弓形虫对雄性动物生殖功能的损伤

刚地弓形虫是一种胞内寄生原虫,在世界范围内广泛存在,几乎可以感染所有的温血动物,严重危害人类及各种温血动物的健康。研究表明,弓形虫感染雄性动物会导致生殖系统的多方面损伤,包括组织器官损伤、激素代谢紊乱、细胞代谢调节等多方面稳态维护指标的改变以及精子结构和功能的损伤,是目前研究的热点和趋势。尽管近年来多项研究通过蛋白质组学和转录组学对弓形虫感染引起的雄性动物生殖障碍机制进行了探究,但弓形虫损害生殖机能的机制依旧不清晰。论文通过对近年来弓形虫对生殖细胞致病机制的相关研究进行回顾,在前人研究的基础上对弓形虫感染可能对雄性动物生殖机能造成的影响和分子机制进行讨论。

福建省蛇源裂头蚴的分子鉴定及遗传分析

裂头蚴病是由于裂头蚴感染引起的一种人兽共患病,为了对福建省养殖蛇类的裂头蚴感染情况进行调查并鉴定虫种,对采自福建省三明市、漳州市和南平市等地蛇场的蛇类进行剖检,分离得到了裂头蚴,记录寄生部位和数量。提取裂头蚴虫体基因组,采用PCR对虫体ITS、NAD4和COX3基因进行了扩增。同时,将扩增得到的目的基因连接到pEASY-Blunt Simple载体上,转化Trans I-T1感受态细胞,培养得到单菌落,对菌落进行扩增测序。将测序结果与NCBI公布的裂头蚴ITS、NAD4和COX3基因序列进行比对分析,测定突变率和位点,并且进行样本之间的同源性分析和测定遗传距离。结果发现,三明市、漳州市和南平市某蛇场裂头蚴的感染率分别为75%、20%和0。分离到的裂头蚴ITS基因序列长为1360 bp~1380 bp,与NCBI中Spirometra erinaceieuropaei(FJ886747.1)的ITS基因同源性为95.70%~98.68%,样本之间平均遗传距离为0.0016;分离到的裂头蚴NAD4基因序列长为356 bp~650 bp,与NCBI中Spirometra erinaceieuropaei(HM475076.1)的NAD4基因同源性为96.73%~100%,样本之间平均遗传距离为0.0041;分离到的裂头蚴COX3基因序列总长为379 bp~408 bp,与NCBI中Spirometra erinaceieuropaei(HM475033.1)的COX3基因同源性为98.94%~100%,样本之间平均遗传距离为0.0038。结果表明,此次分离得到的裂头蚴虫体的ITS基因、NAD4基因和COX3基因与欧猥迭宫绦虫裂头蚴同源性较近,证明此次分离的蛇源裂头蚴属于欧猥迭宫绦虫裂头蚴。同时,经过对各虫体间NAD4和COX3基因分析发现,不同地区的裂头蚴虫体在进化树上存在分支。

福建某獭兔场兔艾美耳球虫感染情况调查及种类鉴定

为掌握福建某规模化獭兔场兔球虫病的流行情况,采用麦克马斯特计数法（McMaster’s method）和饱和氯化钠溶液漂浮法,对采集的494份獭兔粪便样品中兔球虫感染情况和卵囊种类进行调查分析。结果显示,该獭兔场兔球虫总感染率和平均每克粪便卵囊数（OPG值）分别为87.45%和2.56×104,各日龄段均有感染,其中以40日龄左右兔和65日龄左右兔感染率最高,分别达98.61%和98.95%;30日龄以下哺乳仔兔感染率和OPG值均最低,分别为19.23%和331,且该场兔球虫卵囊的OPG值分布符合负二项分布。本次调查共检出11种兔艾美耳球虫,均为混合感染,感染球虫种类多为3~7种;其中感染比例最高的4种兔球虫依次为穿孔艾美耳球虫（20.15%）、中型艾美耳球虫（16.79%）、小型艾美耳球虫（13.94%）和大型艾美耳球虫（13.48%）。

