壳聚糖支架与神经干细胞生物相容性的研究

为探讨壳聚糖多孔支架与神经干细胞(NSCs)的生物相容性,应用冷冻干燥技术制备壳聚糖多孔支架,将神经干细胞克隆球接种于壳聚糖支架载体上,分为NSCs+支架组和NSCs+支架+NGF组。培养2周后冰冻切片,行Nissl染色及微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNP)免疫组化染色来检测NSCs的分化,并进行MAP-2阳性细胞计数、胞体面积、细胞周长的图像处理和统计分析。结果显示:壳聚糖支架孔隙率为90%,支架孔径为50～350μm。NSCs可以在壳聚糖支架上存活、迁移并分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。NSCs+支架+NGF组的MAP-2阳性细胞数明显多于NSCs+支架组,且胞体较大,突起较多且长。上述结果提示,壳聚糖支架与NSCs具有良好的生物相容性,外源性的NGF能够促进壳聚糖支架中的NSCs向神经元分化。

蛋白激酶CK2神经生物学特性及功能研究进展

蛋白激酶CK2是一种普遍存在的多效性丝/苏氨酸蛋白激酶,在非神经细胞中发挥重要作用。近年来研究证实CK2在神经系统中也扮演不可或缺的角色:CK2在大脑中大量表达,底物众多,通过磷酸化底物参与多种信号通路;在神经元中,CK2存在于突触和细胞核等多种基质,并证实其参与调制神经元发育与生长、突触形成、突触传递、突触的可塑性、学习与记忆等生理活动;一些神经因子或化合物可通过CK2起着神经营养或保护作用。本文将对CK2的生物学特性及神经生物学功能研究的最新进展作一综述。

丁香酚对昆明鼠学习记忆功能影响的神经行为学研究

目的:探讨药物丁香酚对昆明鼠学习记忆功能的影响及其途径。方法:昆明鼠经LashleyⅢH-W水迷宫筛选后,剔除学习记忆差的小鼠,通过吸入丁香酚刺激嗅觉的途径,用水迷宫测定小鼠的空间学习记忆能力,同时与在脑立体定位仪下完全摘除嗅球的小鼠进行对照。结果:丁香酚药物组小鼠的水迷宫潜伏期明显小于空白组,而嗅球摘除后的模型+药物组与假手术组和模型组的水迷宫潜伏期相比无显著性差异。结论:丁香酚能够通过嗅觉途径改善小鼠的学习记忆功能。

Genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元影响的体内研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响。雌性大鼠双侧卵巢切除2周后用genistein和雌激素替代治疗1周。称子宫重量以确定手术是否成功及雌二醇(E2)的治疗是否有效。用免疫组化染色、RT-PCR和Westernblot等方法对胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量进行检测。结果显示:去卵巢3周后子宫变轻,雌激素替代治疗能增加去卵巢子宫的重量,而genistein替代治疗对去卵巢子宫的重量影响不明显;去卵巢3周后,内侧隔核(MS)和斜角带垂直臂核(VDB)内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量均明显减少,雌激素和genistein替代治疗后能显著增加去卵巢大鼠MS和VDB内的胆碱能神经元数量、ChAT基因和蛋白的表达量。本研究结果提示:genistein对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元具有类似雌激素样神经保护作用,而对子宫影响不明显。

嗅球摘除后大鼠内嗅皮质区神经元变化的实验研究

目的:建立嗅球摘除大鼠模型,观察模型大鼠内嗅皮质区神经元在1 d、3 d、7 d、14 d四个时间点的变化。模型组+茉莉花萃取物,观察大鼠14 d时神经元的变化。与模型组和空白组形成对照,初步探讨茉莉花萃取物通过嗅觉通路对神经元再生作用的可能。方法:嗅球摘除模型建立不同组别,通过尼氏染色观察大鼠内嗅皮质神经元变化,免疫组化观察大鼠内嗅皮质中神经递质的变化。结果:尼氏染色:模型组大鼠内嗅皮质中神经元在受损后1 d、3 d、7 d含量逐步下降;14 d含量明显增加,但仍略低于空白组;吸嗅组(模型组+茉莉花萃取物)内嗅皮质区神经元略高于空白组。免疫组化:模型组大鼠内嗅皮质中5-HT和DA在受损后1 d、3 d、7 d表达逐步减弱,14 d时表达增强,但仍弱于空白组;吸嗅组表达高于14 d,但仍弱于空白组。结论:受损神经被激活后,内嗅皮质有显著的神经再生潜力。初步证明茉莉花萃取物能够通过嗅觉通路加速神经元再生,其机制可能与内嗅皮质中单胺类神经递质的改变相关。

