基于免疫球蛋白G降解酶切和高效液相色谱的抗体电荷异构体分析技术

目的:探索和优化单克隆抗体电荷异构体分析的酶切预处理和高效液相色谱检测方法。方法:采用和优化基于Thermo ProPac^(TM) WCX-10色谱柱的离子交换色谱检测方法,以含10 mmol·L^(-1)磷酸盐和1 mol·L^(-1)氯化钠缓冲液(pH 6.3)为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min^(-1),检测信号为波长280 nm吸收度,采用免疫球蛋白G降解酶(IdeS)切前后的电荷异构体检测,并对方法的专属性、线性、重复性、精密度等指标进行考察。结果:基于阳离子交换色谱(CEX)方法和酶切处理,以几种商品化抗体为例,展示该方法的应用,对完整的IgGs与IdeS酶切产生的F(ab’)_(2)和Fc区域进行比较分析提供更详细和更特异的电荷异构体信息。通过方法学验证,空白溶剂无干扰峰出现,进样量在10~80μg范围内,进样量与峰面积的线性关系良好(R^(2)=1.000);6次进样测得的峰面积RSD为0.52%;日间精密度3.3%;耐用性良好;在24 h内样本基本稳定,测得的峰面积RSD为3.5%;3批样品检测结果的峰面积RSD为2.5%。结论:该方法可用于全流程的抗体药物研发,包括早期阶段的分子筛选,中期产业化的工艺开发,直至产品上市质量标准和稳定性研究。