灵芝康爱芝宝增强环磷酰胺抑制小鼠乳腺癌肺转移的增效减毒作用

目的探讨灵芝康爱芝宝(GanoExtra)与环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)联用对抑制小鼠乳腺癌肺转移的增效减毒作用以及对免疫功能的影响。方法通过CCK-8实验验证GanoExtra对肿瘤细胞MCF-7和4T1的毒性;尾静脉注射4T1细胞建立小鼠乳腺癌肺转移模型,设立4T1模型组、CTX组、GanoExtra组和GanoExtra+CTX组,另设对照组。21 d后麻醉处死小鼠,记录小鼠体重、肺转移灶数;肺和脾脏系数;测定小鼠脾脏细胞的活性和NK细胞的活性;测定小鼠血样中各细胞数量;流式细胞术测定血样中CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的含量;ELISA法检测血清中TNF-α和IL-6含量;HE染色法观察肿瘤及各组织病理形态学变化;CFSE染色测定GanoExtra对CD8^(+)T细胞的增殖作用。结果在体外,GanoExtra可明显抑制MCF-7和4T1肿瘤细胞活性;在乳腺癌肺转移模型中,与模型组相比,GanoExtra组小鼠脾脏系数和血液WBCs含量明显降低,RBCs、NK细胞、脾细胞活性、CD3^(+)和CD8^(+)细胞比例明显升高;治疗结束后,与CTX组相比较,GanoExtra+CTX组肺转移灶数和肺脏系数明显降低,小鼠血液HGB、CD8^(+)细胞、IL-6和TNF-α明显升高。在体外10 mg·L^(-1)的GanoExtra可明显促进CD8^(+)T细胞增殖。结论GanoExtra可以提高CTX对肿瘤转移的抑制作用,减少由于CTX导致的不良反应,具有促进CD8^(+)T细胞增殖以增强机体免疫疗效的保健功能。

福建野生紫芝资源开发利用Ⅱ．“闽紫96”(中国灵芝)

由福建野生紫芝人工驯化得到的栽培菌株“闽紫96”,子实体中型,菌盖大小7．0～9．0×10．0～17．3cm,其担孢子形态饱满,6．84～7．37×10．26～11．05μm,较灵芝担孢子大;标本(HMAS 77207)经鉴定确认为紫芝(Ganoderma siruense J．D．Zhao,L．W．Hsu et X．Q．Zhang),是符合《中华人民共和国药典》记载的灵芝药材的来源菌物。2004-2005年,采用阔叶树枝桠材栽培“闽紫96”,推广栽培面积860m^3(菌材),平均年产量为12．70 kg/m^3(干品/菌材)。将“闽紫96”子实体超微粉碎加工成300目超细粉。扫描电镜观察可见:其超细粉呈纤维状,以分散、破碎的茵丝片段形态存在,长度范围为10～50μm,直径1．2～4．5μm不等;激光粒度检测结果表明:超细粉的表面积达到227．54 m^2/kg,D97=63．8μm。化学成分分析结果表明:“闽紫96”超细粉的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、总糖、灰分及多糖含量分别为4．2 g/100g、10．84g/100g、3．71 g/100g、36．5g/100g、30．2g/100g、1．7 g/100g和1．3 g/100g;所含17种氨基酸总量为9．30 mg/100mg,其中必需氨基酸占65．7%;其脂肪酸构成以油酸(45．5%)、亚油酸(27．7%)及棕榈酸(18．8%)为主。此外,其重金属元素Pb,As,Hg,Cd等含量分别为＜0．2 mg/g、0．13 mg/g、0．072 mg/g、0．24 mg/g,符合国家商务部《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准》(WM/T2-2004)要求。