两种神经功能评分评价大鼠局灶性脑缺血模型的初步研究

目的探讨Garcia和Bederson两种神经功能评分对大鼠局灶性脑缺血模型的评价意义。方法 16只大鼠采用线栓法阻塞大脑中动脉建立局灶脑缺血再灌注模型,24 h后分别采用Garcia和Bederson两种神经功能评分方法进行评价,并行TTC染色法测定脑梗死体积百分比(BIVP),应用Spearman相关分析判断神经功能评分与BIVP的相关性。结果 16只大鼠行大脑中动脉阻塞模型术后存活15只,Garcia评分与BIVP呈显著负相关(r=-0.930,P<0.001),Bederson评分与BIVP呈显著正相关(r=0.794,P<0.001)。结论 Garcia评分及Bederson评分均可作为局灶性脑缺血模型行为学评价指标,前者可能更适合。

MicroRNA与神经系统发育的研究进展

神经发育过程受到多种因子的精确调控,作为调控因子之一的非编码单链小分子RNA即microRNA的表达在神经发育过程呈现严格的"时间、空间"特异性,其异常表达会导致神经发育异常。神经干细胞是神经系统最原始的细胞,其正常的增殖、分化、迁移是神经系统正常发育的保证,microRNA对神经干细胞的增殖和分化有调控作用。不同的microRNA通过影响其靶标mRNA在神经干细胞的表达及功能发挥,进而改变神经干细胞的增殖和分化状态,最终完成对神经系统发育的调控。

重金属铬、铜、汞经不同途径神经毒性的对比研究

[目的]探讨几种重金属通过不同的通路对小鼠行为学的影响。[方法]昆明鼠经LashleyⅢH-W水迷宫筛选后,剔除学习记忆差的小鼠,通过慢性滴鼻给药和灌胃的途径,用水迷宫、洞板、自主活动箱测定小鼠给药前后行为学的改变,并利用同步辐射技术,观察小鼠脑部的形态学改变。对通过2种给药途径所造成的神经毒性进行对比研究,探讨重金属通过不同通路对机体所造成的毒性差异及其相关机制。[结果]重铬酸钾滴鼻组用药前后洞板探索行为有明显变化(P<0.05),灌胃组给药前后无明显变化;几组重金属滴鼻给药组前后比较,神经系统的兴奋性有所增加,其中重铬酸钾滴鼻组和硫酸铜滴鼻组较为明显,灌胃组给药前后无明显变化;重铬酸钾滴鼻组小鼠和硫酸铜滴鼻组小鼠上台潜伏期有所增长,靶象限活动时间百分比、穿台次数减少,游泳速度有所减慢,灌胃组给药后潜伏期反有所缩短;HE染色和同步辐射观察显示,重铬酸钾滴鼻组小鼠海马部位神经元肿胀明显,空泡变性,可见胶质水肿,部分细胞坏死,并可见呈筛状的坏死灶,胞质中一些区域透光增加,灌胃组无明显改变。[结论]这几种重金属离子在较低浓度时即可通过嗅觉通路沉积于脑,并能通过嗅觉途径改变小鼠的行为学,灌胃组在此浓度时对小鼠的行为学没有较大的改变,有些金属离子可以作为微量元素参与新陈代谢,对神经系统不造成损害。

突触可塑性的生物物理学基础和体视学测量研究进展

突触可塑性是神经系统生长发育、神经损伤与修复、学习与记忆的神经生物学基础。突触可塑性是指突触在形态、界面结构和功能上的可变动性和可修饰性，突触形态的可塑性表现为新突触形成、突触形状以及突触密度的变化；突触界而结构变化包括突触活性区长度、突触后致密物（postsynaptic density，PSD）厚度、突触间隙宽度以及突触界而曲率的变化；

Genistein对大鼠基底前脑胆碱能神经元发育影响的体外研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对体外培养的基底前脑胆碱能神经元发育的影响。取孕18d胎鼠基底前脑神经元,体外有血清培养7d后,随机分为3组:无血清培养液组(control组),genistein+无血清培养液组(G组)、E2+无血清培养液组(E2组)。48h后用MTT法测定细胞活力和代谢状态;用AChE组化染色以及ChAT和MAP2免疫荧光双重染色,镜下计数AChE阳性和ChAT阳性神经元数,并对两种神经元的细胞面积、第一级突起数及最长突起长度进行检测。结果显示:MTT法所测的OD值、AChE阳性和ChAT阳性神经元数、细胞面积、第一级突起数及最长突起长度在G组与control组之间无明显差异,然而E2组中的上述数值均明显增加。本研究的结果提示:genistein对体外培养的基底前脑胆碱能神经元无类似雌激素样的神经保护和营养作用。

