罗非鱼无乳链球菌微胶囊口服疫苗的研制及其免疫效果

为了建立罗非鱼无乳链球菌病免疫防控方法,以原核表达SIP（surface immunogenic protein）蛋白为芯材,天然多糖为壁材,制备罗非鱼无乳链球菌聚丙烯酸树脂Ⅱ微胶囊口服疫苗,SIP口服疫苗微胶囊颗粒平均直径约826.5μm,包封率为72.02%,载药量最高达6.11%。微胶囊包裹的SIP蛋白在5种缓冲液中释放效果：p H 6.80〉p H 7.20〉p H 9.18〉p H4.68〉p H 2.00。体外实验证实微胶囊颗粒在模拟胃酸环境中蛋白释放量极小,数值为395.5μg;而在模拟肠液中,释放量最高达5426.0μg,其中240 min释放量为4911.1μg,释放度达90.51%,说明微胶囊能避免胃酸的破坏且肠溶性好。SIP微胶囊口服疫苗以投喂的方式免疫＂新吉富＂罗非鱼,分别以每克罗非鱼体质量免疫5和10μg SIP蛋白的剂量分组测试,4次免疫过程中,5μg免疫剂量组特异性血清效价为100^–1~400^–1,10μg免疫剂量组特异性血清效价为200^–1~1600^–1。4次免疫后,攻毒实验表明,5和10μg的免疫剂量组的免疫保护率分别为44.45%和66.67%。研究表明,微胶囊口服疫苗免疫为罗非鱼无乳链球菌病的免疫防治提供方便、安全、有效的途径。

庆大霉素B发酵培养基的优化

对棘孢小单孢菌产庆大霉素B发酵培养基进行优化,应用Design Expert 7.0软件设计Plackett-Burman筛选实验,筛选出硝酸钾、黄豆饼粉及氯化钴三个显著影响因素,通过正交实验对其进一步优化。确定最优的发酵培养基配方为:玉米淀粉6%,葡萄糖0.5%,玉米蛋白粉2.25%,黄豆饼粉3.5%,蛋白胨0.3%,鱼粉0.1%,硝酸钾0.02%,硫酸铵0.075%,碳酸钙0.6%,氯化钴0.001%,庆大霉素B效价可达800U/m L,比原配方提高20%。