捻转血矛线虫Hc38基因DNA疫苗对绵羊免疫保护性效果评价

为了研究基因疫苗对绵羊的免疫保护效果,本研究构建了捻转血矛线虫(H.contortus)Hc38基因DNA疫苗。将H.contortus Hc38基因保守结构域克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,免疫鼠8d后用RT-PCR检测到该疫苗在鼠肌肉组织中进行了转录。将纯化的DNA疫苗免疫绵羊后,用western blot和ELISA方法检测疫苗在绵羊体内的翻译和诱导IgG的产生。二免后2周用10000条H.contortus第3期幼虫攻击实验动物,检测绵羊粪便虫卵排出、成虫数量等免疫保护性指标。该H.contortus Hc38 DNA疫苗与对照组比较,免疫组绵羊排出虫卵减少66.6%、成虫减少33.1%。特别值得注意的是免疫组的静脉注射方式产生抗体最高,相应羊的虫卵数和成虫数低。本实验证明Hc38基因DNA疫苗对绵羊虫卵及成虫发育具有明显的抑制作用。

捻转血矛线虫Hc38保守结构域所在基因片段的真核表达载体构建

根据捻转血矛线虫Hc38基因产物(登录号AY749124)保守结构域所在核酸序列设计1对引物,该引物包含Kozak序列、HindⅢ酶切位点、XbaⅠ酶切位点。以含有捻转血矛线虫Hc38基因保守结构域片段的pMD19-T为模板,经PCR扩增获得Hc38基因保守结构域片段,用HindⅢ、XbaⅠ双酶切该片段,回收后将此基因片段克隆至相同酶切回收后的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,获得重组质粒pcD-NA3.1-Hc38。经酶切分析、序列测定和PCR鉴定,证实了重组质粒的正确性。

MBL在绵羊呼吸道上皮细胞抗肺炎支原体感染过程中的机制探讨

为了探究甘露糖结合凝集素(MBL)对绵羊呼吸道黏膜上皮细胞抵御绵羊肺炎支原体(MO)感染的作用,本研究从绵羊血清中提取天然MBL蛋白,将绵羊呼吸道黏膜上皮细胞分4组,分别处理为:接种MO前细胞培养基中添加MBL蛋白;接种MO后细胞培养基中添加MBL蛋白;接种MO后继续细胞培养;正常培养。采用荧光定量PCR的方法,对各组细胞MBL、C3、ICAM-1、IL-6、SBD-1基因的表达量进行研究。结果显示:与对照组相比,其他组细胞密度均减少,且MBL、C3基因的表达量显著下降(P<0.05),同时ICAM-1、IL-6基因的表达量显著升高(P<0.05);接种MO前加入MBL的细胞ICAM-1基因的表达量相对其他组显著升高(P<0.05),且其SBD-1基因表达量极显著升高(P<0.01)。被MO感染的各组细胞均产生免疫应答,在感染前加入MBL组细胞的免疫应答更强烈,该过程或有ICAM-1和SBD-1参与。