鱼精蛋白和肝素预处理ELISA检测抗双链DNA抗体的研究

目的建立一种特异性好的检测抗双链DNA抗体的ELISA。方法先用鱼精蛋白再用DNA依次包被反应板,建立鱼精蛋白包被ELISA(P-ELISA);再用肝素封闭未与DNA结合的鱼精蛋白位点,建立肝素封闭P-ELISA。用P-ELISA、肝素封闭P-ELISA和生物薄片免疫荧光法(BC-IF)对照检测了53例活动性SLE,44例非活动性SLE和27例其他AID患者的抗dsDNA抗体。结果在P-ELISA检出的57例抗dsDNA抗体阳性中,有11例(活动性SLE 5例,非活动性SLE 6例)在肝素封闭P-ELISA检测为阴性,这11例经BC-IF验证全部为阴性;而在肝素封闭P-ELISA检出的46例阳性中,仅1例(非活动性SLE)与BC-IF不符。结论肝素封闭P-ELISA可降低P-ELISA检测抗dsDNA抗体的假阳性率。

超速玻璃化法冻存小鼠肝细胞球形聚集体的初步研究

现有的肝细胞冻存法是将分散的肝细胞用于冻存.从肝组织消化分离的肝细胞,其细胞完整性和功能都会受影响.有报道用肝细胞球形聚集体培养,效果优于用分散肝细胞培养[1].玻璃化法冻存细胞组织,由于不形成冰晶,对细胞损伤较小,已成功用于冻存胚胎、卵巢、胎肝组织和脑细胞[2-5].本研究将小鼠肝细胞预培养成球形聚集肝细胞,用改进的超速玻璃化法冻存,解冻后与含胶原培养液混合、培养,通过检测培养上清液中ALT、AST、乳酸脱氢酶（LDH）浓度判断肝细胞受损漏出情况,检测白蛋白（ Alb）浓度判断肝细胞合成功能.对照组用单层贴壁培养分散肝细胞做同样冻存和检测.

口服胰岛素油溶剂的初步研究

目的 :为了研制一种不易被消化液破坏、可供口服的胰岛素制剂。方法 :用反向胶团增溶法 ,用二甲基亚砜和单油酸酯等将胰岛素包裹于亲油性胶团的亲水核心中 ,进而溶解于油酸和植物油中 ,使胰岛素得到疏水层保护 ,制成了可供口服的胰岛素油溶剂 (insulinoilsolution ,IOS)。结果 :在四氧嘧啶造成的糖尿病模型小鼠中 ,口服 11.5IU·kg-1IOS显示与皮下注射2 .5IU·kg-1普通胰岛素相似的降血糖效果。结论 :山梨醇脂肪酸酯反向胶团增溶法可以使胰岛素增溶于油酸和油中 ,制成IOS。

差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究

目的改进磁分离酶联免疫法（MEIA）。方法采取预加微量标本、将磁铁置于微孔侧壁和扣除上清液A值法，改进MEIA建立了差异磁分离酶联免疫法（DMEIA）。求DMEIA回归方程、线性范围、变异系数（CV），比较DMEIA和全自动电化学发光法（ECLIA）配对检测100份血清AFP结果差异。结果DMEIA检测AFP的回归方程Y=3．94X＋16．45，r=0．992，线性范围5～500ng／ml，批内CV=7．7％，批间CV一8．50A；DMElA和ECLIA测定血清AFP值差异无统计学意义（f检验，P〉0．05）；检测原倍高浓度AFP时（21460～501690ng／ml）两法均未出现hook效应。结论DMEIA可基本克服hook效应，可用普通微孔板和酶标仪比色，可省去洗涤，检测AFP结果接近ECLIA，但线性范围小于ECLIA。

介绍一种测定溶血的高灵敏度方法

建立灵敏度高、试剂安全测定血浆游离血红蛋白(FHb)的方法。用于各项溶血试验。其方法为设计改良Trinder反应的2,4-二氯酚(2,4-DCP)方法,并进行各项性能验证。结果显示:本法灵敏度是酚法的2.39倍,批内批间重复性好。呈色稳定,FHb参考值为1～36.7mg/L,以液体枸橼酸钠抗凝剂,保存红细胞最优。FHb2,4-二氯酚法无毒、无癌原性,适用临床及生物医学工程学的各项溶血试验。

