绝经后2型糖尿病患者护骨因子基因rs4355801、rs6993813位点多态性及突变与骨代谢的关系

目的探讨绝经后2型糖尿病患者护骨因子(OPG)基因rs4355801、rs6993813位点多态性及突变与骨代谢的关系。方法选取2020年10月至2021年10月就诊于石河子大学第一附属医院的绝经后女性200例,根据病情分为糖耐量及骨量正常组(A组,52例)、糖耐量正常但骨量异常组(B组,43例)、骨量正常的2型糖尿病组(C组,47例)、2型糖尿病合并骨量异常组(D组,58例)。收集患者年龄、身高、体重、绝经年限等基线资料,计算BMI、腰臀比。用罗氏全自动生化分析仪测定甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血钙、血磷、碱性磷酸酶(ALP)、空腹血糖(FPG)等生物化学指标,HPLC测量糖化血红蛋白(HbA1c),双能X线测量L1~4椎体及股骨颈骨密度,飞行时间质谱测定OPG基因rs4355801、rs6993813位点多态性及基因型分型。采用多元线性回归分析筛选骨密度的影响因素。使用SHEsis软件进行单核苷酸多态性位点的连锁不平衡分析及单体型分析。结果4组间年龄、BMI、腰臀比存在差异(P<0.05)。与A组、B组相比,C组、D组的FPG、HbA1c水平均升高(均P<0.05);与B组相比,C组HDL-C水平升高、ALP水平降低(均P<0.05);与C组相比,D组ALP水平升高(P<0.05);与A组、C组相比,B组、D组的L_(1~4)椎体骨密度及股骨颈骨密度水平均降低(均P<0.05)。OPG基因rs4355801、rs6993813位点均符合Hardy-Weinberg平衡。rs4355801位点基因型及等位基因频率分布组间差异均无统计学意义(均P>0.05);与A组相比,C组、D组rs6993813位点基因型分布均存在差异(均P<0.05),而等位基因频率分布在各组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。C组rs4355801位点突变型患者FPG、HbA1c水平均低于野生型患者(均P<0.05),D组rs4355801位点突变型患者L_(1~4)椎体骨密度水平高于野生型患者(P<0.05),D组rs6993813位点突变型患者血磷水平低于野生型患者、股骨颈骨密度水平高于野生型患者(均P<0.05)。多元线性回归分析显示,绝经年限增加及BMI、TG、LDL-C、HDL-C降低是绝经后女性L_(1~4)椎体骨密度降低的危险因素,绝经年限增加、HDL-C降低、血磷降低是股骨颈骨密度降低的危险因素;rs4355801位点AG基因型是绝经后女性L_(1~4)椎体骨密度、股骨颈骨密度增加的保护因素(均P<0.05)。rs4355801、rs6993813位点野生型与突变型绝经后女性骨密度的差异均无统计学意义(均P>0.05)。OPG基因rs4355801、rs6993813位点之间存在明显连锁不平衡关系(D’>0.9,r^(2)>0.3);携带GT单体型的绝经后女性骨量异常风险增高(P<0.05),携带AT单体型的绝经后女性骨量异常风险降低(P<0.05)。OPG基因rs4355801、rs6993813位点的交互作用未对绝经后女性骨密度产生影响(均P>0.05)。结论rs4355801位点突变可能参与了绝经后女性的骨代谢、糖代谢,rs6993813位点突变及多态性参与了绝经后女性的骨代谢。OPG基因rs4355801、rs6993813位点的明显连锁关系可能影响绝经后女性的骨密度。

RT-PCR技术检测石蜡包埋恶性生殖细胞肿瘤组织中Oct-4的表达

目的:用逆转录PCR技术(RT-PCR)技术从石蜡包埋的恶性生殖细胞肿瘤组织中检测Oct-4基因(目的片段)的表达。方法:用Trizol法从上述3种肿瘤组织抽提总RNA,取出1μl作为模板进行反转录合成cDNA第一链,然后进行PCR反应。PCR产物用1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测。结论:RT-PCR技术可以检测石蜡包埋肿瘤组织Oct-4基因。

Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨以Gli为靶点的hedgehog信号通路抑制剂GANT61对人急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖和凋亡的作用及机制。方法:采用CCK-8法观察不同浓度GANT61对HL-60细胞生长增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染检测GANT61对HL-60细胞凋亡的影响;RT-PCR检测48 h时HL-60细胞中gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;免疫荧光检测48 h时HL-60细胞中Gli1蛋白表达。结果:GANT61呈时间和浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖;GANT61呈浓度和时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡;GANT61呈浓度依赖性抑制gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;GANT61呈浓度依赖性抑制Gli1蛋白表达。结论:GANT61通过抑制Hedgehog-gli信号通路进而下调bcl-2和bcl-xl基因的表达,对人急性髓系白血病细胞HL-60起抑制增殖,并诱导其凋亡作用。

