应用SS-PCR技术建立番石榴实蝇快速鉴定方法

应用种特异引物PCR(Species-specific PCR, SS-PCR)技术,基于mt DNA COⅠ线粒体基因系列,设计了1对能够准确鉴定番石榴实蝇Bactrocera(Bactrocera)correcta(Bezzi)的种特异性引物FR447和FF463-486,选用番石榴实蝇作为阳性对照,以杨桃实蝇B.carambolae Drew&Hancock等其他19种实蝇作为阴性对照,进行PCR扩增并将PCR产物进行电泳检测。结果表明:仅番石榴实蝇能够在约645 bp位置扩增出1条清晰且单一的目的条带。将本实验建立的SS-PCR鉴定方法应用在实际检疫工作中,得到了验证。

降低中华绒螯蟹体内镉含量的安全养殖模式研究

为探讨降低该地区存在的养殖河蟹Eriocheir sinensis体内重金属镉含量超标问题,根据河蟹污染的溯源分析,通过改变河蟹不同养殖阶段的饵料(螺蛳、小杂鱼等)结构,调整饲养模式(网箱养殖),降低河蟹体内Cd含量,确保其Cd含量符合国家标准。本文的安全养殖模式为:1—2月大湖养殖,每667m2投放100~200只/kg的长江系幼蟹2 kg;1—4月投喂螺蛳,4月兼投少量小杂鱼,5—11月投喂小杂鱼;1—8月自然水底养殖;9—11月期间,在上市前1个月进行网箱养殖。2016年和2017年跟踪监测显示:该模式养殖的河蟹体内Cd含量均符合国家标准。

基于mt DNA COⅠ设计种特异性引物快速鉴定具条实蝇

具条实蝇(Bactrocera scutellata Hendel)为我国进境植物检疫性有害生物,为探索其快速鉴定技术,基于mt DNA COⅠ设计一对能够准确鉴定具条实蝇的种特异性引物JF190和JR386,以具条实蝇作为阳性对照,颜带实蝇(B.cilifer Hendel)、黑颜实蝇(B.diaphora Coquillett)和黑膝实蝇(B.scutellaris Bezzi)等20种实蝇作为阴性对照,进行PCR扩增后将其产物进行电泳检测。结果表明,仅目标种具条实蝇能够在约197 bp扩增出一条单一且清晰的的条带。说明本研究建立的方法特异性强,鉴定快速,且在实际检疫鉴定工作中已得到验证,适用于实蝇的快速鉴定和疫情监测。

副结核分枝杆菌MAP0862蛋白的重组表达及抗原性分析

为了验证MAP0862蛋白在副结核分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,试验以从发病山羊消化道病料中提取的副结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆MAP0862基因并构建重组表达载体pET28a-MAP0862,然后对其进行诱导表达及Western-blot分析。结果表明:检测到的羊副结核分枝杆菌MAP0862基因与GenBank中K10菌株基因完全相同;重组表达载体pET28a-MAP0862经IPTG诱导表达出约40 ku的目标蛋白,与预期结果相符;Western-blot对比分析显示, MAP0862蛋白只与羊副结核阳性血清发生显色反应。说明MAP0862蛋白具有良好的免疫反应原性和特异性。