体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化的研究

通过体外诱导人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)向多巴胺(dopamine,DA)神经元分化,探讨人BMSCs来源的DA神经元的功能特征及其分化机制,为临床上细胞移植替代治疗诸如帕金森氏病(parkinson’sdisease,PD)等神经精神性疾病提供一种理想的细胞来源。通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞,贴壁培养纯化BMSCs。50μmol/L脑源性神经营养因子(brain derivedneurotrophy factor,BDNF),10μmol/Lforskolin(FSK)和10μmol/LDA联合对BMSCs进行诱导。电子显微镜观察诱导2周后细胞是否具有神经元的超微结构特点;免疫细胞化学染色和RT-PCR检测DA神经元分化过程中的标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达以及转录因子Nurr1、Ptx3和Lmx1b的表达;高效液相色谱(highperformance liquid chromatogram,HPLC)检测诱导2周后的细胞多巴胺的释放水平。结果表明,诱导2周后,电镜下细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体以及神经微丝的形成。RT-PCR结果显示NSE(neuron specificenolase)、Nurr1、Ptx3、Lmx1b和TH的mRNA均有表达;免疫细胞化学染色结果表明诱导2周后TH阳性细胞(24·80±3·36)%的表达较诱导3d后(3·77±1·77)%明显提高(P<0·01);HPLC检测到诱导2周后的细胞DA释放水平[(1·22±0·36)μg/mL(n=6)]高于未经诱导的细胞[(0·75±0·22)μg/mL(n=6)(t=-2·79,P=0·038)]。由此得出,BDNF、FSK和DA可以在体外诱导人BMSCs向DA神经元分化,并具有DA神经元的功能特征,是临床用于治疗神经精神性疾病的理想细胞来源。

胰腺癌组织中TGF-α及EGFR的表达与神经浸润的相关性研究

目的:探讨胰腺癌组织中TGF-α及EGFR的表达与胰腺癌神经浸润的关系。方法:用免疫组化方法检测31例胰腺癌及其对应癌旁组织中TGF-α及EGFR蛋白表达情况,并对实验结果进行统计学分析。结果:31例胰腺癌组织中存在神经浸润者19例,EGFR、TGF-α阳性表达分别为21例(67.74%)和18例(58.06%),与对应癌旁组织相比其表达的差异均具有统计学意义(P<0.05)。在发生神经浸润的19例中,呈EGFR阳性表达16例(84.21%),TGF-α阳性表达12例(63.16%),TGF-α和EGFR共同阳性表达12例(63.16%);无神经浸润者12例中,呈EGFR阳性表达5例(41.67%),TGF-α阳性表达6例(50.00%),TGF-α和EGFR共同阳性表达仅2例(16.67%),与有神经浸润者比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-α与EGFR在胰腺癌组织及其周围神经组织的过量表达可能构成了旁分泌作用,从而为癌细胞与神经组织之间的相互作用提供了可能,增加了癌细胞与神经组织的特殊亲和力,与胰腺癌易于发生神经浸润转移有关。

同种异体神经干细胞脑内移植免疫排斥反应的实验研究

目的观察帕金森病(PD)模型大鼠同种异体神经干细胞(NSC)脑内移植是否存在免疫排斥反应。方法取E14.5d SD胚鼠腹侧中脑组织进行分离、培养、扩增,经Brdu、Nestin免疫组化染色鉴定确认为NSC后,借助脑立体定位仪移植到SD大鼠PD模型的纹状体内,分别于10、21、35、60d时检测其旋转行为后分批处死,再行HE、CD4、CD8、酪氨酸羟化酶(TH)和MHC-Ⅱ抗原免疫组化染色。结果移植组10d时,CD4、CD8、、MHC-Ⅱ少量表达,以21d时较为明显,35d时明显减少,60d消失;10d、21d时移植区未见明显TH阳性神经元,35d后数量显著增加。阳性对照组在10d、21d时见少量CD4、CD8、和MHC-Ⅱ阳性细胞,35d时消失,各时间点都未见TH阳性神经元。阴性对照组在各时间点都未见TH阳性神经元和CD4、CD8、MHC-Ⅱ阳性细胞。PD模型移植组旋转行为35d时出现改善。结论神经干细胞脑内移植未见明显免疫排斥反应。

