狗脊多糖调控lncRNA NEAT1延缓椎间盘终板软骨细胞衰老的作用研究

目的:探讨狗脊多糖通过调节lncRNA NEAT1延缓椎间盘终板软骨细胞衰老的作用机制。方法:将15只C57BL/6小鼠的椎间盘终板软骨细胞进行体外培养;经10 ng·mL-1白细胞介素-1β(IL-1β)干预24 h诱导软骨细胞;将软骨细胞随机分为空白对照组、模型对照组(10 ng·mL-1IL-1β)和狗脊多糖各剂量组(100,200,400μg·mL-1);Real-time PCR及Western blot分别检测狗脊多糖对IL-1β诱导软骨细胞lncRNA NEAT1、衰老相关通路p53-p21中p53、p21水平及衰老相关分泌表型的基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、CollagenⅡ、Caspase-3蛋白表达情况;流式细胞术检测各组软骨细胞凋亡率情况。结果:Real-time PCR结果显示,经IL-1β诱导的椎间盘终板软骨细胞中lncRNA NEAT1、p21、p53水平显著增高;与模型对照组比较,狗脊多糖各剂量组lncRNA NEAT1、p21、p53水平显著降低;与空白对照组比较,经IL-1β诱导的椎间盘终板软骨细胞中MMP-13、Caspase-3蛋白表达含量显著增高,CollagenⅡ蛋白表达降低;经狗脊多糖干预后,可显著改善MMP-13、CollagenⅡ、Caspase-3蛋白表达;此外,与模型对照组比较,狗脊多糖各剂量组椎间盘终板软骨细胞凋亡率呈现下降趋势。结论:狗脊多糖通过调控lncRNA NEAT1影响p53、p21、MMP-13、CollagenⅡ、Caspase-3表达,降低软骨细胞凋亡率,进而延缓椎间盘终板软骨细胞衰老。

基于“肾主骨生髓通于脑”理论探析膝骨关节炎疼痛的神经调控

膝骨关节炎是一种以关节软骨、软骨下骨、滑膜病变为表现的慢性、退行性关节疾病,疼痛是其首发症状及主要就诊原因。肾气不足,导致骨、髓、脑三者功能紊乱,可引发膝骨关节炎局部病变及中枢神经环路的病变。肝肾亏虚、筋骨失和,骨髓化生乏源、骨失所养,无力生髓养脑、神经环路功能紊乱,可引发疼痛。因此,文章在“肾主骨生髓通于脑”理论指导下,以肾-骨-脑轴为切入点,从膝骨关节炎疼痛的神经调控入手,探析膝骨关节炎疼痛的神经调控机制,旨在丰富“肾主骨生髓通于脑”理论的科学内涵,为膝骨关节炎疼痛的中西医结合临床治疗提供新策略。

从“髓充骨”理论初探干细胞归巢改善绝经后骨质疏松症骨代谢紊乱的机制

绝经后骨质疏松症是全身性骨代谢紊乱性疾病,属中医学“骨痿”范畴,病在骨,本在肾。“髓充骨”源于《黄帝内经》,肾藏精、精生髓、髓充骨;女子增龄衰老,肾虚髓亏,骨髓生化乏源,骨失所养,则为骨痿。骨髓间充质干细胞属中医学“精”“髓”范畴,是骨髓中的重要细胞群之一,具有多向分化潜能,能分化为成骨细胞,参与调节骨形成-骨吸收耦联,在绝经后骨质疏松症病理过程发挥重要的调节作用。基于中医“髓充骨”理论,探讨肾、精、髓、骨在骨痿过程中的作用,并阐释精、髓现代内涵及骨髓间充质干细胞在绝经后骨质疏松症骨代谢紊乱中的角色,为临床治疗绝经后骨质疏松症提供新的防治策略。

褪黑激素治疗骨关节炎的作用研究探析

骨关节炎是一种常见的退行性全关节疾病,其发病机制为软骨细胞密度降低、细胞外基质合成与分解代谢失衡、异常炎症信号转导和过度氧化应激反应。褪黑激素及其衍生物是一种高效的自由基解毒剂和广谱抗氧化剂,具有抗氧化、抗炎症反应和抗衰老作用,通过调节多种分子信号,能够针对骨关节炎的发病机制发挥保护作用。总结褪黑激素介导其作用对骨关节炎发病机制的影响,旨在为褪黑激素临床治疗骨关节炎提供支持。

