穿刺植入细管注射阿霉素脂质体治疗大鼠脑胶质瘤的初步研究

目的建立一种经皮向脑间质内注射药物以抑制脑胶质瘤生长的方法。方法通过埋于皮下的直通接头和带有冰套的细管经皮向SD大鼠脑内注射生理盐水(带管正常对照组);向脑胶质瘤模型大鼠脑内分别注射阿霉素(ADR)脂质体(ADR脂质体组)、ADR水剂(ADR水剂组)、生理盐水(盐水对照组);各组大鼠在注射药物后5 d、10 d分别以同法再注射一次。在末次注射药物后4 d,从后3组大鼠中各取8只大鼠测定脑肿瘤体积和血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酐(Cr)的水平。其余大鼠常规继续饲养,观察大鼠生存时间。结果治疗14 d后,ADR脂质体组大鼠肿瘤体积为(27.5±6.4)mm3,明显低于盐水对照组的肿瘤体积(57.5±6.3)mm3(P<0.05);ADR脂质体组大鼠肿瘤抑制率为(52.2±14.6)%,明显高于ADR水剂组的肿瘤抑制率(27.7±9.5)%(P<0.05);ADR脂质体组大鼠平均生存期为(42.3±8.2)d,明显长于ADR水剂组的平均生存期(29.9±4.8)d(P<0.05);ADR脂质体组和ADR水剂组大鼠的血清ALT、AST、Cr值与盐水对照组比较差异均不明显(P均>0.05)。带管正常对照组大鼠全部存活50 d以上。结论带冰套和金属芯的细管易于穿刺植入脑内,通过皮下的直通接头和脑内的细管可经皮向脑内注入药物,并明显抑制脑肿瘤生长,延长荷瘤大鼠存活时间。

纤维蛋白凝胶混合骨髓间充质干细胞局部移植治疗对肝损伤大鼠模型的影响

目的探讨用骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗肝损伤的方法。方法用冻融法从大鼠血浆或人血浆提取富含纤维蛋白原(FIG)的冷沉淀,用冷沉淀制成纤维蛋白凝胶(FG);检测冷沉淀中FIG、纤维连接蛋白(Fn)、PT、部分凝血活酶时间(APTT),第Ⅷ凝血因子(FⅧ)活性值。用大鼠的FG与MSCs混合组成FG-MSCs。体外培养FG-MSCs,采用二甲基噻唑蓝法检测MSCs增殖率。将FG-MSCs的成分Ⅰ(含FIG、MSCs)和成分Ⅱ(含凝血酶)交替注射到肝损伤大鼠肝实质组织内同一位点,一次注射量可分配到2个或更多位点,形成FG凝胶包埋MSCs。首次移植后第21和28天,同法做第2次和第3次注射。在第3次注射后7 d,称大鼠体质量;处死大鼠取血浆测ALT、TBil、Alb浓度;取肝脏称重,计算大鼠肝指数(平均肝质量/平均体质量)。两组间比较采用t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果人血浆冷沉淀中的FIG、FⅧ、Fn浓度均明显高于原血浆中的相应浓度(t值分别为9.669、12.317、9.043,P值均<0.01),但凝血活性(PT、APTT)则无明显差异(P值均>0.05)。体外培养4 d后,大鼠FG-MSCs的细胞增殖率均略高于单纯MSCs,但差异均无统计学意义(P值均>0.05)。肝损伤大鼠肝组织内注射FG-MSCs或MSCs治疗后,大鼠血浆ALT、TBil浓度明显降低(P值均<0.05),Alb浓度均明显增高(P值均<0.05)。结论将FG-MSCs或MSCs注入肝实质组织内均可明显改善肝损伤大鼠的肝功能,FG-MSCs兼可防止注射出血。

