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番木瓜果糖-2,6-二磷酸酶CpF2KP基因克隆和蛋白表达纯化
1
作者
左丽萍
曾秋霞
+4 位作者
赵晓兵
杨丽媛
徐良伟
赖娟
岳晶晶
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期614-624,共11页
番木瓜是岭南四大名果之一,在我国东南部地区广泛种植,因其具有食用和药用双重价值,因此深受人们的青睐。果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)是一个独特的双功能...
番木瓜是岭南四大名果之一,在我国东南部地区广泛种植,因其具有食用和药用双重价值,因此深受人们的青睐。果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)是一个独特的双功能酶,具有激酶功能域和酯酶功能域,能催化生物体内糖代谢的重要调节物果糖-2,6-二磷酸(Fru-2,6-P_(2))的合成和降解。为了研究番木瓜中编码该酶的基因CpF2KP的功能,得到目的蛋白尤为重要。本研究从番木瓜基因组中提取到CpF2KP基因的编码序列(coding sequence,CDS)序列,该基因CDS全长2274 bp。将该基因CDS全长扩增之后选用pGEX-4T-1载体进行原核表达。对载体pGEX-4T-1用EcoRⅠ和BamHⅠ进行双酶切,利用基因重组的方式将扩增序列构建到原核表达载体上。经过诱导条件探索,SDS-PAGE结果显示GST-CpF2KP重组蛋白的大小约为110 kDa,诱导CpF2KP蛋白表达的最适条件为:异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度为0.5 mmol/L,温度28℃。对诱导后的CpF2KP蛋白进行纯化,得到了纯化的单一目的蛋白。此外,检测了该基因的组织表达特性发现该基因在种子中表达量最高,在果肉中表达量最低。该研究为进一步深入揭示番木瓜CpF2KP蛋白的功能及研究该基因参与的生物学过程提供了重要基础。
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关键词
番木瓜
CpF2KP
原核表达
蛋白纯化
原文传递
题名
番木瓜果糖-2,6-二磷酸酶CpF2KP基因克隆和蛋白表达纯化
1
作者
左丽萍
曾秋霞
赵晓兵
杨丽媛
徐良伟
赖娟
岳晶晶
机构
福建农林大学基因组与生物技术研究中心、福建省海峡植物应用系统生物学重点实验室
福建农林大学
园艺学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第2期614-624,共11页
基金
福建省科技厅对外合作项目(2021I0009)
福建农林大学科技创新专项基金项目(CXZX2020091A)
泉州市科技计划项目(2021N044)。
文摘
番木瓜是岭南四大名果之一,在我国东南部地区广泛种植,因其具有食用和药用双重价值,因此深受人们的青睐。果糖-6-磷酸,2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(fructose-6-phosphate,2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,F2KP)是一个独特的双功能酶,具有激酶功能域和酯酶功能域,能催化生物体内糖代谢的重要调节物果糖-2,6-二磷酸(Fru-2,6-P_(2))的合成和降解。为了研究番木瓜中编码该酶的基因CpF2KP的功能,得到目的蛋白尤为重要。本研究从番木瓜基因组中提取到CpF2KP基因的编码序列(coding sequence,CDS)序列,该基因CDS全长2274 bp。将该基因CDS全长扩增之后选用pGEX-4T-1载体进行原核表达。对载体pGEX-4T-1用EcoRⅠ和BamHⅠ进行双酶切,利用基因重组的方式将扩增序列构建到原核表达载体上。经过诱导条件探索,SDS-PAGE结果显示GST-CpF2KP重组蛋白的大小约为110 kDa,诱导CpF2KP蛋白表达的最适条件为:异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度为0.5 mmol/L,温度28℃。对诱导后的CpF2KP蛋白进行纯化,得到了纯化的单一目的蛋白。此外,检测了该基因的组织表达特性发现该基因在种子中表达量最高,在果肉中表达量最低。该研究为进一步深入揭示番木瓜CpF2KP蛋白的功能及研究该基因参与的生物学过程提供了重要基础。
关键词
番木瓜
CpF2KP
原核表达
蛋白纯化
Keywords
papaya
CpF2KP
prokaryotic expression
protein purification
分类号
S667.9 [农业科学—果树学]
Q943.2 [生物学—植物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
番木瓜果糖-2,6-二磷酸酶CpF2KP基因克隆和蛋白表达纯化
左丽萍
曾秋霞
赵晓兵
杨丽媛
徐良伟
赖娟
岳晶晶
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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