实验项目,引入微视频与案例教学,加强实验室生物安全培训等措施,促进微生物学与免疫学实验课程教学的优化。

miR-125b、miR-29a和miR-155-5p作为诊断结核性脑膜炎生物标志的研究

目的探讨结核性脑膜炎患者脑脊液及血浆中micro RNA(mi R)-125b、mi R-29a和mi R-155-5p的表达水平及其临床意义。方法收集20例结核性脑膜炎患者(结脑组)和20例原发性头痛患者(对照组)的脑脊液和血浆,分别提取总RNA,使用实时定量PCR方法分别检测脑脊液和血浆中mi R-125b、mi R-29a及mi R-155-5p的表达水平。结果与对照组相比,结脑组脑脊液、血浆中mi R-29a、mi R-125b表达水平明显上调,结脑组血浆中mi R-155-5p表达水平明显上调,差异均有统计学意义(均P<0.01),而2组脑脊液中mi R-155-5p表达水平比较差异无统计学意义。结论 mi R-125b、mi R-29a和mi R-155-5p可能参与了调节结核性脑膜炎的发生、发展过程,mi R-125b和mi R-29a有可能作为潜在的诊断结核性脑膜炎的生物学标志。

结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统与生物膜

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)是引起结核病的病原菌。其处于持续生存的休眠状态时,可导致长期无症状感染,称为结核潜伏感染。研究显示,结核分枝杆菌染色体中存在大量"毒素-抗毒素系统"(toxin-antitoxin system,TAS),某些TAS在潜伏感染中发挥作用,可调节细菌生长和诱导细菌进入休眠状态;某些TAS参与生物膜形成和应激反应,但其影响生物膜形成的机制尚未阐明。生物膜中的结核分枝杆菌对多种抗结核药物耐药,且能抵抗宿主免疫系统防御;休眠状态的结核分枝杆菌对抗结核药物通常也是耐受的,给结核病治疗带来了巨大挑战。本文就近年来结核分枝杆菌TAS与生物膜的研究及抗结核药物对生物膜形成的影响进行综述。

耐药结核病的分子生物学研究进展

结核病是一个严重的全球公共卫生问题,每年有超过40万耐多药结核病新病例的发生。利用分子生物学方法,从基因水平阐明结核分枝杆菌耐药性的机理,并在此基础上建立敏感、快速和特异的检测方法成为耐药结核病研究的重点。本文就耐药结核病的分子生物学研究现状进行概述。

利用融合PCR技术和T载体克隆技术构建结核分枝杆菌PhoPR双组份系统缺失突变载体

目的基于融合PCR技术(SOE-PCR)、T载体克隆技术,构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)双组份系统缺失突变载体的方法。方法利用SOE-PCR技术,将PhoP、PhoR和PhoPR基因上、下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合,构建PhoP、PhoR和PhoPR突变片段,然后将突变片段直接与T载体连接,将其转入E.coli DH5α感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得MTB PhoP、PhoR和PhoPR缺失突变载体。结果成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,与传统方法相比,效率高、周期短。结论基于融合PCR技术和T载体克隆技术成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,为下一步构建MTB突变株以及相关研究奠定基础。

循环 miRNA 作为诊断结核病生物标志的研究

目的：检测血浆中microRNA（miR）-155-5p、miR-21-5p、miR-29a、miR-142-5p在健康对照组、活动性肺结核组以及潜伏结核感染组中的表达情况，探讨其作为诊断结核病生物标志的可能性。方法健康对照组60人、活动性肺结核组40人和潜伏结核感染组20人，利用反转录-荧光定量PCR检测其血浆中miR-155-5p、miR-21-5p、miR-29a、miR-142-5p的表达水平。结果与健康对照组相比，活动性肺结核组血浆中除miR-142-5p外，miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a都出现表达上调的现象，分别是健康对照组的10．13倍、7．34倍和2．74倍，差异有统计学意义（P＜0．05）；ROC曲线分析miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a，曲线下面积（AUC）分别为0．905、0．830和0．687。与健康对照组相比，潜伏结核感染组血浆中只有miR-155-5p表达上调，且是健康对照者的3．1倍，差异有统计学意义（P＜0．05），miR-21-5p、miR-29a和miR-142-5p表达无差异。与潜伏结核感染组相比，活动性肺结核组血浆中除miR-142-5p外，miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a均表达上调，分别是潜伏结核感染组的3．26倍、6．69倍和1．98倍，差异有统计学意义（ P＜0．05）。与活动性肺结核患者密切接触者中潜伏结核感染率为40．58％。结论 miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a在健康对照组和活动性肺结核组以及活动性肺结核组和潜伏结核感染组之间存在差异性表达，miR-142-5p在3组之间均无差异性表达。 miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a可能是潜在诊断活动性肺结核、潜伏结核感染的生物标志物。与活动性肺结核患者密切接触者中潜伏结核感染率较高。

实时荧光定量PCR对结核病潜伏感染快速诊断的研究

目的探讨7种细胞因子的mRNA表达水平作为诊断结核分枝杆菌潜伏感染生物标志物的可能性。方法健康对照64人,活动性肺结核50人,结核分枝杆菌潜伏感染60人,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结核特异性抗原刺激的外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-10、IFI35、CXCL10及Foxp3的mRNA表达水平。结果 7种因子相对表达量在活动性肺结核组分别为2.33±0.09、4.94±0.45、150±17.82、2.02±0.55、9.53±5.96、5.56±0.97、1.24±0.17,潜伏感染组分别为3.2±0.61、10.04±1.89、202±17.6、21.89±10.25、29.17±11.19、41.35±11.46、2.14±0.67,健康组分别为1.2±0.08、2.92±0.03、53±17.82、1.48±0.17、1.28±0.77、1.63±0.25、1.03±0.67。潜伏感染组与健康组相比7种细胞因子的mRNA表达水平,差异均有统计学意义(P<0.01),相应细胞因子检测的敏感性、特异性分别为95.1%、82.5%,92.5%、88.7%,91.9%、90.1%,88.2%、51.5%,74.2%、61.2%,81.8%、73.4%和80.4%、51.3%;潜伏感染组和活动性结核组比较除IFI35因子外,其余6种细胞因子的mRNA表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),相应细胞因子检测的特异性、敏感性分别为90.6%、80%,88.6%、92.7%,91.9%、86.2%,57.6%、60%,50%、58%,76%、72.2%和66.7%、67.1%;健康对照组和活动性结核组相比较,7种细胞因子的mRNA表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),相应细胞因子检测的敏感性、特异性分别为92.3%、90%,88.6%、86.7%,94.4%、86.7%,89.7%、65.8%,82.4%、63.3%,88.2%、70%和92.9%、72.1%。结核病密切接触者潜伏感染率为48.97%,健康组潜伏感染率为36%。结论结核病患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-2mRNA水平升高,以潜伏感染者升高更显著,因此可作为诊断结核分枝杆菌潜伏感染的生物标志物。