透骨消痛胶囊抑制大鼠骨关节炎软骨退变的实验研究

目的:探讨透骨消痛胶囊抑制骨关节炎软骨退变的机制。方法:将30只2月龄SPF级SD雄性大鼠按照随机数字表法分为空白对照组(10只)和模型组(20只)。模型组采用改良Hulth法建立大鼠骨关节炎模型,按照随机数字表法分为模型对照组和透骨消痛胶囊组,每组10只。透骨消痛胶囊组用透骨消痛胶囊溶液(10 mL·kg^-1·d^-1)灌胃,空白对照组、模型对照组连续等剂量生理盐水灌胃,持续12周。观察大鼠股骨髁软骨的整体形态学变化情况,另使用HE染色和甲苯胺蓝染色观察大鼠软骨形态结构及软骨蛋白多糖的表达,并用ELISA法检测滑膜组织中炎症相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β),以及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平。结果:HE染色结果表明,空白对照组关节软骨表面光滑平整,软骨细胞排列规则,层次清晰;模型对照组软骨表面粗糙,软骨细胞排列紊乱,软骨细胞异常分化;透骨消痛胶囊组关节软骨表面比模型对照组完整,层次较为清晰,软骨细胞形态较好。甲苯胺蓝染色显示,空白对照组软骨染色呈紫红色,染色较深且均匀;模型对照组软骨染色明显变浅;透骨消痛胶囊组软骨染色较模型对照组深,染色相对均匀。ELISA法检测结果显示,模型对照组滑膜组织中TNF-α、IL-1β、MMP-13水平均高于空白对照组(P <0.05),透骨消痛胶囊组低于模型对照组(P <0.05),透骨消痛胶囊组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:透骨消痛胶囊能有效抑制炎症反应所引起的关节软骨退行性病变,延缓骨关节炎病理进程。

荣筋拈痛方对膝骨关节炎大鼠软骨组织Beclin1及LC3B表达的影响

目的:观察荣筋拈痛方对膝骨关节炎大鼠软骨组织自噬的影响,探讨其防治膝骨关节炎的作用机制。方法:将24只SD大鼠按照随机分层法分为假手术组、模型对照组、荣筋拈痛方组,每组8只。除假手术组外,其他组采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型。给药12周后,从假手术组和模型对照组中随机抽取3只大鼠拍摄膝关节MRI,观察模型是否成功。采集大鼠膝关节组织,HE染色法观察软骨组织形态结构,采用Mankin病理评分对关节软骨进行组织形态学评分;免疫组织化学法观察软骨组织酵母自噬相关基因6同源物(Beclin1)及微管相关蛋白Ⅰ轻链3B(LC3B)的定位与表达。结果:MRI显示,假手术组关节间隙正常,关节面平整;模型对照组关节间隙增宽,关节软骨面不平整、局部缺损,结缔组织增生,骨赘形成。荣筋拈痛方组大鼠骨关节炎模型关节软骨的大体外观及HE染色均改善明显,Mankin软骨评分高于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。荣筋拈痛方组自噬蛋白Beclin1及LC3B表达均呈上升趋势。结论:荣筋拈痛方可能通过提高自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达,改善软骨细胞状态,延缓关节软骨退变。

比较3种形态学方法观察成骨细胞矿化结节的应用价值

背景:矿化结节是成骨细胞分化成熟的标志,以往观察方法多采用茜素红等特殊染色法。目的:比较茜素红染色-光镜、四环素荧光标记-激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜3种形态学观察成骨细胞矿化结节的方法,分析各自的特点及在骨病研究中的应用价值。方法:将大鼠成骨细胞株UMR-106正常培养、每天换液,连续培养14 d,分别采用茜素红染色-光镜、四环素荧光标记-激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜观察矿化结节的形态结构,并利用扫描电镜结合能谱仪原位定量分析钙元素;此外,在培养中加入可抑制成骨细胞增殖、分化的肿瘤坏死因子α作为对照实验。结果与结论:3种观察方法均可观察到正常成骨细胞矿化结节的形态结构。对于肿瘤坏死因子α抑制成骨细胞产生矿化结节的情况,经茜素红染色-光镜观察法,未见明显的矿化结节;而四环素荧光染色-激光扫描共聚焦显微镜观察法,可见清晰、稀少的矿化结节;扫描电镜观察法明显可见较少而细小的矿化结节,提示后二种方法灵敏度较高。此外,扫描电镜可将观察成骨细胞分泌钙质、形成矿化结节的亚细胞结构,与能谱元素分析结合,可实现矿化结节的定位与定量,在骨病研究中值得推广应用。