视网膜神经节细胞与Müller细胞共培养的方法研究

目的 建立一种简单的体外培养视网膜神经节细胞的方法。方法 采用Thy1 1单克隆抗体免疫吸附得到纯化的视网膜神经节细胞 ,将其接种于纯化培养的视网膜M櫣ｌｌｅｒ细胞上 ,在无血清培养液中共同培养。结果 视网膜神经节细胞在接种后 1d即可生长出短小的突起 ,至第 5d突起不断增长并可长出二级分支。结论 M櫣ｌｌｅｒ细胞在无血清培养液中 ,对体外培养的神经节细胞具有很好的支持营养作用。

壳聚糖作载体的神经干细胞移植修复脑损伤研究

目的:探讨壳聚糖作载体的NSCs移植及NGF的应用对大鼠TBI的修复作用。方法:用低温冷冻干燥法制备壳聚糖多孔支架。将从鼠胚前脑中分离的NSCs进行扩增,并标记BrdU。Feeney法制备SD大鼠TBI模型,随机分为3组:损伤对照组清创后不做移植;NSCs+支架移植组行壳聚糖作载体的NSCs移植;NSCS+支架+NGF移植组行壳聚糖作载体的NSCs移植,并在其中加入NGF。术后3个月在损伤区或移植区注射BDA追踪剂,行避暗回避和跳台试验。脑切片行Nissl染色、BrdU与NF-200免疫荧光双标及BDA组化染色。结果:两移植组的认知功能较损伤对照组明显改善,含NGF的移植组改善更加显著。Nissl染色见损伤对照组创伤区形成烧杯状空洞、海马萎缩变形。而两移植组创伤区有移植物填充并与宿主整合,创伤侧海马萎缩变形不明显;两移植组在移植区均可见BrdU与NF-200免疫荧光双标细胞,含NGF移植组中的双标细胞数量多、胞体大、突起多且长;BDA组化染色显示两移植组移植区内的细胞突起已延伸至宿主脑组织,含NGF的移植组向宿主脑组织延伸的突起较多。结论:大鼠TBI后行壳聚糖作载体的NSCs移植,可以改善大鼠的认知功能,NSCs可以向神经元分化并与宿主脑组织建立联系,NGF对其具有促进作用。

当归补血汤对耳蜗干细胞鼓阶内移植治疗药物性感音神经性耳聋大鼠增效作用研究

目的:观察当归补血汤对耳蜗干细胞移植治疗感音神经性耳聋大鼠增效作用。方法:感音神经性耳聋大鼠分为耳蜗干细胞移植组、当归补血汤组和空白对照组3组。体外培养耳蜗干细胞进行内耳移植,耳蜗干细胞移植组将耳蜗干细胞悬液移植入内耳耳蜗结构,当归补血汤组将含有当归补血汤的耳蜗干细胞悬液移植入内耳耳蜗结构,空白对照组移植生理盐水。分别于术后1、3、6和12个月采用听觉脑干诱发电位方法检测模型大鼠的听力恢复情况,处死大鼠,通过免疫荧光染色方法观察移植的耳蜗干细胞在内耳存活、分化和迁移情况。结果:从E14大鼠耳蜗分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化悬浮生长的Nestin阳性细胞团,Brdu表达阳性,说明是具有自我更新和增殖潜能的干细胞。免疫荧光检测发现在耳蜗干细胞移植组、当归补血汤组在移植针道两侧可见移植的干细胞,有些还迁移到基底膜区。存活的细胞部分呈My-osinⅦA阳性染色。与耳蜗干细胞移植组比较,当归补血汤组MyosinⅦA阳性染色细胞数量较多,差异有统计学意义(P<0.05)。听觉脑干诱发电位结果显示当归补血汤组的感音神经性耳聋模型大鼠听力恢复情况较耳蜗干细胞移植组和对照组好,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经体外培养的耳蜗干细胞移植入内耳鼓阶后能够存活和迁移,并分化为内耳毛细胞;当归补血汤可以提高耳蜗干细胞分化为内耳毛细胞的比例,并促进感音神经性耳聋模型大鼠听力恢复。