用血浆血红蛋白评价各种采血管及其添加剂

目的通过测定游离血红蛋白(free hemoglobin,FHb)浓度以判别溶血程度。评价不同采血管及采血方式对血液溶血程度的影响。方法用新的2,4-二氯酚(2,4-DCP)法测定FHb浓度,比较用注射器采血和一次性采血针取血对血液溶血程度的影响,并比较枸橼酸钠、EDTA和肝素锂三种抗凝剂对溶血的影响。结果促凝管血清FHb浓度比肝素锂抗凝管[FHb=(25.2±5.6)mg/L]高。三种抗凝剂相比,枸橼酸钠(1:9)的血浆FHb浓度最低,FHb=(20.0±5.2)mg/L。一次性采血针FHb比注射器采血的FHb平均高25.8%。比较CG分离胶与CG促凝管,以进口BD管FHb最低。结论枸橼酸钠(1:9)抗凝剂管红细胞保存最好。促凝剂可致轻度溶血,BD管最好,分离胶管次之。各采血管3h后上升FHb浓度,24h后升高显著。

胸水胆固醇和尿酸在鉴别渗出液和漏出液中的价值

目的 探讨胸水胆固醇(Pch)浓度、胸水与血清胆固醇(Sch)浓度的比值(P/Sch)、胸水尿酸(Pua)浓 度对胸腔积液渗漏性的鉴别诊断价值。方法 对85例胸腔积液患者检测Pch和65例患者检测Pua,并计算出 P/Sch,分别研究Pch、P/Sch、Pua、胸水总蛋白(Ptpr)对胸水渗漏性诊断的受试者工作特征曲线(ROC)、灵敏度、 特异性与诊断效率。结果 Pch、P/Sch、Pua、Ptpr对胸水渗出液诊断的灵敏度分别为96.2%、90.4%、79.5%和 90.6%,特异性分别为100.0%、89.7%、61.9%和80.6%。Pch鉴别渗出液和尿酸鉴别漏出液的ROC曲线下面 积分别是0.986和0.655。结论 Pch、P/Sch、Ptpr对胸水渗出液具有较高的鉴别诊断价值,ROC亦证明Pch鉴 别渗出液和Pua监测漏出液是可行的,Pch的诊断效率最高(P<0.05)。Pua对胸水监测漏出液有一定价值,尿 酸增加表示机体抗氧化状态佳,提示预后较好。

血清亮氨酸氨肽酶在肝胆疾病与肿瘤诊断中意义

目的 探讨血清亮氨酸氨肽酶 (LAP)在肝胆疾病与肿瘤诊断中的应用价值。方法 对 82 2例临床标本采用亮氨酸对硝基酚胺法测定LAP活力。结果 肝胆系统疾病患者血清LAP活力为 64 .3± 3 9.2u/L ,与胃肠系统、血液、脑部和泌尿系统疾病均存在显著性差异。肿瘤患者LAP活力与其它疾病LAP活力存在着显著性差异 (P <0 .0 0 1) ;肝胆胰肿瘤组为 66.1± 3 5 .66u/L ,明显高于胃肠血液肿瘤组 3 5 .5 5± 2 4.3 3u/L ,P <0 .0 2有显著性差异。结论 血清亮氨酸氨肽酶与胆汁郁积的病理有关。血清亮氨酸氨肽酶活力可作为诊断肝胆系统疾病、肿瘤的一个新的辅助指标。

用邻苯三酚红钼络合法测定尿液及脑脊液蛋白

目的 寻找及建立 1种不粘附比色杯 ,灵敏度高的准确的微量蛋白自动分析法。方法 改良邻苯三酚红钼络合法。结果 其线性范围上限达 8.0 0 g/L ,回收率手工法为 89.2 %,自动法为 10 5 .6 %,有良好的精密度 (CV =6 .0 0 %) ,灵敏度为单一钨酸比浊法的 12～ 2 2倍 ,该法与单一钨酸比浊法的相关性良好 ,回归方程为Y=1.1881X - 0 .32 0 5 ,r为 0 .96 92 ,进行配对t检验 ,t=0 .40 2 ,P >0 .0 5 ,说明两法结果差异无显著性。结论 该法具有不粘附比色杯 ,又有灵敏度高、准确的优点 ,标本用量少 ,适用于自动分析 ,是值得在临床上推广的方法。