采用Mini-Flotac和PCR方法检测圈养野生动物肠道寄生虫

为调查福建地区圈养野生动物肠道寄生虫感染情况,本研究采集福州动物园和龙岩梅花山华南虎繁育研究所动物粪便样品共70份(包含28种动物种类),采用Mini-Flotac检测方法对粪便样品进行饱和盐水漂浮法检测,同时采用基于SSU rRNA序列的PCR扩增方法对粪便样品进行芽囊原虫检测,并对获得的阳性分离株进行基因亚型分析。Mini-Flotac检测结果显示,70份样品中寄生虫阳性粪便为42份,总感染率为60.00%,感染强度(EPG或OPG值)范围为100~34 800。PCR扩增结果显示,70份样品中共检测到芽囊原虫阳性分离株10个,感染率为14.3%(10/70),阳性样品分别为猕猴、赤猴、孔雀粪便样品各1份以及梅花鹿源样品7份;进一步的基因亚型分析结果显示,扩增的10份芽囊原虫阳性样品来源于5个基因亚型,分别为ST1(1)、ST3(1)、ST6(1)、ST10(6)及ST14(1),其中ST1、ST3和ST6为人兽共患亚型,ST10和ST14为动物特异性亚型,且ST10在梅花鹿中感染普遍。研究结果提示福建圈养野生动物肠道寄生虫的感染情况较严重,且存在人兽共患基因亚型芽囊原虫风险。研究结果为福建野生动物肠道寄生虫病的防治提供了参考依据。

联合使用药物对澳洲龙纹斑鱼种感染小瓜虫的影响

淡水鱼类小瓜虫病(白点病)是由多子小瓜虫(I.multiifliis)引发的一种重要原虫病,其对澳洲龙纹斑(M.peelii peelii)苗种阶段鱼体有强致病力,可导致澳洲龙纹斑苗种全部死亡。为合理用药防控澳洲龙纹斑苗种培育阶段小瓜虫感染,本实验选取平均体重为14.94±3.28 g,平均体长为11.57±2.20 cm的澳洲龙纹斑鱼种,自然感染小瓜虫后,采取具有抗小瓜虫、抗继发感染和促进上皮组织收敛愈合的3种药物联合使用,以小瓜虫感染率、感染强度和鱼种死亡率等指标,观察和评估联合使用药物对澳洲龙纹斑鱼种小瓜虫病防控效果。结果显示,药物实验组澳洲龙纹斑鱼种60 d内发生零星死亡,总死亡率为5.6%;对照组感染小瓜虫后陆续死亡,感染后第11 d感染率上升为100%,死亡率达50%,第16 d时澳洲龙纹斑鱼种全部死亡。实验组澳洲龙纹斑鱼种鳃部、背鳍和体表皮肤小瓜虫感染率和感染强度均显著低于对照组(p<0.01)。表明参照本研究联合使用药物可有效控制澳洲龙纹斑苗种感染小瓜虫,使澳洲龙纹斑苗种小瓜虫病得到有效的控制。本研究结果对澳洲龙纹斑苗种小瓜虫病防控具有借鉴意义。

实验猕猴感染弓形虫及衣原体血清学检测

为了解福建省计划生育科学技术研究所实验猕猴弓形虫和衣原体感染情况,采用改良凝集试验(MAT)和正向间接血凝试验(IHA)对123只实验猕猴血清进行弓形虫抗体(IgG)和衣原体抗体(IgG)检测。检测结果显示,实验猕猴弓形虫和衣原体的抗体总阳性率分别为4.88%(6/123)和3.25%(4/123),弓形虫与衣原体抗体滴度的方差值均小于平均值,说明其滴度分布为均匀分布。试验结果对实验猕猴弓形虫病和衣原体病的预防提供了科学依据,并具有重要的公共卫生学意义。

弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能及免疫原性研究的新进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)可引起严重的人兽共患弓形虫病,给全世界经济造成巨大的损失,给公共卫生安全带来巨大的隐患。致密颗粒(dense granule)分泌的致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)参与调节纳虫泡(parasitophorous vacuole,PV)及纳虫泡膜(parasitophorous vacuole membrane,PVM)的形成并能维持其结构稳定性,部分GRAs可参与宿主细胞的转录。近几年来,不断发现了多种新的GRA蛋白家族新成员,并随着对该家族成员研究的逐步深入,发现GRAs是研制抗弓形虫疫苗的候选分子之一。本文综述了弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能和免疫原性研究的新进展,旨在为研究弓形虫致病机理和研发新的抗弓形虫疫苗提供思路。