独活寄生汤抑制炎症介导软骨细胞基质降解的机制研究

目的:探讨独活寄生汤抑制炎症介导软骨细胞基质降解的机制。方法:取4周龄SD大鼠10只,采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法建立软骨细胞体外培养体系。在光学显微镜下观察软骨细胞形态,用Ⅱ型胶原免疫组化鉴定软骨细胞。将第2代软骨细胞随机分为空白对照组、模型对照组、中药组,3组均连续干预培养8 h。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测干预后各组软骨细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。采用Western blot检测干预后各组软骨细胞中蛋白多糖1(PGS1)、基质金属蛋白酶(MMP)-13、MMP-9、MMP-3、蛋白聚糖酶(ADAMTS)-4、ADAMTS-5蛋白表达量。结果:①软骨细胞免疫组化鉴定:第2代软骨细胞胞浆呈棕黄色,细胞核不着色,具备软骨细胞的典型特征。②ELISA检测结果:与空白对照组比较,模型对照组IL-1β、TNF-α含量明显升高(P < 0.05);与模型对照组比较,中药组IL-1β、TNF-α含量均明显下降(P < 0.05)。③Western blot法检测结果:与空白对照组比较,模型对照组PGS1蛋白表达量明显降低(P < 0.01),MMP-13、MMP-9、MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5蛋白表达量均明显升高(P < 0.01或P < 0.05);与模型对照组比较,中药组PGS1蛋白表达量明显升高(P < 0.05),MMP-13、MMP-9、MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5蛋白表达量均明显降低(P < 0.05)。结论:独活寄生汤可以通过调控IL-1β、TNF-α、PGS1、MMP-13、MMP-9、MMP-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5表达,明显抑制脂多糖介导软骨细胞的炎症反应,改善软骨细胞基质稳态失衡,从而延缓软骨退变。

乌头汤对脂多糖诱导大鼠软骨细胞炎症反应的影响

目的:基于核转录因子-κB(NF-κB)炎症相关信号通路,观察乌头汤水提物对脂多糖(LPS)诱导体外培养软骨细胞炎症模型的影响。方法:①制备乌头汤水提物;②分离、培养软骨细胞;③噻唑蓝(MTT)法检测乌头汤对LPS诱导软骨细胞活性的影响;采用Western Blot法检测NF-κB p65、IκB激酶复合物(IKK)、磷酸化核因子κB抑制蛋白(pIκB)含量表达。结果:①MTT实验结果显示,乌头汤水提物对LPS诱导软骨细胞的最佳干预时间和浓度分别为24 h和150 μg·mL^(-1);②Western Blot检测结果显示,乌头汤水提物100 μg·mL^(-1)组、150 μg·mL^(-1)组、200 μg·mL^(-1)组对LPS诱导的软骨细胞干预24 h后,可调节与炎症相关的NF-κB p65、IKK、pIκB含量表达,尤其以乌头汤水提物150 μg·mL^(-1)组变化显著(P<0.01)。结论:乌头汤通过降低LPS诱导的软骨细胞中与炎症相关的NF-κB途径调节因子含量表达,发挥抗炎作用。

透骨消痛胶囊干预骨质疏松性骨关节炎模型骨重建与炎症因子变化的研究

目的:分析透骨消痛胶囊对骨质疏松性骨关节炎模型骨重建与炎症因子的影响,为治疗骨质疏松性骨关节炎提供依据。方法:建立骨质疏松性骨关节炎大白兔模型,取模型兔与正常对照兔各6只比较,鉴定造模成功。再将正常对照组与模型对照组大白兔各12只用生理盐水灌胃,中药组大白兔12只用透骨消痛胶囊灌胃;维持4,8周时,每组各6只取材,检测血清骨重建关键因子、骨形成与骨吸收标志物以及股骨髁炎症因子蛋白。结果:中药组与模型对照组比较,碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶和骨保护素(OPG)、破骨细胞异化因子(RANKL)活性显著降低,OPG/RANKL比值显著升高(P <0.05或P <0.01);白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α显著降低(P <0.01或P <0.05)。结论:透骨消痛胶囊能下调过度的骨重建速率,调节异常骨代谢水平,降低炎症因子水平,改善骨关节的软骨下骨与软骨变化,延缓骨质疏松性骨关节炎进程。

