福建香蕉种质资源的研究与利用现状

香蕉种质资源研究是香蕉研究中的一个重要方面。本文概述了国内外香蕉种质资源的研究利用情况,香蕉种质资源的研究,已经从最初的形态学水平深入到了分子水平,分子标记和基因工程等新的手段和方法已经得到了广泛应用;分析了福建香蕉种质资源的研究现状,并对福建香蕉种质资源的研究发展方向作了讨论。

幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油（木奈）幼胚为材料，研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2，4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响，结果表明，长轴为5—7．9mm低温处理18h的幼胚，诱导胚性愈伤组织的效果最好；使用山梨醇（浓度为3％）为碳源、含氮量低的WPM培养基，胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基；幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2，4-D浓度为2．0mg／L，培养基中附加5．0mg／LAgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。

中国水仙花基因工程的研究现状

重点综述了中国水仙花香、花色、花发育、抗性和遗传转化等方面基因的研究现状;探讨了基因调控和改善花观赏价值的方法;简要指出了在研究中存在的问题及展望了其应用前景。

福建柚类种质资源的ISSR分析

从100条ISSR引物中筛选出14条具有多态性谱带的引物,对福建柚类16份种质资源进行ISSR分析。结果显示：14条引物共扩增出177个位点,有123个多态性位点,多态性百分率为69.49%,福建柚类种质资源的相似系数在0.5260.984之间。其中,‘胡柚’与‘三明金柚’相似系数最高,为0.984;‘澳洲柚’与‘土柚’相似系数最低,为0.526。相似系数在0.553处,16份种质可分为两大类,‘胡柚’、‘三明金柚’、‘澳洲柚’、‘福柚’及‘新路比葡萄柚’属第一大类,其余柚类种质为第二大类。

中国水仙遗传转化研究进展(综述)

中国水仙是我国传统名花,其栽培种一直存在三个问题:品种单一,繁殖速度有限,病毒积累严重。生物技术的发展为解决中国水仙目前存在的问题提供了新的途径。本文从外植体的预处理、愈伤组织和小鳞茎的诱导与分化、生根及移栽等方面概述中国水仙的组织培养进展,较详尽地阐述中国水仙基因工程的研究进展,并对中国水仙未来研究方向进行展望。

六月早柚果实常温贮藏期间糖酸含量变化

【目的】探究六月早柚果实常温贮藏过程中糖酸组分含量变化与其风味品质的关系,为优化柚类品种结构提供理论和实践依据。【方法】以六月早柚为试验材料,琯溪蜜柚为对照,应用超高效液相色谱法测定并分析六月早柚果实贮藏期有机酸组分(柠檬酸、苹果酸、奎尼酸、顺乌头酸、酒石酸、琥珀酸、α-酮戊二酸)和可溶性糖组分(葡萄糖、果糖、蔗糖)含量的变化。【结果】常温贮藏期间六月早柚汁胞总酸、柠檬酸和苹果酸含量增加,于贮藏35 d达到最大值,分别是同时期琯溪蜜柚的81.18%、84.17%和1.90倍;六月早柚葡萄糖和果糖含量先降低后增加,均在贮藏10 d出现最小值,分别为同时期琯溪蜜柚的1.30倍和1.47倍;蔗糖含量先增加后降低,在贮藏10 d出现最大值,仅为同时期琯溪蜜柚的84.45%;六月早柚糖酸比逐渐降低,贮藏35 d最小,是同时期琯溪蜜柚的1.27倍,且与苹果酸含量呈显著负相关(P<0.01)。【结论】常温贮藏期间六月早柚汁胞柠檬酸和蔗糖的含量较低,糖酸比及苹果酸、果糖和葡萄糖的含量较高,这可能是导致贮藏期六月早柚果实风味变化优于琯溪蜜柚的原因。

人参榕研究进展(综述)

概述了人参榕栽培繁殖、病虫害防治、采后贮运及出口贸易等方面的现状,并对今后研究进行展望。

柑橘基因组DNA快速提取及ISSR-PCR扩增体系优化

对CTAB-mini法进行改良,得到一种效率较高的柑橘DNA提取方法。试验结果表明,得到的高质量DNA适合柑橘ISSR分析。同时,采用正交设计对影响柑橘ISSR-PCR因子进行优化。试验结果表明:20μl反应体系中采用5ng模板DNA、0.35mmol/LdNTPs、0.15μmol/LPrimer、1UTaq酶和3μl10×Buffer(含Mg2+)为柑橘ISSR-PCR最优反应体系。

