基于创新能力培养的医学细胞生物学实验教学改革与探索

本科生创新能力的培养目前已成为高等教育改革的重要目标之一。课程组依托实验改革,更新实验课程内容,改进实验教学模式,完善实践考核评价体系,初步建立科研实践教学平台;通过教学实践培养学生实践能力及创新能力,为培养高素质创新型医学人才提供了新思路。

Neuritin对鸡胚尿囊膜及人脐静脉内皮细胞血管生成作用的影响

目的 探究神经营养因子Neuritin过表达对鸡胚尿囊膜(CAM)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成作用的影响,为治疗血管生成性疾病提供新方向。方法 选择新鲜黄皮种蛋30枚建立CAM模型,采用随机数字表法分为3组:阳性对照组(bFGF)、阴性对照组(NS)和实验组(Neuritin),每组10枚。阳性对照组载入2 500 U/mL的bFGF,实验组载入10μg/mL的Neuritin蛋白,阴性对照组载入NS,各组载入量均为10μL且所有CAM的培养温度、相对湿度及孵育时间相同,记录孵育72 h后各组CAM的血管分支、数目及大小。选择健康孕妇的新鲜脐带制作原代HUVECs,将其分为3组:转染重组质粒组(HUVEC-neu组)、转染空载体组(HUVEC-3.1组)和未转染组(HUVEC组)。HUVEC-neu组的原代HUVECs经重组质粒Neuritin转染,HUVEC-3.1组经空载体质粒转染,HUVEC组不给予特殊处理,3组均接受相同的传代培养方案。Western blot检测Neuritin在HUVEC-3.1组与HUVEC-neu组的蛋白表达水平。CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验和管型形成实验检测HUVEC-3.1组和HUVEC-neu组的细胞增殖、迁移和管型形成能力。结果 (1)实验组的CAM血管分支点数及微小血管数较阴性对照组明显增加(P <0.01),但两组的大、中血管数差异无统计学意义(P> 0.05);(2)HUVEC-neu组中Neuritin在HUVECs成功过表达。(3)与HUVEC-3.1组相比,HUVEC-neu组的细胞增殖活力下降(P <0.05),但其迁移、管型形成能力明显增强(P <0.01)。结论 Neuritin过表达可促进血管生成,通过影响细胞增殖、迁移和管型形成能力参与新生血管的调控。

临床医学专业学位研究生科研思维能力培养的探索

目的:科研思维能力是衡量研究生综合素质的重要指标,本文分析临床医学专业学位研究生科研思维能力培养现状,针对如何提高科研思维能力进行探讨。方法:通过查阅文献资料,结合临床医学专业研究生理论和实验课的任课经验,并对研究生及导师的座谈交流进行调查、分析和探索。结果:通过优化课程设置、加强教师授课方式引导与信息化建设、在实践技能培养中提高科研思维能力、充分发挥研究生导师科研引导作用、开展学术交流与学术讲座等途径,对于提高临床医学专业学位研究生科研思维能力有促进作用。结论:科研思维能力的培养是一项长期的系统工程,需要良好氛围和环境,如何提高临床医学专业学位研究生科研思维能力和综合能力,值得我们进一步探索和研究。

人骨髓间充质干细胞的分离和体外培养

目的:分离培养人骨髓间充质干细胞,研究其在体外生长增殖的生物特性。方法:冲洗手术弃骨骨髓,获取骨髓间充质干细胞进行培养,倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制生长曲线,免疫细胞化学法鉴定细胞表面抗原,进行染色体核型分析。观察冷冻保存细胞复苏后的生长状况。在地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的作用下,进行成骨诱导分化。结果:原代和传代培养的细胞呈现梭形外观,具有较强的生长增殖能力;细胞CD44,CD54抗原表达阳性,CD34表达阴性。进行染色体核型分析表明是正常的人二倍体细胞。复苏细胞生物学特性无明显改变。分化细胞表现成骨细胞特性,合成碱性磷酸酶能力增强,矿化结节逐渐出现。结论:建立分离培养人骨髓间充质干细胞和研究其体外培养生物特性的方法,为通过组织工程学方法修复组织损伤奠定基础。