测定尿液萘酚反应物在肿瘤筛查中的应用

目的:检测尿液中α-亚硝基-β-萘酚反应物(NNR),探讨其在各种肿瘤筛查中的价值。方法:利用尿中萘酚反应物(NNR)与α-亚硝基-β-萘酚反应,选择最合适的反应条件,研究人群及各种肿瘤组尿中NNR含量的分布情况。结果:NNR在3311μmol/L范围内有良好的线性关系。肿瘤患者尿液中NNR含量与健康组相比有显著的统计学差异,尤其是胃癌、肺癌、结肠直肠癌、肝癌患者,P<0.001。健康组正常值+2SD为1091μmol/L/gCr,胃癌、肺癌、结肠直肠癌、肝癌的灵敏度分别为70%、58.5%、50%、35.7%,特异性为96.6%。结论:检测尿液中NNR对胃癌、肺癌、肝癌患者尤为敏感,可作为一种简便、低廉的肿瘤筛查方法。

尿总蛋白/肌酐的诊断界线及其临床应用

目的:探讨尿蛋白定性与定量不一致的情况下,选择评价尿总蛋白测定单位及诊断界线。方法:定性用罗氏十联试条,定量用邻苯三酚红法,用TechniconRA-XT自动生化仪测定。第1天晨尿尿蛋白定性,后24h尿总蛋白定量。结果:尿蛋白定性阴性和轻度阳性,以总蛋白肌酐比(TPCR)为200mg/gCr与以及24h尿蛋白150mg/24h比较,有相近阳性率。后者对尿量过多过少的儿童有误差,TPCR可避免儿童尿量过多过少的误差。结论:任意尿的TPCR实用、方便。

芳香酯酶测定底物探讨及临床应用评价

目的该科合成芳香酯酶(Arylester hydrolase EC 3.1.1.2,ArE)底物4-已酰氧基-3-甲氧基-ω-硝基乙烯;建立手工的和自动生化仪检测方法;评价在常见肝病中的应用.方法底物合成:香草醛加冰乙酸、乙酸铵.在乙醇溶液中用硝基四烷进行硝基化,滤取结晶.用乙酸酐进行酯化,滤取结晶,重结晶.方法建立.程序:取pH8.6Tris-HCL缓冲液2.5 ml,加血清30 ul,再加3mmol/l底物液0.4 ml,37℃10 min,加5 ml/dl正丁醇3 ml.混匀,在520nm,读取吸光度.摩尔消光系数(20345±280)A.计算:ArE U/L=971.3×A.结果反应条件:底物溶剂以甲醇13.65%为最佳.产物光吸收峰498nm,选用520 nm,吸光度达93.20%.择取pH8.6缓冲液,加0.51 mmol/L Ca2+和68.3 mmol/L Na+可提酶活力14.00%.批间CV为3.21%～4.52%.溶血、黄疸和脂血标本对ArE结果无干扰.临床应用:90例健康人ArE(470.6±49.7)U/L,参考值:＜421U/L.肝硬化、肝癌、肝炎3组ArE结果x±S,U/L分别是(266±77),(35±84)和(366±111);ROC曲线下面积分别是0.979,0.910和0.807.面积愈大诊断价值愈高,ArE愈低,肝功能愈差.尤其对肝硬化、肝癌.肝硬化组＜421 U/L阳性率为92.30%;肝癌ArE(Y)与脂碱脂酶CHE相关系数为0.909,Y=0.045X+190.53.结论ArE简便可靠.在肝硬化、肝癌、肝炎中阳性率性高,特异性好.有望成为重要常规肝功指标.

紫外线摇动灭菌法建立及在胶原溶液灭菌中的应用

背景:在已有胶原溶液灭菌方法中,微孔膜过滤和紫外线照射可不降低溶液的黏性,但紫外线只能用于表层溶液或透明管道中溶液的灭菌,限制了紫外线的灭菌效率。如果能用紫外线使一个容器中上下各液层都受照射灭菌,就可省去紫外线灭菌的循环管道,可简化操作保持灭菌蛋白特性。目的:改进紫外线灭菌法,使之适用于胶原溶液的灭菌。设计、时间及地点:体外观察实验,于2000-02/2008-06在福州市传染病医院肝病研究所完成。材料:灭菌装置由紫外灯、反光罩(可罩于摇床上)、摇床和容盘组成。方法:①容盘置于摇床上。将待灭菌的酸性胶原溶液装入容盘,液层深8～12mm。②开动紫外灯和摇床,使容盘中溶液摇动混合、暴露深层受紫外线照射。③将经照射灭菌的胶原溶液pH调为7.4,使成凝胶。主要观察指标:①胶原溶液层厚、紫外线照射时间对灭菌效果(菌落计数)的影响。②将紫外照射后的胶原溶液pH调为7.4,形成凝胶时间。结果:①液层厚8mm照射30min的胶原溶液和液层12mm照射90min的胶原溶液,经培养均显示细菌和霉菌阴性。②将用本法灭菌的胶原溶液pH变为7.4后可在1h内形成凝胶。结论:紫外线摇动灭菌法简便有效,灭菌后不影响胶原溶液成凝胶性,适用于胶原及类似蛋白溶液的灭菌。