橄榄ISSR-PCR反应体系的优化

采用正交设计和单因素试验,以BDB(CA)7为引物,对ISSR-PCR扩增橄榄基因组DNA的主要影响因子进行了筛选和分析,优化了适宜于橄榄ISSR-PCR的扩增体系。结果表明,20μL的反应体系中采用40ng的模板DNA,0.2mmol/LdNTPs,0.25μmol/LISSR引物、1UTaq聚合酶,以及51.6℃-53℃的复性温度为橄榄ISSR-PCR扩增的最优条件。

琯溪蜜柚汁胞在发育与粒化过程中APX活性变化及同工酶分析

对不同发育时期的琯溪蜜柚(Citrus grandis‘Guanximiyou’)汁胞进行APX活性测定及同工酶分析。结果表明,随着汁胞的发育,APX活性增大;而柚子衰老腐烂时,APX活性迅速降低。APX同工酶随着汁胞发育而发生变化,花后150d的APX同工酶增加了1个组分(迁移率0.66),且随着汁胞的成熟,其表达量增加。花后230d时柚子开始衰老腐烂,花后242d已难以看到大部分APX同工酶酶谱。粒化汁胞的APX活性比正常汁胞大,同工酶酶谱亮度和清晰度也大,推测溪蜜柚汁胞在粒化过程中APX可清除活性氧自由基,抵抗氧化损伤。

24份甜橙种质资源的ISSR分析

从97条ISSR引物中筛选出14条能扩增出清晰的具有多态性DNA谱带的引物,分别对24份甜橙种质基因组总DNA进行PCR扩增,共获得147个位点,其中54个位点具有多态性。利用SPSS13.0软件对数据进行分析,结果显示,24份甜橙种质间相似系数在0.815~0.983之间,表明24份甜橙种质间亲缘关系较近;相似系数在0.851处,24份甜橙种质被分为3组,ISSR分子标记的分析结果与形态学观察及传统分类结果基本吻合。通过对PCR扩增谱带的分析,结果显示,引物CW39119为‘奈维林娜脐橙’种质的特异性标记,引物CW32439为‘红肉脐橙’红梗与白梗种质的特异性标记,引物CW32445为‘纽荷尔脐橙’与‘脐橙52号’种质的特异性标记。

成熟软化期苦瓜果实均一化全长cDNA文库的构建与EST分析

以苦瓜(Momordica charantia L.)1/4黄期果实为材料,采用DSN(duplex-specific nuclease)均一化与SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术相结合,构建成熟软化期苦瓜果实均一化全长cDNA文库。经检测,该文库的转化效率为3600000个菌落/μL连接产物,其平均插入片段大小为1.4kb,重组率为98.0%,表明文库质量较好。随机挑取768个克隆进行EST测序,获得有607个高质量的EST,其中17个contig和562个singleton。冗余率为7.41%,文库的全长率67%。对测序结果进行注释和归类分析表明,已知功能基因大部分与催化活性、蛋白结合、转录调节活性、转运活性和酶调控活性有关分析,结果表明文库的可靠性好。发现有若干个与胞内蛋白质降解、细胞壁代谢、乙烯合成、信号传导和抗逆等可能与苦瓜果实成熟软化相关的新基因。

苦瓜果实β-半乳糖苷酶基因的克隆、表达及亚细胞定位

根据已构建苦瓜果实均一化文库中获得的1个与β-Gal基因相关的EST序列,采用经3'RACE技术,克隆获得1个苦瓜β-Gal基因的cDNA序列McGAL,全长为2261 bp,开放阅读框2160 bp,编码719个氨基酸。该基因在GenBank基因数据库的登录号为AFD54987.1。应用生物信息学软件对McGAL氨基酸序列分析表明,McGAL含有糖苷水解酶家族35的保守结构域G-G-P-[LIVM]-x-Q-x-E-N-E-[FY],C端不含凝集素结构域。二级结构显示,该酶含有α-螺旋(19.89%)、伸展链(26.98%)、β-转角(6.54%)和无规卷曲(46.59%)。McGAL氨基酸序列与鹰嘴豆、苜蓿、绿豆、大豆、羽扇豆的氨基酸序列的同源性分别达到73%、73%、73%、72%和71%。亚细胞定位结果表明,McGAL定位在线粒体膜上。荧光定量结果表明,McGAL在果实绿熟期表达量最高并随之下降,该基因可能与果实成熟软化初期相关。