澳洲龙纹斑鱼种生长特性研究

在福建山区养殖条件下,进行澳洲龙纹斑Maccullochella peelii peeli鱼种的饲养试验。澳洲龙纹斑鱼种的平均体重和全长分别为(1.29±0.23)g和(4.56±0.30)cm;试验期水温22~28℃,投喂粗蛋白51.2%的商品饲料。经97d培育,澳洲龙纹斑鱼种的平均体重和全长分别达(12.84±1.30)g和(10.03±0.36)cm。澳洲龙纹斑鱼种体重和全长特定生长率分别为2.37%和0.81%;该鱼种体重与全长的最优回归方程为幂函数方程W=0.016L^(2.884)。以Gompertz非线性生长模型算得澳洲龙纹斑鱼种体重和全长生长拐点分别为11.8g和8.5cm,拐点日龄分别为170d和149d;全长生长拐点日龄的出现先于体重生长拐点。

海带粗多糖对斜带石斑鱼血清指标的影响

为了探讨日粮中添加不同剂量的海带粗多糖对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)血清指标的影响,作者选取规格一致的健康斜带石斑鱼120尾(平均体质量为90 g±2.6 g,平均体长为15 cm±2.25 cm),均匀分为4组,每组设两个重复,每个重复15尾。对照组日粮中不添加海带粗多糖,试验0.5%组、1.0%组、1.5%组日粮中分别添加0.5%、1.0%、1.5%的海带粗多糖。经过48 d的喂养后,测定各组斜带石斑鱼血清中白介素2(Interleukin-2,IL-2)、白介素6(Interleukin-6,IL-6)、干扰素α(Interferon-α,IFN-α)、总蛋白(Total Protein,TP)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、溶菌酶(Lysozyme,LZM)、过氧化物酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、补体3(Complement3,C3)、补体4(Complement 4,C4)等水平。结果表明,海带粗多糖能够不同程度地提高血清中IL-2、IL-6、IFN-α、TP水平,及LZM、CAT和SOD酶活性;降低C3、C4含量,及UREA、CREA水平和ALP酶活性;对AST和ALT酶活性影响不大。在3种添加比中,以0.5%的海带粗多糖添加剂量效果最明显。

三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR与ELISA检测弓形虫的比较

目的选取弓形虫基因组中高度保守的多拷贝基因529bp重复序列、ITS-1序列和B1基因作为real-timePCR检测的靶基因,建立检测弓形虫的三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法并且与ELISA检测方法进行比较。方法将529bp重复序列、B1基因、ITS-1序列的选定扩增序列进行克隆、测序构建标准品;将构建的3个标准品放在一个体系中进行扩增,进行三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR。结果 529bp、ITS-1和B1的标准曲线的相关系数(R2)均为0.998,并且扩增效率均为96.724%,扩增片段的Tm值分别为86.5±0.5℃、78.8±0.5℃、83.1±0.5℃;构建的三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR特异性试验表明,529bp、ITS-1和B1有特异性的溶解曲线峰值分别是86.2℃、78.9℃和83.3℃,阴性对照无扩增曲线;敏感性试验表明,529bp、ITS-1和B1序列最低检出限分别为173copies/μL、123copies/μL、和135copies/μL;Tm值的批内、批间重复试验的变异系数均小于0.13%;ELISA检测猪弓形虫IgG抗体的阳性率41.72%,ELISA与荧光定量PCR检测核酸阳性符合率为53.44%(P<0.01)。结论建立弓形虫三重SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测技术具有高特异性和敏感性。

牡蛎粗多糖对免疫应激仔猪炎性细胞因子和PPARγ mRNA转录水平的影响

本试验旨在研究牡蛎粗多糖对脂多糖(LPS)刺激仔猪产生的免疫应激是否有缓解作用。选取30头(28±1)日龄的杜洛克×长白×大白三元阉公仔猪,按体重相近的原则,随机分为5个处理组(即空白对照组,免疫应激对照组,牡蛎粗多糖高、中、低剂量组),每组6头猪。空白对照组和免疫应激对照组饲喂基础日粮,牡蛎高、中、低剂量组分别饲喂添加1.2%、0.8%、0.5%牡蛎粗多糖的基础日粮。试验饲养30d后,免疫应激对照组、牡蛎粗多糖高、中、低剂量组按体重腹腔注射100μg·kg-1的LPS,空白对照组注射等量的生理盐水。各组于注射后3h采血,ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;剖检取肝、脾、肾上腺、淋巴结和胸腺,用RT-PCR检测PPARγmRNA的相对转录量。结果显示,应激对照组较其它各组炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平均有显著提高(P<0.05),牡蛎粗多糖低、中剂量组炎性细胞因子水平无显著性差异(P>0.05),2组与空白对照组相比也无显著差异(P>0.05),但2组和空白对照组与高剂量组相比IL-6与TNF-α水平显著降低(P<0.05)。牡蛎粗多糖高、中、低剂量组和空白对照组肝、脾、肾上腺和胸腺PPARγmRNA的相对转录量较应激对照组极显著降低(P<0.01),但是淋巴结PPARγmRNA的相对转录量高于应激对照组,且低、中剂量组PPARγmRNA的相对转录量较高剂量组更趋于生理状态下空白对照组的相对转录量。LPS作为免疫原可引起断奶仔猪产生免疫应激反应,在基础日粮中添加牡蛎粗多糖可以缓解免疫应激,且添加量在0.5%到0.8%区间时缓解效果较好。