Oct-4及生殖细胞核因子在精原干细胞体外分化前后的表达

目的：检测Oct-4和生殖细胞核因子（GCNF）在小鼠精原干细胞（SSCs）诱导分化前后的表达。方法：体外分离培养小鼠SSCs，用干细胞因子（SCF）诱导其向精母细胞方向分化，通过间接免疫荧光显色和RT-PCR，检测Oct-4和GCNF在小鼠SSCs诱导分化前后的表达。结果：Oct-4在小鼠SaCs诱导前有表达，诱导2d后表达下降；而GCNF在小鼠SaCs诱导前呈阴性表达，向精母细胞诱导2d后呈阳性表达。结论：GCNF可能通过抑制Oct-4的表达促使SSCs分化。

新疆维吾尔族2型糖尿病患者血液白细胞中FOSL2 mRNA表达水平及其临床意义

目的:比较FOS样抗原2(FOSL2)mRNA在新疆维吾尔族2型糖尿病(T2DM)患者及正常糖代谢(NGT)人群中的表达水平,并分析其表达与研究对象临床生化指标的相关性。方法:收集新疆喀什地区维吾尔族T2DM(T2DM组)患者50例和NGT者(NGT组)50人,测量并记录其一般临床指标,如性别、年龄、脉搏、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、腰臀比(WHR)、体质量指数(BMI),记录T2DM病程(根据WHO糖尿病诊断标准确诊),采集血液标本。生化分析仪测定2组研究对象的空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)等糖脂代谢指标;全自动电化学发光分析仪及配套试剂测定空腹胰岛素(FINS)水平;高压液相色谱法(HPLC)测定糖化血红蛋白(HbAlc)水平;RT-PCR法测定血液中FOSL2 mRNA表达水平。结果:与NGT组比较,T2DM组患者的BMI(t=-4.62,P=0.00)、FPG(t=-9.56,P=0.00)、HbAlc(t=-7.83,P=0.00)、TC(t=-7.86,P=0.00)、TG(t=-3.89,P=0.00)和LDL-C(t=-2.41,P=0.01)水平升高。而HDL-C水平和FOSL2mRNA表达水平(t=-2.58,P=0.01;t=-12.174,P=0.000)降低。与NGT组比较,T2DM组患者的FINS(t=-2.42,P=0.02)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)(t=-6.46,P=0.00)、胰岛β细胞功能指数(In-HOMA-β)(t=-5.58,P=0.00)升高,胰岛素敏感指数(In-ISI)(t=6.80,P=0.00)降低。T2DM患者白细胞中FOSL2 mRNA表达水平与WHR(r=-0.415,P=0.008)、FPG(r=-0.620,P=0.000)、HbAlc(r=-0.681,P=0.000)、HOMA-IR(r=-0.504,P=0.001)、TC(r=-0.582,P=0.000)、TG(r=-0.342,P=0.031)和HDL-C(r=-0.323,P=0.042)、T2DM病程(r=-0.733,P=0.000)呈负相关关系,与In-HOMA-β(r=0.638,P=0.000)呈正相关关系。回归分析,T2DM病程(β=-0.056,P=0.002)、In-HOMA-β(β=0.342,P=0.001)和TC(β=-0.219,P=0.003)为FOSL2基因表达水平的影响因素。结论:FOSL2mRNA表达水平下调参与新疆维吾尔族人群胰岛素抵抗和T2DM发生发展,TC是维吾尔族T2DM患者FOSL2基因表达水平下调的重要影响因素。

粒细胞集落刺激因子骨髓干细胞动员治疗大鼠肝损伤的实验研究

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)骨髓干细胞动员对大鼠肝损伤的治疗作用。方法:将大鼠随机分为正常对照组(10只)、造模组(20只)。造模组采用腹腔注射四氯化碳的方法连续4w构建大鼠肝损伤模型,然后随机分为动员组(10只)和模型对照组(10只),动员组皮下注射G-CSF,连续6d。3w后采用检测大鼠肝功能、大鼠肝脏HE染色等方法进行观察。结果:3w后大鼠的肝功能较模型组没有明显恢复。结论:G-CSF骨髓干细胞动员治疗大鼠肝损伤,不能明显改善肝脏功能,也没有加重肝脏的病理变化。