不同的仪器标准液hCG分子变异体对hCG结果的影响

目的 探讨血清（标准物）中人绒毛膜促性腺激素（hCG）在不同的检测系统、福建省各医院的测定结果，及其与hCG相关分子变异体可能的关系。方法分别应用贝克曼Access、日本东曹（Tosh AIA-1800），在此两个免疫仪器检测系统检测不同浓度的质控物和44例患者血清的hCG；并收集福建省2007～2009年hCG质控数据、再收集文献hCG相关分子变异体检测数据进行分析。结果 同一质控物、同一血清、同一hCG相关分子变异体对不同的仪器检测系统，显示不同的测定结果，有显著差异。贝克曼Access与ToshAIA-1800线性方程为Y=1．3336X-70．199。相对而言，临床血清hCG、质控物hCG结果分别是在东曹Tosh AIA-1800（133．8％、137．2％）、雅培Abbott（132％），两仪器检测均高于贝克曼Beckmen Access（100％）。结论标准物不同的hCG分子变异体影响hCG检验结果，由于hCG分子变异体，不同的仪器产生不同的hCG检测结果。

尿红细胞镜检与试纸条隐血、UF-100尿沉渣分析的比较

目的了解尿液分析仪及UF-100与显微镜检测尿红细胞的相关性。方法分析总结2 159例健康体检妇女、507例妇科肿瘤住院患者及108例同时做UF-100尿沉渣分析和显微镜检查的尿液分析结果。结果显微镜血尿标准为镜检红细胞女性>15/μL,男性>8/μL。尿试纸条法与镜检的总符合率为58.2%。阴性标本完全符合率为73.4%,阳性标本的完全符合率为32.4%;UF-100尿沉渣分析仪与镜检完全符合率为54.6%。结论尿试条、UF-100尿沉渣分析只能作为血尿的筛查试验,显微镜检查才能提高血尿诊断的质量。

癌抗原在胸腹腔积液及相关疾病诊断与治疗中的应用

目的:探讨癌抗原125在胸腹腔积液及相关肝胆、肺及心血管疾病中的临床价值。方法:采用美国Bayer全自动化学发光免疫分析法测定健康对照组及患者血清标本的癌抗原125、癌胚抗原含量,并用日本OLYMPUS全自动生化分析仪检测相应患者血清γ-谷氨酰转肽酶的含量。结果:癌抗原125升高次序为:腹水、胸水、胸腔恶性肿瘤、心力衰竭、腹腔积液-血清、肝硬化、胸腔积液-血清、肺癌、肝癌/胆管癌。癌抗原125在胸腔积液、腹腔积液患者胸水、腹水比血清升高更显著。肺癌、肺炎患者血清癌抗原125联合测定癌胚抗原可鉴别诊断。对肝胆疾病联合测定血清癌胚抗原、γ-谷氨酰转肽酶可提高阳性率。心脑血管疾病主要是心力衰竭癌抗原125升高。结论:血清癌抗原125在良性与恶性疾病中均有升高,在胸腔积液、腹腔积液升高显著。肝硬化癌抗原125升高,肝癌癌胚抗原升高。

用膜亲和层析法纯化小鼠腹水中的单克隆抗体

目的用膜亲和层析法（ＭＡＣ）纯化小鼠腹水中单克隆抗体（ｍＡｂ）。方法采用尼龙滤膜ＺＢＭ作为介质吸附抗人血清白蛋白（ＨＳＡ），将含ｍＡｂ的腹水滤过此ＺＢＭ，再将吸附于ＺＢＭ上的ｍＡｂ解离下来，获得纯化的ｍＡｂ。结果直径５０ ｍｍ吸附了 ＨＳＡ的 ＺＢＭ，经 １０ ｍＬ腹水循环滤过两次，即可达到最大ｍＡｂ结合量。从ＺＢＭ上解离ｍＡｂ，仅需解离液滤过１次就可完成。纯化的ｍＡｈ经ＰＡＧＥ检测，只显示１条带。用纯化的ｍＡｂ做金标记斑点免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）检测ＨＳＡ标准品时，其灵敏度较用未纯化的腹水时提高了２０倍。结论用尼龙滤膜ＺＢＭ改进的膜亲和层析法，可用于纯化腹水中的单克隆抗体，且简便、省时、有效。