补肝肾、强筋骨类中药活性成分对软骨细胞增殖作用机制研究进展

骨关节炎病位在体为筋骨,在脏为肝肾,两者相辅相成;肝肾相济则骨坚筋强,肝肾不足则骨痿筋弱。研究表明临床运用补肝肾、强筋骨类中药,可促进软骨细胞增殖,延缓软骨退变,但其具体作用机制尚不明确。故以补肝肾、强筋骨类中药及相关活性成分促进软骨细胞增殖为切入点,查阅文献并综述认为,其作用机制可能与促进细胞外基质合成、调控细胞周期相关蛋白、促进转化生长因子-β相关受体表达、调控细胞外调节激酶、Wnt信号通路及miRNA有关,可为进一步研究中药靶向治疗骨关节炎提供思路。

从筋骨的力学特性探讨膝关节软骨-软骨下骨稳态失衡的生物力学机制

筋骨系统是维持膝关节稳定的核心因素,也是维持人体力学平衡的关键因素。各种因素引起膝部的筋骨失稳,可导致人体下肢生物力学承载模式发生改变,引起膝关节局部的应力失衡;异常的关节机械环境也可以启动细胞介导的过程,在生物力学与生物学的共同作用下,引起软骨退变与软骨下骨重塑异常,是膝骨关节炎的病理特征。因此,从筋骨的力学特性,以筋骨互用为切入点,梳理国内外文献,探讨膝关节软骨-软骨下骨稳态失衡的生物力学机制,旨在丰富中医筋骨理论的科学内涵。

升麻素苷治疗膝骨关节炎的作用机制研究

膝骨关节炎的治疗以改善临床症状、延缓疾病进展为主要策略。升麻素苷具有抗炎、镇痛、解热,以及抗血小板聚集等多种药理活性作用,可以通过抑制炎症反应,抗氧化作用,抑制基质金属蛋白酶的表达等,缓解膝骨关节炎的炎性症状,干预其病理进程。升麻素苷对细胞周期的调节作用,对核转录因子-κB信号通路和丝裂原活化蛋白激酶信号通路调控机制,尚有待进一步研究。

荣筋拈痛方对白细胞介素-1β诱导的体外大鼠软骨细胞自噬相关基因表达的影响

目的:观察荣筋拈痛方对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的体外大鼠软骨细胞自噬相关基因表达的影响,探讨其防治膝骨关节炎的作用机制。方法:取4周龄SD大鼠膝关节软骨,进行软骨细胞的体外分离培养,选取第2代软骨细胞甲苯胺蓝染色进行细胞鉴定。经IL-1β 10 ng·mL^(-1)诱导建立体外软骨细胞炎症模型,诱导成功后,给予荣筋拈痛方(50,100,200 μg·mL^(-1))孵育48 h。将细胞分为空白对照组,模型对照组,荣筋拈痛方低、中、高剂量组。分别采用CCK-8法检测荣筋拈痛方对软骨细胞活性的影响,qPCR法检测软骨细胞中LC3Ⅱ、Beclin 1的mRNA表达,Western Blot法观察自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin 1的蛋白表达水平。结果:与模型对照组比较,荣筋拈痛方低、中、高剂量组均显著提高细胞活力,呈剂量依赖性增加(P < 0.01);模型对照组较空白对照组LC3Ⅱ、Beclin 1的mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1的蛋白表达水平升高(P < 0.05);经100 μg·mL^(-1)荣筋拈痛方干预后LC3Ⅱ、Beclin 1的mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1的蛋白表达水平降低(P < 0.05)。结论:荣筋拈痛方可能通过抑制自噬水平,从而具有延缓膝骨关节炎退变的作用。

高血压大鼠脑组织病理形态特征的初步研究

目的观察6周龄自发性高血压大鼠(SHR)、17周龄SHR及正常京都纯种大鼠(WKY)脑组织神经元的病理改变。方法采用尾动脉测压法测定6周龄SHR、17周龄SHR和17周龄WKY的收缩压、舒张压、平均压;苏木精-伊红(HE)染色观察脑皮质神经元形态学改变,免疫组化检测脑皮质神经元数量改变。结果SHR组收缩压、舒张压和平均动脉压明显高于WKY组(P<0.05),且17周龄SHR较6周龄SHR血压升高明显(P<0.05)。SHR较WKY脑皮质神经元排列疏松不均,形态不规则,神经细胞数量减少(P<0.05),17周龄SHR较6周龄SHR神经元细胞形态较紊乱、结构更疏松、神经数目减少更明显(P<0.05)。结论长期高血压可导致大鼠的脑神经元损害明显,会导致神经元形态改变以及神经元的丢失。