粒细胞集落刺激因子对骨髓干细胞动员的研究进展

粒细胞集落刺激因子(Granulocyte-colony stimulating factor G-CSF)已经在医学实验中被证实为安全、有效的动员剂,然而这个过程的分子机制和影响因素目前尚不完全清楚。此动员过程主要通过影响造血干/祖细胞和骨髓微环境、细胞凋亡等方面起作用。

新疆维吾尔族代谢综合征患者血清FOS相关抗原2蛋白浓度变化及与危险因素个数的关系

目的新疆维吾尔族是代谢综合征(MS)高发民族,目前关于FOS相关抗原2(FRA-2)蛋白表达与新疆维吾尔族群体MS关系的报道较少。文中旨在探讨新疆维吾尔族MS人群血清FRA-2蛋白浓度变化及与危险因素个数的关系。方法选取2020年6月至2021年4月于石河子大学医学院第一附属医院内分泌科及心内科就诊,有MS危险因素(肥胖、高血压、高血脂、高血糖)的204例维吾尔族患者,其中有3项及以上危险因素者为MS组(n=118),有1~2项危险因素者为非MS组(n=86)。另外选取同期于我院维吾尔族健康体检者为对照组(n=96,无任何一项MS危险因素)。测定FPG、TG、稳态胰岛素评价指数(HOMA-IR)等指标;ELISA测定FRA-2蛋白表达水平;偏相关法分析指标间相关关系,多元线性分析FRA-2蛋白浓度变化与危险因素个数的关系;Logistic回归分析非MS人群发生MS的影响因素。结果与对照组比较,非MS组、MS组腰围、BMI、SBP、DBP、TG、LDL-C明显升高(P<0.05),HDL-C明显降低(P<0.05);与非MS组比较,MS组FPG、HbA1c、FINS、TC、HOMA-IR明显升高(P<0.05)。与对照组FRA-2蛋白表达[39.87(22.55,56.71)]比较,非MS组[26.23(9.78,43.98)]、MS组[9.90(7.00,16.77)]明显降低(P<0.01)。相关分析结果显示,FRA-2蛋白表达与MS危险因素个数呈负相关(r=-0.619,P=0.000);危险因素每增加一个,FRA-2蛋白表达下降6.722 ng/mL。偏相关分析结果显示:FRA-2蛋白表达水平与腰围、BMI、DBP、FPG、TG、HOMA-IR呈负相关(P<0.05),与HDL-C呈正相关(P<0.05)。FRA-2降低、WC、FPG及TG升高是非MS患者发生MS的危险因素(OR=1.10、1.14、1.26、1.88);TC降低及HDL-C升高是非MS患者发生MS的保护因素(OR=0.22、0.04)。结论新疆维吾尔族MS患者血清FRA-2浓度降低,危险因素越多,FRA-2浓度越低。FRA-2有望成为该人群MS患者病情评估的生物标志物及治疗的潜在靶点。

新疆维吾尔族2型糖尿病FOSL2 DNA甲基化水平与胰岛素抵抗及胰岛β细胞分泌功能的关系

目的探讨新疆维吾尔族2型糖尿病FOSL2 DNA甲基化水平与胰岛素抵抗及胰岛β细胞分泌功能的关系。方法选取内分泌代谢科就诊的维吾尔族患者100例,其中正常对照组(NC组,n=50)及2型糖尿病组(T2DM组,n=50)。测定空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、空腹胰岛素(FINS)等生化指标,飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)检测FOSL2 DNA甲基化水平,稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等指标,Spearman法进行指标间相关性分析,多元逐步线性回归分析胰岛素抵抗及胰岛β细胞分泌功能的影响因素。结果与NC组相比,T2DM组体质量指数(BMI)、FPG、糖化血红蛋白(HbA1c)、TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、FINS、HOMA-IR升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、稳态模型胰岛素敏感指数(HOMA-ISI)、稳态模型胰岛β细胞功能(HOMA-β)降低;T2DM组8个胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸(CpG)单元甲基化水平升高;相关性分析结果显示,FOSL2 DNA有6个CpG单元甲基化水平与HOMA-IR呈正相关,与HOMA-ISI呈负相关;有4个CpG单元甲基化水平与BMI呈正相关,与HOMA-β呈负相关;回归分析结果显示,CpG12.13.14甲基化水平升高是HOMA-ISI、HOMA-β降低及HOMA-IR增高的影响因素,CpG15.16.17甲基化水平升高是BMI增高的影响因素。结论FOSL2可能通过DNA甲基化水平升高的方式参与维吾尔族T2DM胰岛素抵抗及胰岛β细胞分泌功能缺陷,从而导致T2DM的发生发展。