荔枝ISSR扩增条件优化

对ISSR-PCR扩增荔枝基因组DNA的主要影响因子进行了筛选和分析。试验结果表明:20μl的反应体系中采用20ng的模板DNA,0.15μmol/LISSR引物、1.25U Taq DNA聚合酶,0.15μmol/L dNTP,以及50～54℃的复性温度为荔枝1SSR-PCR扩增条件的最佳选择。

琯溪蜜柚汁胞RNA提取方法的比较

比较了3种从琯溪蜜柚汁胞中提取RNA的方法,通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计检测,对提取所得RNA的完整性、纯度及浓度进行分析。试验结果表明,Trizol法适合琯溪蜜柚汁胞RNA的提取,能有效获得纯度高、完整性好的RNA样品,而且Trizol法步骤简单,RNA得率与质量均较高。通过RT-PCR检验表明该RNA适于后续分子生物学操作。

黄皮ISSR-PCR反应体系的优化

为应用ISSR分子标记对黄皮种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究,通过单因素和正交试验对ISSR-PCR反应体系进行优化。结果表明,采用改良SDS法提取的DNA条带完整、无RNA污染,适于ISSR-PCR扩增;黄皮ISSR分析最适的扩增体系是:20μl的反应体系中含30ng的模板DNA、1.5UTaqDNA聚合酶、0.4μmol/L引物、0.3mmol/LdNTPs以及引物(gA)8C的最佳退火温度为52.4℃。

四种枳实中药材柚皮甙、橙皮甙和辛弗林含量的比较分析

枳实是一种中药材,为来源于芸香科(Rutaceae)柑桔属(CitrusL.)和枳属(PoncirusRaf.)的部分植物干燥幼果.具有破气消积,化痰散痞的功效.本研究采用高效液相色谱法分别测定了绿衣枳实、鹅眼枳实、柚和酸橙(代代)中主要有效成分柚皮甙、橙皮甙和辛弗林的质量分数.结果表明,这4种枳实中药材在这几种有效成分含量上存在较明显差异.柚皮甙的质量分数以柚最高,可达13.872%;橙皮甙的质量分数以绿衣枳实最高,为0.100%;辛弗林的质量分数以鹅眼枳实最高,为29.128%.由于枳实药材的药性与其有效成分的含量密切相关,所以明确这4种枳实药材中有效成分的含量对药材的品质和用量都具有指导意义.

香蕉RAPD反应体系的建立

利用改良的CTAB方法从香蕉叶片中提取高质量的DNA。在参考一般RAPD分析反应程序的基础上,经过反复试验,确定适合香蕉PCR扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min;38℃退火1min;72℃延伸2min;循环45次;最后72℃延伸2min。PCR扩增的体系(总体积25μl)为:模板DNA20ng,dNTP200μmol/L,10×PCRBuffer2.5μl,引物0.20μmol/L,Taq酶0.75U,ddH2O17.85μl。

6种不同产地枳壳中化学成分含量的比较

采用反相高效液相色谱法,测定了6种不同产地枳壳中的黄酮类化合物柚皮苷、橙皮苷和生物碱辛弗林 的含量,比较这3种成分的相对比例。结果表明,由于产地不同,3种成分含量变化范围很大,柚皮苷含量介于12.05 ～59.80 mg·g-1、橙皮苷含量介于0.29～11.63 mg·g-1、辛弗林含量介于0.21～37.22 mg·g-1。

茉莉花JsPAL2基因的克隆与表达分析

为了研究茉莉花花香代谢相关分子机制,本研究基于茉莉花转录组测序结果,采用PCR技术从双瓣茉莉花花瓣的c DNA文库中克隆出苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)的全长c DNA,命名为Js PAL2。该c DNA的全长为2 181 bp,其中ORF为2 079 bp,编码693个氨基酸的蛋白,分子量为75 599.19 u。序列分析结果表明,该基因编码的氨基酸序列与油橄榄(Olea europaea)的PAL具有82%的同源性。利用100μmol/L的外源激素茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,Me JA)喷施成熟花苞,并采用荧光定量PCR技术检测Js PAL2在茉莉花发育过程、开放过程以及经Me JA处理过后花朵中的表达量变化。结果表明,在花蕾生长发育时期,Js PAL2的表达量随着天数的增加而升高,在5 d时达到最高;在不同开放时期,18:00花朵未开放时Js PAL2表达量最低,22:00花朵半开放时表达量最高;经外源茉莉酸甲酯处理后,Js PAL2的表达量明显增加,在处理后7 h达到最高,随后逐渐降低,推测该基因可能与茉莉花香气物质的合成有关,同时Me JA可能对其表达有诱导的作用。