福建野生紫芝资源的开发利用Ⅰ.硬孔灵芝

驯化成功一种福建野生紫芝,并获得—个适于推广栽培的菌株紫芝S2(黑).采用扫描电镜观察紫芝S2(黑)显微结构,其担孢子形态结构与紫芝相似,大小为6.84-7.37μm×10.26-11.05μm;在其子实层发现一种带小梗(长约1μm)的球形小孢子(直径约2μm),表面有刺毛状纹饰.经鉴定确认紫芝S2(黑)为灵芝亚属紫芝组的硬孔灵芝(Ganoserma duropo-raLloyd),标本号为HAMS 95275.采用阔叶树边材栽培紫芝S2(黑)菌株,当年栽培产量可达22.03?24.10 kg.m-3,平均可达23.15 kg.m-3;2004-2005年大面积推广应用获得成功,累计栽培2777.29 m3,收获干芝总量达64.3 t.采用超声波循环提取、真空浓缩、高速离心喷雾干燥将其子实体加工成浸膏粉,产品检测结果表明,产品中水分、粗蛋白、多糖及灰分含量分别为4.4%、19.1%、36.2%和7.16%,其重金属元素Pb(<0.5μg.g-1)、As(0.68μg.g-1)、Hg(0.011μg.g-1)、Cd(0.44μg.g-1)的含量较低,达到药用植物及制剂进出口绿色行业标准(WM2-2001)限量要求.采用超声波循环提取技术从子实体提取分离得到总多糖,气相色谱分析表明其单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖,摩尔比为0.39∶4.48∶1,以甘露糖为主.

一株野生树舌灵芝菌株鉴定及其液态发酵特性

为进一步丰富灵芝真菌资源,对从野外桃树上采集的灵芝子实体,采用形态学观察和ITS序列比对进行菌种鉴定,并对其摇瓶发酵液的菌丝体生物量和胞内外代谢物特性进行分析。结果表明:该灵芝菌株在分类上属于多孔菌科灵芝属,学名为树舌灵芝,序列上传GenBank,登录号为OK037622。液态发酵研究表明,其菌丝体生物量为15.16 g∕L,底物葡萄糖利用率为77.63%,胞内外多糖含量和质量浓度分别为16.04 mg∕g和1.23 g∕L,胞内代谢物主要有糖醇类(45.07%)、糖类(40.05%)、脂肪酸类(13.33%),胞外代谢物主要有氨基酸类(40.02%)、糖类(15.74%)、糖酸类(12.09%)、糖醇类(9.85%)、脂肪酸类(6.28%)、有机酸类(5.82%)、酯类(4.34%)、醇类(2.83%)、核苷类(2.79%)。该研究可为下一步开展灵芝研究提供菌种准备,并为后续的开发应用提供参考。

高效液相色谱测定灵芝孢子油番茄红素复合制剂中麦角甾醇含量的方法及验证

建立了用高效液相色谱分析灵芝孢子油番茄红素复合制剂中麦角甾醇的方法。采用ZORBAX Eclipse Plus色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为282 nm。方法学验证结果表明,麦角甾醇在1.01~100.75 mg·L^(-1)内呈良好的线性关系,R^(2)为0.9999,样品加标平均回收率为102.26%,RSD为1.28%。该方法简便,精密度和稳定性良好,可为灵芝孢子油番茄红素复合物制剂及其相关产品的质量控制方法提供参考。

灵芝菌株固体发酵对枇杷叶主要活性成分的影响

采用灵芝固体发酵枇杷叶,筛选出了适合发酵的灵芝菌株并分析了固体发酵前后枇杷叶中主要活性成分的变化。本文选用8个灵芝菌株,根据不同灵芝菌株在枇杷叶基质中的生长情况选出最适合发酵的菌株,并通过灵芝菌株固体发酵三个品种的枇杷叶,研究发酵前后三种枇杷叶中多糖、总黄酮、三萜、总蛋白等活性成分的变化。结果表明:适宜发酵的灵芝菌株为松杉灵芝,经过灵芝菌株发酵枇杷叶后,不同品种的枇杷叶中多糖平均增长率为15.40%、总蛋白平均增长率为43.60%、三萜含量平均降低30.08%、黄酮含量大幅度降低视为未检出。