菠萝蛋白酶部分酶学性质的研究

通过菠萝蛋白酶的最佳吸收峰、酶的浓度及大小,红外光谱分析和酶活性的测定,研究菠萝蛋白酶的部分性质。结果表明,菠萝蛋白酶具有热稳定性,其大小约为28.8kD,且最适温度为60℃,最适pH为7.5。Fe2+对菠萝蛋白酶有激活作用,Zn2+、Cu2+低浓度有促进作用,高浓度有抑制作用,NaCl对菠萝蛋白酶能起到一定的保护作用、KCl对酶反应影响不大,MgSO4·7H2O和无水CaCl2对菠萝蛋白酶活性均有一定程度的抑制作用。菠萝蛋白酶经pH2.5胃蛋白酶和pH3.2胃蛋白酶作用后,随处理时间的延长,其酶活力都呈下降的趋势。其中,pH2.5条件下的胃蛋白酶对菠萝蛋白酶活力的影响较大。表明在模拟猪胃条件下pH2.5胃蛋白酶对菠萝蛋白酶影响较大。

复方陈皮粉对猪胃肠道菌群多样性的影响

将60头试验猪随机分为2组,每组3个重复,每个重复10头猪;对照组和试验组分别饲喂基础日粮和添加0.2%复方陈皮粉的日粮,共计60 d;饲喂过程中定期采集新鲜粪便,采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)和末端限制性内切酶片段长度多态性(T-RFLP)指纹图谱技术研究饲喂复方陈皮粉对猪胃肠道菌群多样性的影响.结果表明,试验期间试验组的猪基本不腹泻,对照组有部分猪经常腹泻.分别对两组粪便样品的胃肠道微生物进行16S rDNA V3区扩增,再通过DGGE技术进行条带分离,DGGE图谱显示,猪胃肠道菌群物种丰富,两组样品之间存在明显的条带差异.对两组粪便样品胃肠道微生物16S rDNA全长进行扩增,用MspⅠ和HaeⅢ对扩增产物进行限制性酶切,再运用T-RFLP技术检测.通过RDP数据库查询比对,在两组粪便样品中,相同的T-RFs片段有27个,相对于试验组,对照组样品中差异部分片段对应的菌种多为致病菌.研究结果表明,临床上使用复方陈皮粉能有效预防猪腹泻等胃肠道疾病,这可能与药物能改善胃肠道微生态坏境,调节菌群平衡有关.

海带多糖对斜带石斑鱼生长性能及胃肠道消化酶活性的影响

为探讨海带多糖对斜带石斑鱼生长性能及胃肠道酶活性的影响。试验选用120尾平均体质量为(90±2.6)g的斜带石斑鱼,随机分为4组,每组2个重复,每重复15尾鱼,分别投喂海带多糖水平为0(CK组)、0.5%(F1组)、1.0%(F2组)和1.5%(F3组)的试验软颗粒料,经过48 d饲养期,测定生长性能、胃肠蛋白酶和二糖酶的活性。结果表明:F1和F2组的末均质量(FAW)、增重率(WGR)和鱼体丰满度(CF)均显著高于CK组(P<0.05),饲料系数(FCR)均极显著或显著低于CK组(P<0.01或P<0.05);F1组的内脏比和肝体比(HSI)也显著高于CK组(P<0.05)。F1组胃和肠蛋白酶及麦芽糖酶活性均极显著高于CK组(P<0.01),F2组均显著高于CK组(P<0.05);F1和F2组中肠段乳糖酶活性均显著高于CK组(P<0.05),与CK组相比,各试验组各肠段蔗糖酶活性虽有提高,但大体无显著差异(P>0.05)。可见,饲料中添加0.5%的海带多糖时,可明显改善斜带石斑鱼生长性能和提高消化酶活性。