新疆两例尼曼-皮克病家系分析

目的对2例老年C型尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease type C,NPC)患者及家系的NPC1和NPC2基因进行测序,分析基因型与表型关系。方法采集2例NPC患者及家系外周血,提取基因组DNA,进行引物设计扩增,直接基因测序检测。结果2例患者在NPC1基因6号外显子发现1个杂合子位点A644G(H215R),导致第215位氨基酸由His突变为Arg;18号外显子发现1个杂合子位点N931N(C2793T),氨基酸编码没有改变;2例家系其他成员未发现异常。结论 NPC患者具有典型NPC临床特征,在基因水平上发现,相关基因突变位点或新的突变位点,但家系基因特征不明显。因此,对于老年NPC患者或存在其他致病因素。

胆固醇逆向转运和动脉粥样硬化

以前的研究认为血浆中HDL始终与动脉粥样硬化代表的心血管事件呈负相关。近年来高水平HDL抗动脉粥样硬化的观点遭到质疑,临床实验中多种升高HDL药物均未显著减少心血管事件的发生,过量LDL仍是动脉粥样硬化的危险因素,但不再单纯强调升高HDL水平,而是将HDL控制在合理范围内。基础研究中HDL在胆固醇逆向转运过程中重要作用不容否定,本文将从HDL逆向转运和动脉粥样硬化的关系进行综述。

二尼曼匹克病家系NPC1和NPC2基因突变检测分析

目的:二C型尼曼匹克病患者家系,对其进行NPC1和NPC2基因测序分析基因型与表型关系。方法:采患者及家系外周血基因组DNA,根据人类基因组数据库NC_000018(NPC1)及NG_007117(NPC2)基因序列设计引物分别扩增25个外显子和5个外显子区域,产物经过回收纯化,采用直接测序进行突变检测,测序结果应用DNAman等软件进行序列分析,对于异常片段进行重新扩增测序,验证结果可靠性。结果:二例患者均在NPC1基因发现杂合子位点A644G(H215R),导致第215位氨基酸由His突变为Arg;18号外显子发现一个杂合位点N931N(C2793T),氨基酸编码没有改变,家系成员未发现上述基因位点突变。结论:二尼曼匹克患者具有典型尼曼匹克临床特征,在基因水平上也发现相关基因突变位点,但在遗传上与家系成员相关不大。因此对于尼曼匹克患者或存在其他致病因素。

新疆哈萨克族人血管紧张素原M235T分子变异与原发性高血压关联的研究

目的 :研究血管紧张素原 (AGT)基因第二外显子M2 35T分子变异与中国新疆哈萨克族人原发性高血压的关系。方法 :应用多聚酶链反应 (PCR)结合限制性酶切 (RFLP)方法对 71例新疆哈萨克族血压正常者与 76例新疆哈萨克族原发性高血压 (EH)患者进行M2 35T分子突变的检测。结果 :EH组TT基因型的频率和T等位基因的频率分别为 0 .2 37、0 .5 13,明显高于对照组。在女性EH患者与女性对照组中差别更大。结论 :AGT基因TT基因型可能与新疆哈萨克族原发性高血压的发生有关。对女性影响可能更大。

Neuritin在乳腺腺病和乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的 观察Neuritin蛋白在乳腺腺病及乳腺浸润性导管癌中的表达情况,探讨Neuritin与乳腺腺病及乳腺浸润性导管癌的相关性。方法 收集乳腺腺病组织20例、乳腺浸润性导管癌组织30例,采用免疫组织化学法检测各组织中Neuritin蛋白的表达情况,并用蛋白质免疫印记法进行验证。结果 Neuritin蛋白在乳腺腺病组织高表达,阳性表达率为65.0%;在乳腺浸润性导管癌组织中低表达,阳性表达率为16.7%,差异具有统计学意义（χ^2=12.17,P〈0.05）;蛋白质免疫印记结果与之相符。Neuritin蛋白的表达与乳腺浸润性导管癌患者的年龄,肿瘤高、中、低分化程度及淋巴结转移情况无明显相关性。结论Neuritin在乳腺腺病及乳腺浸润性导管癌组织中表达阳性,提示Neuritin可能与乳腺腺病及乳腺浸润性导管癌的发生、发展相关,Neuritin在乳腺腺病组织中表达显著升高,这将为临床乳腺腺病的鉴别诊断提供理论依据。

Neuritin对神经及血管的功能研究进展

Neuritin,作为神经营养因子家族的成员之一,在抑制神经元凋亡、促进神经元轴突再生及神经系统的发育发挥了重要的作用,提示Neuritin很可能是外周和中枢神经系统疾病的治疗靶点。Neuritin不仅作用于神经系统,在血管生成方面也扮演了重要角色。本文将近几年关于Neuritin对神经系统的作用及在血管生成中发挥的作用进行综述。