灵芝孢子油脂肪酸组分的分析

采用气相色谱与质谱(GC-MS)联用分析,从超临界CO2萃取孢子油中鉴定出18种脂肪酸成分,包括6种不饱和脂肪酸、7种饱和脂肪酸、2种环链脂肪酸,以及己酸、辛酸、壬酸等短链脂肪酸。GC定量分析结果表明:灵芝孢子油中检出9种已知脂肪酸,不饱和脂肪酸总量为73.6%;其中,主体成分油酸(C18∶1)、亚油酸(C18∶2)和棕榈酸(C16∶0)等含量分别为57.5%、13.4%、19.6%;此外,不饱和脂肪酸十六碳烯酸(C16∶1)、亚麻酸(C18∶3)等不饱和脂肪酸含量为2.2%、0.5%。

灵芝及灵芝孢子提取物的抗肿瘤及对DNA拓扑异构酶作用的研究

目的:观察灵芝子实体水提物及醇提物混合品(灵芝提取物)、灵芝孢子粉提取物(油)的体内外抗肿瘤作用,并测定它们对DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的作用。方法:台盼蓝计数法、MTT法观察体外对肿瘤细胞的抑制作用;应用小鼠移植瘤模型研究体内抗肿瘤作用,同时测定荷瘤小鼠的胸腺指数及脾指数;DNA超螺旋解旋法测定拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ活性。结果:灵芝提取物对K562、HL60、SGC-7901细胞作用24h的IC50值分别为0.44mg/ml、0.39mg/ml、0.90mg/ml,灵芝孢子油对K562、HL60、SGC-7901细胞作用24h的IC50值分别为1.13mg/ml、2.27mg/ml、6.29mg/ml;体内实验中,对S180、H22移植瘤株的抑制率灵芝提取物4g/kg分别为39.1%、44.6%,灵芝孢子油1.2g/kg分别为30.9%、44.9%;灵芝提取物1g/kg和2g/kg对S180的抑制率分别为15.6%和19.0%,对H22的抑制率分别为28.8%和38.5%;灵芝提取物对荷瘤小鼠的免疫功能有一定的上调影响,灵芝孢子油则无明显作用;两者对拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性均有抑制作用。结论:灵芝提取物、灵芝孢子油均具有体内外抗肿瘤作用,二者的抗癌机制与抑制拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性有关。

枇杷枝屑代料栽培灵芝对其主要活性成分的影响

目的:筛选以枇杷枝屑代料栽培灵芝的最佳配方,为实现高产量和生产高品质的灵芝提供参考依据。方法:添加不同比例枇杷枝屑代料栽培灵芝,测定灵芝子实体生物转化率、孢子量及其多糖、三萜及黄酮含量。结果:枇杷枝屑代料栽培灵芝可正常出芝,产生并释放孢子,与杂木屑代料栽培相比,枇杷枝屑添加量为80%时,生物转化率增加了11.34%,但孢子产量差异不大;枇杷枝屑添加量为90%时,多糖含量增加了32.29%,三萜含量增加了30.58%;枇杷枝屑代料栽培灵芝对黄酮的影响不大。结论:枇杷枝屑代料栽培灵芝能提高灵芝的品质,根据综合评分枇杷枝屑添加量以80%为最适合。

灵芝三萜组分GLA体内外抗肿瘤作用的研究

目的评价灵芝三萜组分GLA的体内外抗肿瘤活性。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法体外检测GLA对多种肿瘤细胞株的生长抑制作用;建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,小鼠S180肉瘤移植瘤模型和人结肠癌Colon26裸小鼠移植瘤模型,评价GLA的体内抗肿瘤活性。结果 GLA对人肝癌细胞株SMMC-7721、人早幼粒白血病细胞株HL60和人Burkitt淋巴瘤细胞株CA46有较强抑制作用,IC50分别为为0.50,0.52,0.53 mg/mL,对人肝癌细胞株HepG2、人结肠癌细胞株SW480、人慢性粒细胞白血病细胞株K562和人胃癌细胞株SGC-7901也有一定的抑制作用,IC50分别为0.70,0.82,0.85 mg/mL和0.97 mg/mL,对人肺腺癌细胞株SP-CA-1和人恶性神经母细胞瘤株SH-SY5Y基本无抑制作用;体内实验表明,GLA在高剂量2 g/kg对小鼠H22肝癌细胞、小鼠S180肉瘤细胞及裸小鼠Colon26结肠癌细胞生长有一定抑制作用,其抑瘤率分别为65.6%,50.1%和46.5%。结论体内外试验均表明灵芝三萜组分GLA有较强的抗肿瘤作用。