JNK、ERK信号通路在NaAsO_2诱导骨髓间充质干细胞增殖中的作用

目的:研究c-jnk氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)在亚砷酸钠(NaAs02)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖中的作用。方法:体外培养骨髓间充质干细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖,Western-blot检测磷酸化JNK、ERK表达水平。结果:低浓度1、2μmol/LNaAs02对BMSC有明显的促进增殖作用;高浓度16、32μmol/LNaAs02则对细胞生长产生抑制作用,具有一定剂量-效应关系;2、4、8μmol/LNaAs02处理BMSC24h后,JNK磷酸化表达水平明显增加,ERK磷酸化表达水平明显降低;JNK抑制剂SP600125可明显降低高浓度16、32μmol/LNaAs02的生长抑制作用;ERK抑制剂PD98059可抑制低浓度1、2μmol/LNaAs02对BMSC的促增殖作用。结论:低浓度NaAs02激活ERK信号通路,提高细胞增殖率,可被抑制剂PD98059阻断;高浓度NaAs02激活JNK信号通路,提高细胞凋亡率,可被抑制剂SP600125阻断。NaAs02致癌机制可能与JNK、ERK信号通路作用相关。

亚砷酸钠对NIT-1细胞胰岛素合成与分泌的影响

目的观察亚砷酸钠(NaAsO2)对胰岛β细胞NIT-1胰岛素合成与分泌的影响。方法体外培养NIT-1细胞,NaAsO2处理后,以MTT法检测细胞的增殖活性,用ELISA测定胰岛素分泌情况,RT-PCR法检测胰岛素mRNA的表达。结果 (1)当NaAsO2浓度大于4μmol/L时抑制细胞增殖,细胞增殖抑制率随NaAsO2浓度的增加及作用时间的延长而增加。(2)作用24h,8μmol/L组不同浓度葡萄糖刺激的胰岛素分泌和胰岛素mRNA表达均明显减少(P<0.05);作用48h,4μmol/L组和8μmol/L组不同浓度葡萄糖刺激的胰岛素分泌和胰岛素mRNA表达均明显减少(P<0.05),而且8μmol/L组对高糖(16.5mmol/L)刺激的胰岛素分泌与基础(5.5mmol/L)胰岛素分泌差异无统计学意义。结论砷(As)对NIT-1细胞胰岛素分泌和胰岛素基因表达的影响与作用时间和剂量有关,胰岛素合成与分泌障碍可能是(As)影响胰岛β细胞功能进而引发糖尿病的机制之一。

ARG1基因对人胚肾细胞293砷染毒前后增殖及凋亡的影响

目的:观察ARG1基因对不同浓度的亚砷酸钠(NaAsO2)染毒后的293细胞的增殖及凋亡的影响,并讨论ARG1的抗砷性。方法:将ARG1表达质粒pcDNA3.1-ARG1及空载体对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体(Lipofectamine2000)介导转染293细胞后,荧光共聚焦显微镜观察细胞转染率;将实验组pcDNA3.1-ARG1-293细胞、空白对照组pcDNA3.1-293细胞及阴性对照组293细胞用不同浓度的NaAsO2浓度染毒48h后,使用MTT法检测ARG1基因对砷染毒后293细胞的增殖的影响;将实验组、空白对照组及阴性对照组按不同浓度NaAsO2染毒,加入AnnexinVFITC/PI凋亡试剂,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果:(1)荧光共聚焦显微镜观察转染结果显示转染率可达75-85%;(2)NaAsO2在1-8μmol/L时其对实验组细胞增值的抑制率明显低于对照组,而在浓度>8μmol/L时则没有明显差异;(3)实验组细胞在NaAsO2浓度<8μmol/L其凋亡率明显低于对照组。结论:ARG1能够降低NaAsO2对293细胞增值的抑制率,减轻其对293细胞的促凋亡作用,主要是在低浓度时发挥作用。

参附注射液辅助治疗慢性心衰的价值

目的探讨参附注射液联合平板运动训练对慢性心力衰竭(CHF)患者左心室功能及运动耐量的影响。方法选取我院我科于2017年5月至2019年7月期间收治的126例CHF患者作为研究对象,采用抽签法随机分组。所有患者均进行平板运动训练,对照组63例增加冻干重组人脑利钠肽(rh-BNP)治疗,观察组63例增加参附注射液治疗。对比两组患者治疗后临床疗效、左心室功能指标、运动耐量指标。结果观察组患者总有效率明显大于对照组(95.24%>84.13%)(p<0.05);观察组患者左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)水平大于对照组,左室舒张末内径(LVEDD)水平小于对照组(p<0.05);观察组患者能量代谢当量(MET)、最大运动心率水平明显大于对照组(p<0.05)。结论参附注射液联合平板运动训练能够提高患者心功能及运动耐量,增强治疗效果,安全性较高。