精子特异性乳酸脱氢酶LDH-C4研究进展

自从1963年Goldberg等在多种哺乳动物、鸟类睾丸组织和精子中发现精子特异性乳酸脱氢酶C4（LDH—C4）以来。国内外对其分布的特异性及其与性成熟、生育过程的密切关系作了深入研究。近20年来。LDH—C4一直作为避孕疫苗的重要候选对象之一。受到国内外学者的关注。现就将近年来有关LDH—C4研究进展简要综述如下。

遗传病的蛋白质组学研究

早在人类基因组计划完成之前，科学工作者就已发现单纯用基因组学的方法来研究有机的生命体。不再满足科学发展的需要。主要原因是蛋白质是生物功能的执行者。它虽是基因的产物，但蛋白质的修饰加工、结构变化、蛋白质间的相互作用，以及蛋白质与其他生物大分子间的相互作用等，均无法在基因组的水平上获得满意的解释。因此有必要从蛋白质的整体水平来解释生命现象，从而推动了蛋白质组学（Proteomics）的产生及发展。随着蛋白质组学研究的深入及应用的推广。对它的技术也提出了更高的要求。因此近年来蛋白质组技术取得了长足的进步。

肾上腺脑白质营养不良的产前分子诊断

肾上腺随白质营养不良（adrenoleukodystmphy，ALD）是一种主要侵犯大脑白质、肾上腺等器官的X-连锁隐性遗传病。根据临床表现和发病时间，可将ALD分成儿童随型、肾上腺脊髓神经病型等7种表型。各型的共同特征是极长链饱和脂肪酸（very long chain fatty acids,VLCFA）在体内蓄积，引起大脑白质脱髓鞘、肾上腺功能不全等病理改变。其致病基因定位于染色体xq28，称ABCD1基因。ALD的病程呈进行性发展，预后不良，尤以儿童大脑型为甚，患者发病后的平均生存时间仅为3年左右。到目前为止，对ALD尚无效果确切的治疗手段，也无法逆转中枢神经系统损害。因此，对ALD携带者所怀胎儿进行产前诊断。防止携带ABCD1突变的婴儿出生，提高人口素质，有重要的意义。我们于2003年和2004年分别对2个ALD家系实施了产前分子诊断。

男性生精障碍的细胞遗传学和分子遗传学检测

目前有不少的研究发现不育男性有一部份与“Y染色体精子生成基因”即无精子因子（azoospermia factor AZF）的微缺失和染色体异常有关。为了证实和探讨这类缺陷在无精子症及少精子症患者中的发生率，为临床提供治疗和遗传咨询的参考。我们对91例无精子症和42例严重少精子症患者外周血进行DNA提取并采用多重PCR技术。对AZF区4个亚区的8个序列标签位点（sequence taggedsites,STSs）：AZFa区sY84、sY86。AZFb区sY127、sY134、sY129。AAZFc区sY254、sY255。AZFd区sY152及SRY基因，以ZFX／ZFY为内对照，进行微缺失检测，同时进行外周血染色体核型分析。综合判断分析遗传性缺陷在无精子及严重少精子症患者发病中的作用。

扩增阻滞突变系统在脊肌萎缩症快速诊断中的应用

儿童进行性脊髓肌肉萎缩症，简称脊肌萎缩症（spinal muscular atrophy，SMA），是一种以脊髓前角运动细胞变性为病理特征，临床上以近端肌无力、肌萎缩为主要表现的常染色体隐性遗传性疾病。根据SMA发病年龄和病程的不同将其分为三型：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。该病的致病基因称运动神经元生存基因，即SMN基因（survival motor neuron gene），它在染色体5q区域内存在2个同源拷贝，即位于端粒端的SMN1和位于着丝粒端的SMN2，两者在编码区内仅存在1个碱基的差异，即位于第7外显子上的840位碱基在SMN1为C，

人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及其免疫效果的初步鉴定

人精子特异性乳酸脱氢酶（hLDH—C4）具有组织器官特异性及较强的免疫原性。多项研究表明其诱导的免疫反应在多种哺乳动物具有抗生育性：在血清中都检测到抗LDH—C4的抗体。动物的生育率明显降低。且作用可逆。LDH—C4作为疫苗用于免疫生育调节一直受到关注。作者构建了精子特异性乳酸脱氢酶真核表达载体pVAX1-hLDHC4，并用该载体免疫BAIB/c小鼠，观察了其诱导的体液免疫反应，现报告如下。

人甲胎蛋白基因启动子驱动siRNA表达载体的构建及其在HepG2细胞中RNA效应的初步鉴定

目的:探索基于人甲胎蛋白基因启动子构建的siRNA表达载体介导目的基因RNA干扰的可行性,为实现肝癌细胞靶向RNAi治疗作一初步研究。方法:PCR法扩增获得人甲胎蛋白基因启动子并插入pSilencer1.0-U6中以置换其U6启动子;依据人hLRH-1基因RNAi靶位点设计出siRNA模板DNA,体外合成相应寡核苷酸片段后经退火形成短双链,再克隆构建成靶向人hLRH-1基因siRNA表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入HepG2细胞中,实时定量RT-PCR法初步分析所建系统在AFP表达细胞中触发靶基因hLRH-1的RNAi效应,以及hLRH-1调控下游靶基因的表达改变。结果:获得人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体pSiAFP。以人hLRH-1为报告基因,本研究发现所建的RNAi载体系统可在表达AFP的细胞HepG2中有效诱导靶基因表达下调,抑制率约达85%;同时引致hLRH -1调控下游靶基因CyclinE1与Oct4的表达相应下调。结论:人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体可在表达AFP的细胞HepG2中有效介导靶基因的RNAi效应,为临床肝癌细胞靶向的基因特异性RNAi治疗提供了初步的实验依据。