肿瘤热休克蛋白70联合灵芝孢子粉对荷瘤小鼠的治疗作用

目的研究肿瘤热休克蛋白70(HSP70)与灵芝孢子粉联合运用对荷瘤小鼠的治疗作用。方法液相色谱法纯化小鼠肝癌细胞株中的HSP70,运用SDS-PAGE及Western blot对纯化产物进行定性分析,再用毛细管电泳鉴定其浓度。通过动物实验,观察HSP70与灵芝孢子粉单独应用及联合应用的抗肿瘤作用。ELISA法测免疫小鼠血清中的IFN-γ、CXCL-9、CXCL-10的水平。结果 HSP70与灵芝孢子粉联合应用较单独应用的治疗效果更明显。单独应用灵芝孢子粉能延长荷瘤小鼠的生存期限,其中1只获得长期带瘤生存,而HSP70可使40%荷瘤小鼠的肿瘤全部消退,获得长期无瘤生存,与对照组相比较差异显著(P<0.01)。联合应用组40%荷瘤小鼠的肿瘤完全消退,3只小鼠获得长期生存,其中2只为无瘤生存,且肿瘤体积及质量均较分别单独应用组差别显著(P<0.05或P<0.01),平均生存期>(84.6±7.8)d,与对照组相比差异显著(P<0.01)。两药单独应用组、联合应用组血清IFN-γ、CXCL-9、CXCL-10水平均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。联合应用组血清IFN-γ、CXCL-9、CXCL-10水平较单独应用组差别显著(P<0.05或P<0.01)。结论 HSP70与灵芝孢子粉联合应用对荷瘤小鼠有明显的治疗作用,可明显抑制肿瘤进展,提高生存率。以上结果对研究人类恶性肿瘤的免疫治疗具有较为重要的借鉴意义。

枇杷枝屑代料栽培对不同菌株灵芝品质的影响

以5个不同的灵芝菌株为试材,采用枇杷枝屑代料栽培,以杂木栽培灵芝为对照,统计不同菌株灵芝子实体生物转化率、孢子量并检测不同菌株灵芝多糖、三萜、黄酮的含量,明确不同菌株灵芝子实体品质的差异,为更好地利用枇杷枝屑代料栽培灵芝选择菌株提供参考依据。结果表明:枇杷枝屑代料栽培灵芝对灵芝品质影响最大的是多糖含量明显增加,其次是三萜含量,对黄酮含量影响不明显;各菌株子实体对多糖、三萜含量提高幅度有差异。

基于近红外光谱和化学计量学方法的灵芝孢子油识别研究

采用近红外透射法建立了一种灵芝孢子油识别方法。分别在灵芝孢子油中掺入葵花油、薏仁油、花生油、玉米油和食用调和油。这些掺杂油品的体积百分比范围为0～100%。采用近红外透射法进行测定。选择最佳的光谱波段,然后用偏最小二乘(Partial Least Squares,PLS)法分别建立了定量分析模型。对于不同比例的掺杂油料,预测相对误差范围在-0.357～0.435之间。研究结果表明,基于化学计量学和近红外光谱技术的分析手段可以作为一种简便、快捷、准确、廉价的方法应用于油类品种识别和掺杂量检测中。

枇杷枝屑代料栽培灵芝的优势菌株筛选

通过枇杷枝屑代料栽培试验,比较了10个灵芝菌株菌丝和子实体生长状况及生物学效率等指标。结果表明:圆芝8号和大红芝2个菌株菌丝生长速度较快,子实体产量高,商品形状较好,适于枇杷枝屑代料栽培。