铝神经毒性的小鼠行为学研究

目的研究铝对小鼠神经行为学的影响,探讨其神经毒性及相关机制。方法运用脑立体定位仪,将三氯化铝直接注入小鼠脑室,观测注射后3d、5d、1w、2w及3w小鼠自主活动次数及水迷宫潜伏期的变化。结果①与对照组比较,老年组水迷宫潜伏期明显延长,5d、1w及2wP值均小于0.01,3d及3wP<0.05。②与生理盐水组及假手术组比较,成年组仅1w时自主活动次数增加(P<0.05)。结论脑室内注射三氯化铝能明显降低老年小鼠的学习记忆功能。

骨形成蛋白-2诱导脊髓神经干细胞分化的实验研究

目的:研究不同浓度的骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对脊髓源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)诱导分化成为神经细胞(神经元和神经胶质细胞)的影响.方法:取孕14d的胚胎小鼠脊髓,原代培养出脊髓NSCs.培养四代后,分别在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)存在与否的不同条件下,加入不同浓度的BMP-2,观察细胞的增殖、分化情况,用免疫组织化学的方法进行鉴定,并进行统计学分析.结果:低浓度的BMP-2(1～10ng/ml)与bFGF(20ng/ml)联合作用,可促进脊髓NSCs向神经元和星形胶质细胞分化,抑制其向少突胶质细胞分化.较高浓度BMP-2(100ng/ml)可抑制脊髓NSCs的增殖甚至导致细胞死亡.结论:脊髓NSCs在低浓度BMP和bFGF联合作用下能有效地分化成具有多种特性的神经样细胞,并与脊髓具有良好的同源性,可为脊髓损伤的修复研究提供良好的细胞学基础.

自身免疫性感音神经性聋豚鼠的子代内耳生理功能研究

目的 :观察自身免疫性感音神经性聋 (ASHL)母豚鼠所产子代内耳生理功能的变化 ,探讨针对内耳的自身免疫因素对子代内耳生理功能的影响及其改变特点。方法 :同种内耳抗原 (CIEAg)持续免疫孕豚鼠 ,采用耳蜗电图 (记录cAP、CM )和眼震电图仪 (记录自发性眼震和冷热空气试验 )测试母鼠和子鼠的听觉和前庭功能 ,并检测血清特异性体液免疫反应。结果 :ASHL模型母豚鼠所产子鼠血清中发现有特异性抗体水平升高 ,部分 (3 /9)出现听觉损伤。非ASHL母鼠和对照组母鼠所产子代未见明显异常。结论 :ASHL雌鼠所产子代可出现感音神经性聋 ,其内耳损伤和功能障碍极可能与针对内耳组织的自身免疫反应 (尤其是体液免疫 )有关 ,从而提示内耳自身免疫因素可能为部分先天性非遗传性感音神经性聋的病因之一。

重组人血管内皮抑制素靶向治疗非小细胞肺癌的分子生物学研究

目的探讨分子生学标记物与重组人血管内皮抑制素靶向治疗非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)疗效之间的关系。方法选择符合要求的非小细胞肺癌患者68例,随机均分为A组和B组,每组34例。A组采用多西他赛+顺铂(docetaxel and cisplatin,DP)及吉非替尼化疗,B组在A组化疗方案的基础上加用重组人血管内皮抑制素。采用免疫组化的方法检测表皮生长因子受体(epidermao growth factor receptor,EGFR)、KRAS基因(K-ras,p21)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、乳腺癌1号基因(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)、棘皮动物微管相关类蛋白4与间变性淋巴瘤激酶融合基因(echinoderm mierotubule-associated protein-like-4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)、核苷酸切除修复交叉互补1(excision repair cross complementing 1,ERCC1)、β-微管蛋白和分化抗原簇3(Cluster of differentiation 3,CD3)生物学标记物的表达情况。结合2组患者生物学标志物的表达情况和无进展生存期(progression free survival,PFS),统计出适合不同方案的人群类型。结果 B组的中位PFS较A组显著延长;无论VEGF和BRCA1低表达或高表达,B组的中位PFS较A组显著提高;ERCC1、KRAS、EML4-ALK和β-微管蛋白高表达,B组的中位PFS较A组有显著提高;EGFR和CD3低表达,B组的中位PFS较A组显著延长(P<0.05)。结论VEGF和BRCA1高表达或低表达,KRAS、ERCC1、EML4-ALK和β-微管蛋白高表达及EGFR和CD3低表达的非小细胞肺癌患者对DP及吉非替尼联合重组人血管内皮抑制素靶向治疗较为敏感。