榄香烯乳诱导线粒体凋亡途径逆转肺癌A549/DDP细胞株耐药

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌耐顺铂(cisplatin,DDP)细胞A549/DDP的耐药性及作用机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与DDP合用时耐药逆转作用。荧光探针JC-1结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化。DCFH-DA荧光探针结合流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。用谷胱甘肽试剂盒结合分光光度法检测计算GSH/(GSSG+GSH)比值。蛋白质印迹法检测胞质中Cyto C、Pro-caspase-3、Caspase-3和Bcl-2家族蛋白表达情况。结果:不同浓度榄香烯乳抑制A549/DDP细胞株生长,呈时间-剂量依赖性效应,联合顺铂能提高A549/DDP细胞株对顺铂的敏感性而逆转耐药。不同浓度榄香烯乳联合顺铂使A549/DDP细胞株线粒体膜电位下降,ROS浓度增加,GSH/(GSSG+GSH)比值降低,上调胞质中Cyto C、Caspase-3、Bad蛋白表达,下调Pro-caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结论:榄香烯乳逆转A549/DDP细胞株耐药性可能与其损伤线粒体膜,活化胞内氧化还原体系,诱导线粒体凋亡路径有关。

榄香烯乳剂对肺癌A549/DDP细胞株耐药逆转作用及其机制

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药性及其机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与顺铂(cisplatin,DDP)合用时耐药逆转作用;采用流式细胞术检测榄香烯乳对A549/DDP细胞内罗丹明-123(rhodamine-123,Rh123)蓄积的影响;采用Western blot检测榄香烯乳对耐药细胞A549/DDP细胞膜上P-gp蛋白表达的影响。结果:不同浓度榄香烯对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应。单用DDP的IC50为15.46μg/ml,合用20μg/ml榄香烯24h,IC50为4.15μg/ml,逆转耐药倍数为3.63。同时,榄香烯增加A549/DDP细胞内Rh123的蓄集,降低细胞膜上Pgp的表达,且呈剂量依赖性,表明榄香烯能减少A5 4 9/DDP细胞对药物的外排和抑制P-gp蛋白的表达。结论:榄香烯在体外逆转肿瘤细胞耐药性可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。

榄香烯乳逆转肺腺癌A549/DDP细胞耐药性及可能作用机制的研究

目的 :探讨榄香烯乳(elemene)逆转人肺腺癌耐顺铂(cisplatin,DDP)细胞A549/DDP的耐药性及可能的作用机制。方法 :采用MTT法检测榄香烯乳单药作用时的细胞毒作用及与DDP联合作用对A549/DDP细胞耐药的逆转作用;Hoechst 33342法进行细胞核染色,荧光显微镜下观察细胞形态的改变;FCM检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞质中细胞色素C(cytochrome C,cyt C)、pro-caspase-3、caspase-3和抗凋亡因子B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)家族蛋白表达的情况。结果 :不同浓度榄香烯乳对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应,联合DDP能提高耐药细胞株A549/DDP对DDP的敏感性而逆转其耐药性。Hoechst 33342法和FCM法检测结果显示,榄香烯乳联合DDP能更大程度上诱导A549/DDP细胞的凋亡,提高耐药细胞的凋亡率,同时还上调A549/DDP细胞质中cyt C、caspase-3和Bad蛋白的表达,而下调pro-caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。结论 :榄香烯乳能逆转A549/DDP细胞耐药性可能与其损伤线粒体膜,使线粒体释放cyt C到细胞质、同时活化caspase-3、上调促凋亡蛋白Bad和下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达以启动凋亡路径有关。