灵芝康葆胶囊中多糖的测定

目的建立灵芝康葆胶囊多糖含量的测定方法。方法采用水提、醇沉的方法提取分离灵芝康葆胶囊中多糖,以葡萄糖为标准液绘制标准曲线,用分光光度法测定多糖含量,检测波长为610nm。结果灵芝康葆胶囊中多糖含量为17.18%,平均回收率为98.75%。结论该方法简便、快速、重现性好,可作为灵芝康葆胶囊质量控制的一种方法。

不同生长期灵芝子实体三萜酸和多糖含量测定

分别采用HPLC法和药典法测定不同生长期灵芝子实体中三萜酸和灵芝多糖的含量。HPLC法色谱条件：色谱柱为Alltech Alltima C_（18）柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.04%甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 m L/min,柱温15℃。结果：灵芝酸C_2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸A、灵芝酸D、灵芝烯酸D和灵芝酸C_1的线性范围为5.9~42.0μg/m L,r为0.999,加样回收率为96.42%~104.14%。表现方法可行、重现性好,能定量测定灵芝中三萜酸和多糖的含量。

不同枇杷枝屑配方对灵芝栽培特性和品质的影响分析

通过不同枇杷枝屑配方代料栽培灵芝,对灵芝的菌丝生长、生长周期、商品性状、生物学效率等栽培特性分析,以及多糖、三萜含量与重金属、农残含量等品质分析。结果表明:枇杷枝屑可作为灵芝的栽培原料,栽培出的灵芝子实体形态正常,与杂木屑代料栽培的基本一致;菌丝生长速度快0.15~1.22mm·d^(-1),且随着枇杷枝屑量的增加而加快;生长周期短2~8d,但随着枇杷枝屑量的增加而延长;产量高3.94~7.31g,生物学效率高1.02%~1.89%,但随着枇杷枝屑量的增加而降低;多糖、三萜含量随着枇杷枝屑量的增加而增多,多糖含量有的高0.19~2.40mg·g^(-1),三萜含量有的高0.14~1.60mg·g^(-1);枇杷枝屑代料栽培的灵芝重金属、农残含量均符合检测标准,枇杷枝屑作为灵芝的栽培原料是安全的。

全芝孢子粉对化学性肝损伤保护作用的研究

目的探讨全芝孢子粉对化学性肝损伤保护作用。方法分别以0.33、0.67、2.00g/kgBW三个剂量对小鼠每日进行经口灌胃,连续30d后给予CCl4染毒,取血清测定ALT、AST,同时取肝脏进行组织病理学检查。结果CCl4模型对照组小鼠的ALT、AST含量比空白对照组高(P<0.05),低、中剂量组的ALT值与CCl4模型对照组比较,有下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论全芝孢子粉对CCl4化学性肝损伤有保护作用。

灵芝孢子油急性毒性及致突变性研究

目的了解灵芝孢子油的毒理学安全性。方法小鼠急性毒性试验和遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)。结果灵芝孢子油的小鼠经口LD50>20 g.kg-1BW,为实际无毒级物质;在Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验中均呈阴性反应,未显示致突变作用。结论灵芝孢子油基本无毒性和无致突变性。

复方灵芝粉对小鼠辐射保护作用的研究

目的探讨复方灵芝粉对小鼠的抗辐射保护作用。方法复方灵芝粉0.33、0.67、2.00 g.kg-1(分别相当于人体推荐量的5倍、10倍、30倍剂量)给小鼠灌胃,模型对照组给予蒸馏水。14 d后以钴60 3 Gy剂量射线对小鼠进行一次性全身照射,辐照后继续给予小鼠受试物至完成各项测定。结果复方灵芝制剂能增加小鼠外周血白细胞数、增加小鼠骨髓细胞DNA含量、升高小鼠血清溶血素水平,对小鼠的体重增长无影响。结论复方灵芝粉具有抗辐射作用。