抗人γ-精浆蛋白单链抗体四聚体的构建及表达

目的 构建抗γ 精浆蛋白 (γ Sm )单链抗体 (scFv) /p5 3四聚功能域 ( p5 3TD)融合基因 ,并进行真核表达和活性测定。方法 利用递归聚合酶链反应 (PCR)法扩增IgG3上游铰链区与p5 3TD融合基因 ,克隆入 pUC19载体中构建 pUC19/IgG3 /p5 3克隆载体。将抗γ SmscFv克隆入该载体中 ,构建抗γ SmscFv/p5 3TD融合基因并克隆入真核表达载体 pSecTag2 B ,转染HeLa细胞表达纯化后 ,利用流式细胞仪 (FCM )进行活性测定。结果 获得了抗γ SmscFv/p5 3TD融合基因 ,基因全长 891bp ,可编码 2 97个氨基酸。表达产物经十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western印迹实验证实为约 3 5× 10 3 的特异蛋白条带 ,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合PC 3细胞 ,亲和力高于scFv。结论 获得了可与PC 3细胞特异结合的四价抗γ SmscFv ,为进一步临床应用奠定基础。

抗前列腺特异抗原/抗人CD3双特异性单链抗体基因在HeLa细胞中的表达及亲和活性测定

目的 在HeLa细胞中表达抗前列腺特异抗原 (PSA ) /抗人CD3双特异性单链抗体(scFv)融合基因 ,并进行亲和活性测定。方法 在已经构建抗PSA/CD3双特异性scFv融合基因基础上 ,将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2 B中 ,并转染HeLa细胞进行表达。表达产物纯化后 ,用流式细胞仪进行亲和活性测定。结果 经SDS PAGE和Western印迹实验证实 ,表达产物的Mr约为 65 0 0 0。纯化后经流式细胞仪检测 ,可特异性地结合PC 3细胞和人外周血单个核细胞(PBMC)。结论 获得了可与PC 3细胞和PBMC特异结合的抗PSA/CD3双特异性scFv ,为进一步临床应用奠定了基础。