裸鼠肝包膜下输注DC-CIK细胞抑制脾内肿瘤和肝转移瘤生长的初步研究

目的建立一种肝脏靶向输注免疫效应细胞法,用于抑制脾内肿瘤和肝转移瘤生长。方法将一空心纤维垫置于接种SW480肿瘤模型裸鼠肝包膜下,形成肝包膜下人工囊腔;从人外周血单核细胞诱导出细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)和树突状细胞(dendritic cell,DC)。体外检测CIK对SW480细胞杀伤率,并使DC负载SW480细胞抗原。将共同培养的效应细胞(DC-CIK)注入模型裸鼠肝包膜下人工囊腔(A组,20只)和尾静脉(C组,20只),每只6×107个/0.3 ml;同法对20只模型裸鼠分别注入生理盐水,0.3 ml/只,并分为B组、D组各10只(作为A组、C组的对照)。每周注射2次,共注射4周。末次注射后48 h,检查比较A组和C组脾内原发肿瘤体积、抑瘤率和肝组织病理切片转移瘤灶均数。结果效靶比为60∶1时CIK对SW480细胞杀伤率为(75.3±8.42)%。CIK的CD3/CD56表达率为(36.4±13.2)%。治疗后,A组和C组的抑瘤率分别为32.07%和16.54%(P<0.05);A组和C组肝组织切片转移瘤灶均数分别为(2.47±1.02)个和(5.05±1.06)个(P<0.01)。结论裸鼠肝包膜下输注DC-CIK可明显抑制脾内肿瘤和肝转移瘤生长,抑瘤效果优于尾静脉注射DC-CIK。

肝组织内序贯注射灭活异体淋巴细胞和自体淋巴细胞治疗小鼠肝癌移植瘤的研究

目的探讨用异体淋巴细胞(heterogeneic lymphocyte,HL)和自体淋巴细胞(autogeneic lymphocyte,AL)序贯注射的抗肿瘤方法。方法取供鼠C3H小鼠脾淋巴细胞,用丝裂霉素灭活制备灭活异体淋巴细胞(inactivated HL,IHL)。在受鼠CB6F1小鼠肝组织内接种hepa1-6瘤细胞。用冻融法从小鼠血浆提取冷沉淀,制成纤维蛋白胶(fibrin glue,FG);用FG与IHL或AL组合成FG-IHL或FG-AL。前阶段:用FG-IHL注射到荷瘤受鼠肝内肿瘤接种部位治疗(实验组);用FG-PBS同法注射受鼠肝内肿瘤接种部位作为对照组。而后检测两组受鼠的脾淋巴细胞杀瘤细胞率和脾淋巴细胞、CD8^+T淋巴细胞、NK细胞数量等免疫学指标。后阶段:从实验组、对照组中随机选出部分受鼠,取淋巴细胞制成FGAL,将各组FG-AL分别注射到本组其余受鼠的肝内肿瘤接种部位;治疗后剥出受鼠肝内肿瘤,比较两组的瘤体积和抑瘤率。结果前阶段治疗后,实验组受鼠AL的杀瘤细胞率为(25.7±4.81)%,明显高于对照组AL的相应值(E∶T=60∶1,P<0.01);实验组受鼠脾淋巴细胞、CD8^+T细胞和NK细胞数量均明显高于对照组的相应值(均P<0.05)。经前、后两阶段治疗后,实验组受鼠的瘤平均体积为(1.15±0.25)cm^3,明显小于对照组的瘤平均体积为(1.91±0.37)cm^3(P<0.01);实验组的抑瘤率为39.8%(以对照组作基准)。结论肝组织内肿瘤局部注射IHL,再注射AL的序贯疗法,可明显抑制小鼠移植肝肿瘤生长,有望成为一种抗肿瘤生物疗法。

盐析冻融法提取肝炎患者血浆冷沉淀的初步研究

目的改进血浆冷沉淀提取方法,并用于提取患者血浆冷沉淀用于回输治疗。方法取重型肝炎患者血浆200 mL,加入与血浆等量的无菌半饱和NaCl溶液,置-30℃冰冻48 h以上(或-80℃,6 h)。然后将冰冻血浆置4℃水浴溶化,4℃下500×g,离心10 min,弃上清留沉淀;在沉淀物中加ACD液重溶至20 mL,即为冷沉淀溶液。检测血浆和相应冷沉淀溶液中Na^+、Cl^-、纤维蛋白原(FIG)、纤维连接蛋白(Fn)、Ⅷ因子、PT、ATPP值。结果冷沉淀溶液中Na^+、Cl^-浓度比血浆中高2~3倍;FIG、Fn和Ⅷ因子含量分别比血浆中高7倍多和近9倍;冷沉淀溶液的PT、ATPP值均比血浆的值降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐析冻融法可用于提取肝炎患者血浆冷沉淀,但提取的冷沉淀需经适当稀释才可用于回输。