菠萝蛋白酶体外抑制小肠黏膜上皮细胞黏附K88^+ ETEC的作用

采用体外细胞黏附模型,研究菠萝蛋白酶对K88+产肠毒素大肠杆菌(ETEC)黏附大鼠小肠黏膜上皮细胞的抑制作用.结果表明:菠萝蛋白酶能显著降低K88+ETEC的黏附率,且与庆大霉素的抑菌效果相当(P>0.05).由此可以推测,菠萝蛋白酶能体外抑制K88+ETEC菌毛黏附上皮细胞,阻止K88+ETEC对肠道的侵袭,为临床提供一定的理论依据.

福州动物园野生动物弓形虫感染的血清学调查及用药效果观察

采用改良凝集试验(MAT),对福州动物园27种110只兽类和鸟类动物血清作弓形虫抗体Ig G检测,然后用复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶性粉配合叶酸、葡醛内脂,对部分弓形虫阳性的野生动物进行治疗试验。弓形虫感染的血清学结果显示弓形虫的抗体总阳性率为22.7%(25/110):其中肉食性兽类组阳性率13.3%(2/15);植食性兽类组阳性率39.5%(15/38);灵长类组阳性率19.0%(4/21);鸟类组阳性率11.1%(4/36)。植食性兽类弓形虫感染阳性率显著高于其他动物。对动物群体中弓形虫抗体滴度分布的拟合显示,符合负二项分布。药物试验结果显示9只动物中治疗有效率为55.56%,转阴率11.11%,表明药物治疗试验效果明显。

福州动物园野生动物感染衣原体及弓形虫的血清学调查

采用正向间接血凝试验(IHA)和改良凝集试验(MAT),分别对福州动物园132只野生动物血清作衣原体和弓形虫抗体检测。动物园野生动物感染衣原体和弓形虫的血清学阳性率分别为24.42%(32/132)和23.48%(31/132);衣原体与弓形虫抗体滴度的倒数经对数化后的相关与回归分析显示二者呈显著负相关(r=0.6901,P<0.01),关联分析也显示衣原体和弓形虫抗体之间呈负关联(V=-0.104 9)。

弓形虫细胞核因子3基因的克隆及序列分析

为预测弓形虫细胞核因子3(TgNF3)基因作为抗弓形虫疫苗候选抗原的可能性,本试验以弓形虫RH株的总RNA为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增TgNF3基因并连接至pMD18-T载体。筛选阳性克隆后,测序鉴定。将测序结果正确的核苷酸序列翻译成氨基酸序列,运用生物信息学软件分析TgNF3蛋白的结构,预测抗原表位。结果显示,TgNF3基因长约950bp。TgNF3蛋白中包含1个跨膜结构域,9个α-螺旋区,4个β-折叠区,8个亲水区域和10个柔性区域,并预测含有9个线性B细胞抗原表位。结果表明,TgNF3蛋白可能具有良好的免疫原性,为研制以TgNF3为抗原的弓形虫亚单位疫苗及表位疫苗奠定了基础。

福建猫源弓形虫IgG抗体检测及PCR-RFLP基因分型与遗传变异分析

采用酶联免疫吸附(ELISA)试验对福建某花鸟市场采集的40份猫血液样本进行弓形虫IgG抗体检测,对抗体呈现阳性的血液样品进行弓形虫B1基因PCR扩增;对扩增结果呈现阳性的样本采用多位点巢式PCR-RFLP技术,在SAG1、5’SAG2、3’SAG2、Alt.SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1和Api co共12个位点进行弓形虫基因分型研究和部分位点的遗传变异分析。结果表明,40份血清中,19份血清呈弓形虫IgG抗体阳性,阳性率为47.5%,19份血清抗体呈阳性的血液样品中,B1基因PCR扩增出3份阳性样品,进一步多位点巢式PCR-RFLP分析和遗传变异分析发现,PCR阳性样品中的弓形虫基因型均表现为New Genotype型。

海藻多糖生物活性的研究进展

近年来,海藻多糖的生物活性得到深入研究,新的生物功效也逐渐被发现。为更好地利用海藻多糖,本文就海藻多糖的生物活性研究进展情况进行综述。