检测不同毒力结核分枝杆菌感染巨噬细胞的凋亡率及其凋亡蛋白caspase-3表达的时相性变化

目的:探讨不同毒力的结核分枝杆菌感染对巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制。方法:用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(H37Rv株)和卡介苗(BCG)分别感染巨噬细胞RAW264.7株,同时设空白对照组,在感染后1、6、12及24小时,用流式细胞技术检测各组巨噬细胞的凋亡率;应用Western blot和RT-PCR检测caspase-3蛋白的表达水平。结果:结核分枝杆菌感染组的凋亡率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);BCG感染组凋亡率高于H37Rv株感染组,在感染后1、12和24小时凋亡率升高显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。巨噬细胞感染结核分枝杆菌后,其caspase-3蛋白表达增高,结核分枝杆菌感染组的caspase-3蛋白表达高于对照组,对照组<H37Rv株感染组<BCG感染组,差异具有统计学意义(P<0.05);BCG感染组caspase-3蛋白表达高于H37Rv株感染组,在感染后1、12和24小时蛋白表达显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结核分枝杆菌感染组caspase-3基因相对表达量高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);BCG感染组caspase-3基因表达高于H37Rv株感染组,在感染后1和24小时表达显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌感染导致巨噬细胞的凋亡,不同毒力的结核分枝杆菌感染巨噬细胞凋亡存在差异,毒力弱的结核分枝杆菌感染巨噬细胞凋亡更加显著,巨噬细胞的凋亡与结核分枝杆菌的毒力强弱有关,与caspase-3蛋白的表达高低有关。