异体淋巴细胞和自体淋巴细胞序贯局部注射对小鼠肝癌移植瘤的治疗作用

目的探讨用异体淋巴细胞(Heterogeneic lymphocyte,HL)和自体淋巴细胞(Autogeneic lymphocyte,AL)序贯注射的抗肿瘤作用。方法用CC3HF1小鼠作供鼠,制备异体淋巴细胞(HL);用CB6F1小鼠作受鼠,在受鼠腹股沟皮下组织内接种Hepa1-6细胞。用冻融法从小鼠血浆提取冷沉淀,制成纤维蛋白胶(Fibrin glue,FG);用FG与HL或AL组合为FG-HL或FG-AL。实验治疗分两个阶段。前阶段(共15 d):用FG-HL注射到受鼠荷瘤组织表面(实验组);用FG-磷酸盐缓冲液(FG-PBS)同法注射受鼠作对照组。而后检测两组受鼠的脾淋巴细胞杀瘤细胞率和脾淋巴细胞、CD8+T、NK细胞数量等免疫学指标。后阶段(共10 d):从实验组、对照组中随机选出部分受鼠,取淋巴细胞(AL)组成FG-AL分别注射到本组其余受鼠的荷瘤组织表面;治疗后剥出受鼠体内肿瘤,比较两组的瘤体积和抑瘤率。结果前阶段治疗后,实验组受鼠AL的杀瘤细胞率(26. 70±7. 22)%明显高于对照组AL的相应值(5. 70±2. 68)(P <0. 01);实验组受鼠脾淋巴细胞、CD8+T细胞和NK细胞数量均明显高于对照组的相应值(P <0. 05)。两阶段治疗结束后,实验组受鼠的瘤平均体积(1. 20±0. 33) cm^3明显小于对照组的瘤平均体积(2. 05±0. 37) cm3(P <0. 01);实验组的抑瘤率为41. 5%。结论肿瘤局部注射FG-HL,再注射FG-AL可明显抑制小鼠移植瘤生长,有望成为一种抗肿瘤生物疗法。

猪胰岛移植于大鼠肝包膜下人工囊腔治疗糖尿病的研究

目的建立一种新的免疫隔离法用于将猪胰岛移植于大鼠肝包膜下人工囊腔，并观察其治疗糖尿病大鼠的效果。方法用链脲霉素诱导建立大鼠糖尿病模型。用V型胶原酶消化猪胰腺，梯度离心法分离纯化猪胰岛。检测纯化猪胰岛的胰岛素刺激指数。取18只糖尿病大鼠和6只正常大鼠，手术暴露大鼠肝脏，从肝叶一侧边缘切开并分离肝包膜，将人工囊腔（纤维素酯透析袋，袋内置一中空纤维球，袋两端用线扎紧）两端从肝包膜切口分别塞入两边肝包膜下，囊腔两端连线从肝叶对侧边缘肝包膜开孔穿出并相互连接，绑于肝叶；使囊腔平铺在肝实质表面，中段含纤维球部分位于皮下肝包膜切口问。将含胰岛（4000IEQ）的胶原溶液（pH7．4）注入糖尿病大鼠肝包膜下人工囊腔，作为实验组（n=12）；将不含胰岛的胶原溶液注入糖尿病大鼠（糖尿病对照组，n=6）或正常大鼠肝包膜下人工囊腔（正常对照组，n=6）。缝合切口（囊腔中胶原溶液变成胶原凝胶）。首次移植后8周，实验组各大鼠再经皮向肝包膜下人工囊腔注射胰岛（2000IEQ）悬液1次。各组大鼠每周断尾取血检测空腹血糖值。结果纯化猪胰岛的胰岛素刺激指数为2．2±0．2。首次移植后1～8周，实验组大鼠各时间点空腹血糖值明显低于糖尿病对照组大鼠（P〈0．01）。首次移植后13周，肉眼观察大鼠肝包膜下人工囊腔周围，未见明显纤维组织增生。结论纤维素酯透析袋植入肝包膜下13周对周围组织没有明显刺激。猪胰岛在大鼠肝包膜下人工囊腔中可受到免疫隔离，并正常生长，发挥降血糖功能。可经皮注射将猪胰岛移植于大鼠肝包膜下人工囊腔。